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387
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长期
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北京百奥莱博科技有限公司
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2~8℃
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博生产销*(代"售")的禽流感病毒H3亚型荧光PCR检测试剂盒(AIV-H3)折扣价,是高品质的动物疫病PCR检测试剂盒产品,欢迎的您垂询订购。
名称:禽流感病毒H3亚型荧光PCR检测试剂盒(AIV-H3)折扣价
等级:科研试剂
品牌:百奥莱博
编号:SYA384
规格:48次/盒
一、简介:
本试剂盒用一对禽流感病毒H3亚型特异性引物,结合特异性荧光探针,用一步法荧光RT-PCR技术对禽流感病毒H3亚型RNA进行体外扩增检测,用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。本试剂盒中禽流感病毒H3亚型的探针报告基团为HEX/VIC/JOE。
二、用途:
本试剂盒适用于鼻咽提取物、鼻咽拭子、支气管肺泡灌洗液等临床样品中禽流感病毒H3亚型的特异性检测。适用于禽流感病毒H3亚型感染的辅助诊断、监测及流行病学调查,其检测结果仅供参考。
三、试剂盒组成:(48T)
组份 数量 规格
禽流感H3荧光qRT-PCR反应液(H3-qRT-PCR MIX) 1管 672μL/管
酶混合物(Enzymes MIX) 1管 48μL/管
无核酸酶水(Nuclease-Free Water) 1管 500μL/管
阴性对照(NTC) 1管 50μL/管
阳性对照(H5-PTC) 1管 50μL/管
四、储存条件及有效期:
本试剂盒于-20℃以下保存,有效期为6个月。
五、荧光PCR仪器适用范围:
ABI系列,Roche系列等荧光定量PCR检测仪等。
六、样品的采集与RNA提取
6.1 样品的采集
按照相关标准采集。标本短期内可保存于-20℃,长期保存可置-80℃,但不能超过6个月,标本运送应采用0℃冰壶。
6.1.1 血清:用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL,注入无菌的干燥玻璃管,室温(22-25℃)放置30-60min,血标本可自发完成凝集析出血清,或直接使用水平离心机,3000rpm离心5min,吸取上层血清,转移至1.5mL灭菌离心管。
6.1.2 血浆:用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL,注入含EDTA2Na(乙二*(代"胺")四乙酸二*)或柠檬酸*抗凝剂的玻璃管,立即轻轻颠倒玻璃管混合5-10次,使抗凝剂与静脉血充分混匀,5-10min后即可分离出血浆,转移至1.5mL灭菌离心管。
6.1.3 拭子、分泌物等样品:在装有拭子或分泌物的离心管中加入500μL PBS或生理盐水,剧烈振荡30s。棉拭子尽量挤出液体转移到无RNA酶污染的离心管中,6000rpm离心20s,取上清备用。
6.1.4 病灶组织样品:称取组织约0.1g于研磨器或组织匀浆器中研磨(最好置于冰上或加入液氮),再加1mL生理盐水研磨至无块状物,然后将样品转至1.5mL灭菌离心管中,8000rpm离心2min,取上清液于1.5mL灭菌离心管中。
6.2 RNA提取
可按常规方法提取,也可采用商品化试剂盒提取病毒RNA。
6.2.1 取无RNA酶的1.5 mL Eppendorf离心管,做好标识。
6.2.2 加入600 μL裂解液,200 μL样本,200 μL*仿,混匀器上振荡5 s,4℃ 12000 rpm离心15 min。
6.2.3 吸取步骤6.2.2中的上清液转移至新的无RNA酶的1.5 mL Eppendorf离心管中(避免吸出中间层),加入400 μL异丙醇,颠倒混匀。
6.2.4 4℃ 12000 rpm离心15 min,弃上清;加入600 μL 75%乙醇。
6.2.5 4℃ 12000 rpm离心10 min,弃上清。打开离心管管盖,室温干燥5 min-10 min。
6.2.6 加入10μL 无核酸酶水,溶解管底的RNA,5000 rpm离心5 s,-20℃保存。若长期保存需放置-80℃冰箱。
注:阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取),直接取5µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高,建议最后在样品制备区域加入阳性对照。
七、检测步骤:
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光qRT-PCR反应液(H3-qRT-PCRMIX)、酶混合物(EnzymesMIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合液 1µL N×1µL
总量 15µL N×15µL
计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL,向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(H3-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qRT-PCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
