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- 上海雅吉生物科技有限公司
- 101105-10
- 2025年07月13日
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- 供应商：
ACE
- 保存条件：
-20
- 规格：
10
5’RACE试剂盒具有下列特点： 1. 即开即用，客户不需要单独准备各种材料。
2. 反应条件经过精心优化，包括使用无 RNase H 活性的 MMLV 和优化的引物。
5’RACE试剂盒的原理如下图：
自备试剂：Poly(A) RNA（或总 RNA）、基因专一性引物 A、B、C、75%乙醇。
注意：自备的 基因专一性引物 A，B，C 的相对位置应该跟本手册产品介绍中的示意图一致。 运输及保存 低温运输、-20℃保存、有效期一年。
5’RACE试剂盒使用方法
1. 变性模板 RNA：将 1 μg mRNA 或 5 μg 总 RNA 加入到一个 RNase-free 的 PCR 管中，补 RNase-Free 水到 9 μL，65℃保温 5 分钟后短暂离心，立即放 冰上待用。如果 RNA 浓度偏低，体积超过 9 μL,可以使用本公司的核酸浓缩剂 （需另购,产品编号为 110801-30）浓缩到所需的体积。
2. 设置 RT 反应（用户可以根据需要设阴性对照）：在上步的含变性后的 RNA 模 板的 PCR 管中，按顺序加入：
3. 37℃保温 60 分钟， 42℃保温 30 分钟， 50℃保温 10 分钟，最后 75℃保温 10 分钟使逆转录酶变性。短暂离心 5 秒后待用。
4. 在 PCR 管中加入 40 μL 微量核酸沉淀剂（本产品含不溶的核酸助沉剂，用前 需要充分摇匀再取用），震荡混匀。
5. 室温12000 rpm离心15分钟，小心吸弃上清。此步沉淀可以去除多余的dNTP。
6. 加入 1mL 自备 75%乙醇，室温 12000 rpm 离心 5 分钟，小心吸弃上清。
7. 短暂离心数秒，小心吸弃残留液体后，稍微晾干后加入 20 μL RNase-free 水， 充分吹打溶解，得到 cDNA 溶液待用。注意：为保证加尾效率，溶解 cDNA 的 RNase-free 水最好不要超过 20 μL。
8. 在两个塑料离心管中按下表设置加尾反应（强烈建议做一组加尾阴性对照管）
9. 37℃保温 15 分钟进行加尾反应，然后 75℃保温 3 分钟灭活末端转移酶。 10. 分别加入 0.5 mL RNase-free 水稀释样品管和对照管中的加尾反应产物。此稀 释液将作为 PCR 的模板。 11. 第一轮 PCR：按下表分别使用不同体积的样品管稀释液和对照管稀释液做模板 设置 PCR 反应（单位：μL，下表只列出以样品管稀释液为模板的反应）。
5’RACE试剂盒相关产品如下：
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| Taylor法革兰氏染色试剂盒 |
| 包涵体大量纯化试剂盒 |
| 包涵体微量纯化试剂盒 |
| 包涵体中量纯化试剂盒 |
| 鼻病毒PCR检测试剂盒 |
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| 即用型PCR试剂盒3.0，含染料 |
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| 即用型热启动PCR试剂盒 |
| 即用型荧光定量PCR试剂盒（1mL） |
| 加A试剂盒 |
| 加T试剂盒 |
| 荚膜染色试剂盒 |
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| 结核杆菌荧光定量PCR试剂盒 |
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文献和实验具有遗传上共同体质特征的人群，人们称这种人群为人种。人种之间有明显的区别。所谓人种与群体大小无关，大的群体有：白色人种、黄色人种等，象暇夷人、日本人，那样的小群体也可以称之为暇夷人种、日本人种。人种，大体上可看作相当于动物学上的变种或地方类型。所谓人，由于过去人种间的混血等复杂问题，要想严格地按动物特性或动物学的分类范畴加以阐述是困难的。作为区分人种标志的体质特征在全人类间有很大的变异，而应选择有强烈遗传倾向的体质特征，具有这种性质的体质特征彼称为人种特征。但实际上人种特征在各人
实验概要 完成这个RACE需要全套反转录系统，当然选一个好的反转录酶（无RNase H），dUTP，taq酶，Uracil DNA glycosylase ，还有这几条引物： Adapter A AUCUCGAGUUCGCGCCGGAUCC(T) 25 VN cDNA synthesis and adapter-A incorporation Adapter B
（MMLV）反转录酶或选择嗜热DNA聚合酶可能在高温（60℃ -70℃）有效地逆转录mRNA，从而消除了5'端由于高CC含量导致的mRNA 二级结构对逆转录的影响；改进之四是采用热启动PCR （hot start PCR）技术和降落PCR（touch down PCR）提高PCR反应的特异性。 随着RACE技术日益完善，目前己有商业化RACE技术产品推出，如CLONTECH的MarathoTM技术和SMARTTM RACE技术。邢桂春等（2001）先后使用上述两种试剂盒进行RACE反应，结果发现使用
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