柱式植物RNAout

柱式植物RNAout专门用于各种藻类样品 RNA 提取的产品，它具有下列特点：
1. 操作简单快捷，整个过程只需要约 30 分钟。
2. RNA 纯度高，OD260/280 一般都在 2.0 左右，可直接用于 RT-PCR、Northern 杂交、microarray hybridization、cDNA 合成等。
3. RNA 产量高，一般在 20-70 ug/mL 液体藻类培养物(约 2.0 ×107个细胞)。
4. 非酶细胞破裂法，适用于各种形态的藻类和各个种属的藻类。
柱式植物RNAout规格及成分 成 份 编 号 50 次纸盒包装
溶液 A 120503A 50 mL
溶液 B 120503B 50 mL
溶液 C 120503C 100 mL
溶液 D 120503D 30 mL
离心吸附柱 60911 50 套
通用洗柱液 60408 100 mL
RNA 洗脱液 71207 10 mL
使用手册 120503sc 1 份
运输及保存 常温运输，4℃保存，有效期一年。
自备试剂 氯仿。
使用方法 1. 将 1-5 mL 液体藻类培养物在 1.5 mL 塑料离心管中 5,000-7,000 rpm4℃离心 1 分钟，并弃尽液体培养基（可以分多次离心）。
2. 加入 0.5 mL 溶液 A 并充分吹打混匀。注意：溶液 A 存放时容易产生沉淀，如果有沉淀，用前请置于 65℃融化并充分摇晃均匀。
3. 加入 0.5 mL 溶液 B，剧烈振荡 30 秒。
4. 65℃保温 5 分钟。注意：不要超过 5 分钟，否则 RNA 容易降解。
5. 5,000-7,000 rpm 4℃离心 3-5 分钟，转移上清到一自备的、干净的1.5 mL 塑料离心管中。
6. 在上清液中加入 0.2 mL 自备的氯仿，充分振荡 30 秒混匀。
7. 4℃ 5,000-7,000 rpm 离心 3-5 分钟，转移上清液到一自备的、干净的 5-10 mL 塑料离心管中。
8. 加入相当于上清液（约 1 mL 左右）3 倍体积的溶液 C 和 1 倍体积的溶液 D，充分混匀。如果上清为 1 mL，则加入 3 mL 溶液 C 和 1 mL 溶液 D。
9. 将混合液分多次转移到离心吸附柱中，每次转移 0.7mL 混合液到离心吸附柱中，室温放置 2-3 分钟以让 RNA 跟吸附膜充分结合，然后5,000-7,000 rpm 室温离心 30-60 秒，弃收集管中的穿透液，然后再加入 0.7 mL 混合液，重复上面的操作，直到混合液全部挂柱。
10. 第一次洗涤：将 0.7 mL 通用洗柱液加到离心吸附柱中，室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。
11. 第二次洗涤：一次洗涤一般足够去除杂质，但如果样品 OD260/280 比值不高，可以再用 0.3 mL 通用洗柱液重复上步洗涤一次。
12. 室温离心空柱子（带收集管）半分钟。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液会影响 RNA 的使用。
13. 将离心吸附柱转移到一自备的 RNase-free 1.5 mL 塑料离心管中，加入30-100 uL RNA 洗脱液。具体加多少根据 RNA 浓度决定，建议先使用小体积洗脱液，这样浓度过高还可以稀释。
14. 室温离心半分钟，离心管中溶液即为 RNA 样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
15. RNA 完整性的电泳检测：
注意：普通 DNA 上样液不含变性剂，更没经过去 RNase 处理，所以最好不要用于 RNA 电泳。
16. RNA 产量和纯度产率测定：将 5-10 uL RNA 溶于 TE 缓冲液中(pH7.5-8.2 之间)检测其在 OD260的光吸收。通过光吸收可以得出 RNA 浓度（1 OD260 的 RNA=40μg/mL），进而计算出 RNA 的产量（浓度×体积)和产率(RNA 产量/细菌用量)。注意不要将 RNA 稀释在 DEPC 水中检测 OD260 和 OD280，否则光吸收比在 TE(pH7.5-8.2 之间)中测得的低 10%-15%；也不要稀释过度，使 OD 读数在仪器的有效范围之外，这样得到的 OD 比值没有
意义。
疑难解答 Q：上样孔里的红色荧光物一定是污染的基因组 DNA 吗？
A：不是。用 TAE 或 TBE 电泳液和非变性胶电泳 RNA 时容易产生此现象，雅吉基因初步研究发现大部分红色荧光物是变性不充分的单链 RNA 通过碱基互补或通过硼酸络合（如果使用 TBE 作电泳液的话）形成的复合物，
加 RNase 处理后，这些红色荧光物一般会消失。为避免此现象，建议最好使用甲醛变性胶电泳。如果需要使用非变性胶，也必须在上样前使 RNA
变性。使用雅吉基因优化的上样/变性/染色三用溶液 RNAON 可以使 RNA在非变性胶上电泳时也有较好分辨率。使用非变性胶时，可以使用 TAE
或超快电泳液 SuperBuffer-2，最好不要使用 TBE 缓冲液，因为 TBE 中的硼酸能与 RNA 的多羟基形成复合物，RNA 很难形成锐利的条带。
Q：如何确认和去处除污染的基因组 DNA？
A：如果怀疑有 DNA 污染，可以用 RNase 处理 RNA 样品，然后再电泳。如果上样孔里的红色荧光物不消失，则表示是基因组 DNA 污染。进一步确
认可以使用 PCR 扩增法。去除污染的 DNA 可以使用 5 分钟柱式 DNA 清除剂、非酶的 DNA 去除剂 DNA Erasol 或 RNase-free DNase，由于RNase-free DNase 一般都有残留的 RNase 污染，所以必须严格按照厂家上海雅吉生物提供的使用手册进行操作。
柱式植物RNAout关联产品 柱式藻类 RNAOUT（CAT#：120503-50）