反转录(Reverse Transcription) 1循环 45℃ for 10 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 45 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为HEX/VIC/JOE,淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。
八、结果分析
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整,以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
8.2 试验成立判定
(1)阴性对照(NTC):不应产生任何的扩增曲线。
(2)阳性对照(H3-PTC):均产生扩增曲线。
(3)以上条件应同时满足,否则,此次试验视为无效。
8.3 结果判定
(1)在试验成立的条件下,Ct值≤35的样本为阳性,表明H3核酸阳性。
(2)Ct值显示为无的样本为阴性样本,表明H3核酸阴性。
(3)如果35<Ct值≤40,判为可疑样品。对于可疑样品,先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线,则为可疑阳性,否则判为阴性。
(4)对于可疑阳性样品,重新抽提核酸,再次进行H3qRT-PCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线,判为样本阳性,表明H3核酸阳性;否则判为样本阴性。
九、注意事项:
(1)初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
(2)所有使用的离心管最好高压灭菌,而且必须不含RNA酶。
(3)PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等),防止实验室污染。
(4)样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行,以免污染。
(5)试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
更多有关禽流感病毒H3亚型荧光PCR检测试剂盒(AIV-H3)折扣价的价格及使用说明等,请联*(代"系")我们的业务经理王欣女士咨询,我公司还销*(代"售")以下产品:
·立克次体通用单重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA127
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
一、简介:
本试剂盒用一对立克次体通用特异性引物,结合一条特异性探针,用荧光PCR技术对立克次体通用的核酸进行体外扩增检测,用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。
二、用途:
该试剂盒适合于检测全血等样本中的立克次体通用,用于立克次体通用感染的辅助诊断,其检测结果仅供参考。
三、试剂盒组成:(48T)
组份 数量 规格
立克次体反应液(qPCR MIX) 1管 720μL/管
DNA抽提液(DNA Extraction) 2管 1.5mL/管
阴性对照(NTC) 1管 50μL/管
立克次体阳性对照(PTC) 1管 50μL/管
四、储存条件及有效期:
本试剂盒于-20℃以下保存,有效期为6个月。
五、荧光PCR仪器适用范围:
ABI系列、MJ系列、Roche系列,博日系列及其他荧光定量PCR检测仪。
六、样品采集、前处理与DNA提取
6.1 样品的采集
用注射器取血5mL至EDTA-2Na抗凝管。
6.2 样本前处理
取抗凝血下层血细胞50μL,加入100μL双蒸水吹匀。
6.3 DNA提取
可采用PCR试剂盒配备的DNA抽提液,按以下说明进行DNA核酸的粗提。也可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的DNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品,并按照相应试剂盒说明进行操作。
对上述处理好的样本加入等体积核酸提取液(固体标本加入50μL核酸提取液),100℃恒温处理10min,13000rpm离心5min,取上清液转移至新的1.5mL EP管,-20℃保存;
注:阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取),直接取5µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高,建议最后在样品制备区域加入阳性对照。
七、检测步骤
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(qPCR MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 15µL N×15µL
计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液,向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。淬灭基团:NONE,请勿选择ROX 参比荧光。
八、结果分析
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整,以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
8.2 试验成立判定
(1) 阴性对照:不应产生任何的扩增曲线。
(2) 阳性对照:均产生扩增曲线。
(3) 以上条件应同时满足 ,否则,此次试验视为无效。
8.3 结果判定
