无酚无氯仿柱式植物RNAout

产品及特点 无酚无氯仿柱式植物RNAout是在柱式植物RNAOUT（CAT#：71203）的基础上经过配方和流程优化得到的无氯仿升级产品，它结合了植物RNAOUT的高效性、快捷性以及无氯仿处理的安全性。
1. 免酚和氯仿处理，操作安全可靠。
2. 简单快速，处理一个样品只需要约十分钟。
3. RNA 纯度更高，平均 OD260/280 一般都在 2.0 左右，能够有效去除
大 多数植物中的多糖污染。
4. 目前已测试过上百种植物。
5. 得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern杂交和cDNA合成等实验。
6. 性价比高于进口的柱式植物 RNA 提取产品。规格及成分 成 份 编 号 50 次包装

溶液 A 160906A 50 mL
溶液 B 160906B 50 mL
离心吸附柱 60911 50 套
通用洗柱液 60408 50 mL
RNA 洗脱液 71207 10 mL
使用手册 1 份
运输及保存 常温运输，4℃保存，有效期一年。
自备试剂 无
无酚无氯仿柱式植物RNAout使用方法 1. 估算组织细胞的用量。每次微量提取一般需要 100-200 mg 植物叶片、或 50-100 mg 植物种子、或 200-500 mg 植物果实。
2. 样品破碎：
1) 匀浆法：先将新鲜植物组织剪切成小块(保存在 RNALOCKER 中的植物组织需用纸吸去 RNALOCKER 液体后再剪切成小块)，放入 10-15 mL塑料离心管中，加入 1 mL 溶液 A，然后用匀浆器匀浆 5-20 秒。匀浆时会产生泡沫，但不影响提取效果。
2) 液氮研磨法（适用于复杂，易降解样品）：取适量新鲜植物组织放入含液氮的研钵中，迅速将组织研磨成粉末后，将粉末转移到合适的塑料离心管中，加入 1 mL 溶液 A，立即剧烈振荡 20 秒，充分混匀。
注意：溶解溶液 A 沉淀。溶液 A 在 4℃放置后可能会产生沉淀，使用前必须放在 65℃水浴使沉淀彻底溶解并充分摇匀后再取用。 
3. 将匀浆物或液氮研磨物转移至干净的 1.5 mL 塑料离心管中(可以不必转移非液体的细胞碎片)。有的植物组织（比如果实）含有大量水份，匀浆液
会多于 1 mL，转移时也只取 1 mL。
4. 室温 12000-15000 g 离心 3-5 分钟，管底沉淀为细胞破碎物。
5. 将上清液(约 0.6 mL)转移到另一干净的 1.5 mL 塑料离心管中。
6. 加入等体积的溶液 B，充分颠倒混匀。如果有沉淀产生（对某些植物，属于正常现象），千万不要去掉沉淀，一定要把所有的混合物上柱。
7. 将一半的溶液（如果有沉淀，则先混匀）转移到离心吸附柱中，13000-15000 g 室温离心半分钟，弃穿透液。
8. 将剩下的一半溶液（如果有沉淀，则先混匀）转移到同一离心吸附柱中，13000-15000 g 室温离心半分钟，弃穿透液。
9. 加 0.7 mL 通用洗柱液，室温离心半分钟，弃穿透液。再加 0.3 mL 通用洗柱液，室温离心半分钟，弃穿透液。一般样品如此洗涤两次即可，但如果在第 7 步加溶液 B 后有沉淀产生，则需要洗三次，每次加入的通用洗涤液的量分别为 0.4、0.3 和 0.3 mL。
10. 12000 rpm 室温离心 10 秒以便去除残留液体。此步很重要，否则残留的乙醇会影响 RNA 的使用。
11. 将离心吸附柱转移到 RNase-free 收集管中，加入 50-100 uL RNA 洗脱液，室温放置 1-2 分钟。
12. 13000-15000 g 室温离心半分钟，离心管中溶液即为 RNA 样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
13. RNA 完整性的电泳检测：如果需要做 Northern 杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行 RNA 电泳，因为非变性胶不能分离所有的 RNA 分子（BioTechniques，28：414，2000）。
14. RNA 产量产率测定：将 5-10 μL RNA 溶于 TE 缓冲液中(pH7.5-8.2 之间)检测其在OD260 的光吸收。通过光吸收可以得出RNA 浓度（1 OD260的 RNA=40 μg/mL），进而计算出 RNA 的产量（浓度 X 体积)和产率(RNA产量/组织用量)。
15. RNA 纯度测定：无污染的总 RNA 的 OD260/OD280 一般在 1.8-2.1 之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响 RT-PCR 等反应。
无酚无氯仿柱式植物RNAout关联产品 无氯仿柱式植物 RNAout 2.0（CAT#:160907）。