(1) 在试验成立的条件下,Ct值≤35的样本为阳性,表明立克次体核酸阳性。
(2) Ct值显示为无的样本为阴性样本,表明立克次体核酸阴性。
(3) 如果Ct值>35,判为可疑样品。对于可疑样品,先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线,则为可疑阳性,否则判为阴性。
(4) 对于可疑阳性样品,重新抽提核酸,再次进行立克次体 qPCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线,判为样本阳性,表明立克次体核酸阳性;否则判为样本阴性。
九、注意事项:
(1) 初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
(2) 所有使用的离心管最好高压灭菌,而且必须不含DNA酶。
(3) PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等),防止实验室污染。
(4) 样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行,以免污染。
(5) 试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
禽流感病毒H3亚型荧光PCR检测试剂盒(AIV-H3)折扣价关键词:AIV-H3,百奥莱博,禽流感病毒H3亚型荧光PCR检测试剂盒,SYA384,禽流感病毒H3亚型荧光PCR检测试剂盒(AIV-H3)
BL1045 营养琼脂
7725-54-0 Ammonium Persulfate 过硫*(代"酸")胺
n-辛基-β-D-吡喃葡萄糖苷 Diethylamine hydrochloride 29836-26-8
Gey"s红细胞裂解液 Gey"s Lysis Buffer 100ml|500ml
J0208 兔抗乙肝表面抗原抗血清 1ml/10ml
PY02-028 胰蛋白胨水培养基 250克
天青Ⅱ D-Xylulose 37247-10-2
PC4401 THERMOscript 1st Strand cDNA Synthesis Kit(第一链耐热反转录试剂盒)
BTN81220 柱式昆虫RNAOUT Column Insect RNAOUT
ARB10893 人抗唾液腺导管组织抗体(SDA)Elisa方法检测 Human salivary duct autoantibody,sda ELISA KIT
硫*(代"酸")铝* PMBP 7784-24-9
葡萄糖酸亚铁 Compound proteinase 22830-45-1
Hoechst33342染色液(1mg/ml) 1ml
普鲁士蓝 Azodicarbonamide 14038-43-8
禽流感病毒H3亚型荧光PCR检测试剂盒(AIV-H3)折扣价关键词:AIV-H3,百奥莱博,禽流感病毒H3亚型荧光PCR检测试剂盒,SYA384,禽流感病毒H3亚型荧光PCR检测试剂盒(AIV-H3)
·流感N9亚型病毒(AIV-N9)单重凝胶PCR检测试剂盒
编号:SYA531
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
·转基因植物NOS终止子单重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA266
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
·诺如病毒(NV)通用单重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA200
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
一、简介:
本试剂盒针对诺如病毒通用型高度保守区域设计特异性引物和探针,在反应体系中含诺如病毒通用型基因组模板的情况下,PCR反应得以进行并释放荧光信号。利用仪器对PCR过程中相应通道的信号强度进行实时监测和输出,实现检测结果的定性分析。
二、用途:
诺如病毒(Norwalk Viruses,NV)是人类杯状病毒科(Human Calicivirus,HuCV)中诺如病毒(Norovirus,NV)属的原型代表株。有5个基因群(Gene group G)GI、GII、GIII、GIV、GV。诺如病毒感染性腹泻在全世界范围内均有流行,全年均可发生感染,感染对象主要是成人和学龄儿童,寒冷季节呈现高发。
三、试剂盒组成:(50T/Kit)
组份 数量 规格
RT-PCR反应液(NV-qRT-PCR MIX) 1管 672μL/管
酶混合物(Enzymes MIX) 1管 48μL/管
无核酸酶水(Nuclease-Free Water) 1管 500μL/管
阴性对照(NTC) 1管 50μL/管
阳性对照(NV-PTC) 1管 50μL/管
四、储存条件及有效期:
本试剂盒于-20℃以下保存,有效期为6个月。
五、荧光PCR仪器适用范围:
ABI系列,伯乐系列,Roche系列等荧光定量PCR检测仪等。
六、样品的采集与RNA提取
6.1 样品的采集
1. 采集时间:粪便样本应在发病首日采集,至多不能超过发病急性期(48~72h),此时为稀、软便,病毒排出量最多。
2. 采集方法
(1)一次流行,至少采集10例患者粪便,每份样本量约1~5mL,成形便和肛拭子诊断意义很小;
(2)病人呕吐物是粪便样本的最佳补充,有助于病原的诊断。采集、储存和运送条件同于粪便;
(3)从流行病学角度出发,在水、食物或其它外环境样本中检出NV意义重要;
(4)需注意检测技术要锁定在高度怀疑的传播媒介上,尽早采样并置4℃存放,若是饮用水,需用大容量(5~100L)浓集病毒后检测;
3.应避免样本间交叉污染。
4.样本收集后可立即检测;若不能立即检测,可置于-20℃以下过夜保存;如需长期保存,样本应冻存于-70℃以下,避免反复冻融。
6.2 RNA提取
可采购北京百奥莱博科技有限公司的RNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品,并按照相应试剂盒说明进行操作。
注:阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取),直接取5µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高,建议最后在样品制备区域加入阳性对照。
七、检测步骤:
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光qRT-PCR反应液(NV-qRT-PCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1µL
总量 15µL N×15µL
计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL,向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(NV-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qRT-PCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
反转录(Reverse Transcription) 1循环 45℃ for 10 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 45 sec
在55℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM,淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。
八、结果分析:
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整,以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
8.2 试验成立判定
(1) 阴性对照(NTC):不应产生任何的扩增曲线。
(2) 阳性对照(NV-PTC):均产生扩增曲线。
(3) 以上条件应同时满足,否则,此次试验视为无效。
8.3 结果判定
(1) 在试验成立的条件下,Ct值≤35的样本为阳性,表明NV核酸阳性。
(2) Ct值显示为无的样本为阴性样本,表明NV核酸阴性。
(3) 如果35<Ct值≤40,判为可疑样品。对于可疑样品,先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线,则为可疑阳性,否则判为阴性。
(4) 对于可疑阳性样品,重新抽提核酸,再次进行NV qRT-PCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线,判为样本阳性,表明NV核酸阳性;否则判为样本阴性。
九、注意事项:
(1) 初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
(2) 所有使用的离心管最好高压灭菌,而且必须不含RNA酶。
(3) PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等),防止实验室污染。
(4) 样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行,以免污染。
(5) 试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
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文献和实验(二)禽流感病毒 AIV是一种负链RNA病毒,其基因组由8股RNA节段构成,分别编码不同蛋白。由于分节段核酸的特性,AIV易发生基因重组,当细胞感染两种不同流感病毒时,不同来源的基因节段包被在一起即可能形成新的毒粒。 其囊膜表面有血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)。 AIV没有超常的稳定性,对热的抵抗力弱,常用消毒药如福尔马林、稀酸、漂白粉、碘剂、脂溶剂等能迅速破坏其致病力。 基于HA和NA表面抗原,将其分成不同的血清亚型,多数亚型对鸡是低致病
。世卫组织在26日发布的一份公告中对猪流感做出了详细介绍。世卫组织说,猪流感是一种发生在猪身上的高度传染性急性呼吸道疾病,由猪流感病毒引起。猪流感在猪中的发病率较高,但死亡率较低,仅为1%至4%。猪流感在猪之间主要通过空气悬浮颗粒、直接或间接接触、携带猪流感病毒但无症状的猪传播。猪流感常年都可能发生,在温带地区秋冬季节发病率会更高。许多国家采取注射疫苗的方法预防猪流感。 猪流感病毒大多是A/H1N1型,但其他亚型也会在猪中传播,例如H1N2、H3N1、H3N2。其中,H3N2型被认为
、H3、H5、H7和H9等各亚型毒株,对野生型的人H5N1病毒则有更高的生产效率[15]。其工艺流程:复苏细胞库的Vero细胞,经方瓶和转瓶扩增种子细胞,接种至生物反应器中,经过反应器逐级放大至6000L反应器,控制细胞密度在2×106~3×106/mL,按一定的病毒感染复数(Multiplicity of infection,MOI)接种病毒,病毒吸附lh后加入胰酶,32~35℃孵育48~72 h后收获病毒液。 2.2 国内应用现状 国内禽流感疫苗或流感疫苗的生产工艺均采用鸡胚生产
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