北京一站式RNA电泳套装优惠促销

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百奥莱博专业生产销*(代"售")北京一站式RNA电泳套装优惠促销，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：北京一站式RNA电泳套装优惠促销
英文名：One-Stop RNA Electrophoresis Pack
编号：BTN60904
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
本品是包括琼脂糖、去离子甲醛、RNA上样液、电泳液等在内的RNA电泳套装，专门用于RNA电泳分析。可以进行至少10次mini变性胶电泳。

产品特点：
1. 即开即用，用户不需要自己进行RNase 灭活、高压灭菌、pH调节等操作。
2.与Northern杂交等后续反应兼容。

产品组成：

 

成分	规格
琼脂糖	5g
超纯水	250ml
甲醛	60ml
RNAload(含EB)	0.5ml
RNAep，10×	100ml
说明书	1份

储存条件：常温运输和保存，但收到货后RNAload 需要4℃保存，RNAep，10×一旦打开需要-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
注意：所有器皿(三角瓶，电泳槽，枪头等)均需去除RNase。强烈推荐使用本公司的超强无毒的固相RNase 清除剂。

一、配制琼脂糖甲醛变性胶(1.2%，100mL)
1.在三角瓶中加入下列成份：琼脂糖 1.2-1.5g；DEPC水 87mL
2. 将琼脂糖加热融化后，加入10mL 10×RNAep(10×RNAep 就是10×MOPS缓冲液，其瓶子一旦打开，就很容易产生污染细菌，细菌大量繁殖后会释放大量 RNase，所以剩下的10×RNAep 最好-20℃放置)。
3. 待胶冷却至 60℃左右，再加下列成份：甲醛 3.0mL；自备EB(10mg/mL)2-4μL
注意：由于本试剂盒提供的RNAload中含EB，所以也可以不加EB，但效果较差。如果使用自备的其他染料，如SYBR Green I，则不能同时使用其他染料，包括含EB的RNAload，用户需要另购不含EB的RNAload)。
4. 混匀后倒胶，凝固半小时后即可以使用。

二、配制电泳液
5. 将RNAep 用DEPC 水稀释十倍后即成电泳液，所需要的体积根据使用的电泳槽决定。

三、变性RNA样品
6.在一干净的离心管中将5-10μL RNA和15μL RNAload 混合，50-60℃保温10分钟后冰浴5-10分钟，直接上样。注意：每一泳道至多可分析30μg RNA，通常用10-20μg 总RNA进行Northern杂交，可以检测高丰度mRNA(占mRNA 总量的0.1%以上)；如待测RNA含量极微，每个泳道需加0.5-3.0μg poly(A)+ RNA。

四、电泳
7.电泳时，将凝胶预电泳5 min(电压为5 V/cm)。随后加样品和分子量对照(如果有的话)，以3－4 V/cm的电压电泳，直至染料迁移至胶下游的3/4处。
8.电泳结束后，在300nm 紫外灯下拍照。

五、后续处理
9. 按标准方法进行Northern杂交等后续处理。

使用效果：

图注: 用本产品电泳兔全血总RNA效果图。10μL 总RNA与15μL RNAload 混合后在甲醛琼脂糖变性胶上电泳0.5小时，直接在紫外灯下观察并照相。

疑难解答：
Q：RNA电泳为何最好使用RNAep，不要使用DNA电泳液TAE或TBE？
A：一是因为RNAep 经过去RNase处理，而一般实验室使用的TAE或TBE都没有经过去RNase处理，故极有可能含RNase，使样品RNA 降解。即使要灭活TAE或TBE中的RNase 也十分麻烦，因为DEPC 不能处理含Tirs的缓冲液；二是TEB含有硼*(代"酸")，硼*(代"酸")是研究多羟基醇和糖的经典试剂，它能与RNA中含多羟基的核糖反应生成糖硼*(代"酸")络合物，故电泳时RNA 带型十分弥散。在一定浓度范围内，RNA分子间还能通过硼*(代"酸")形成分子间复合物，出现电泳时各种RNA以一条带的形式出现的现象。所以RNA电泳时要避免使用含硼*(代"酸")的缓冲液。使用TAE效果虽然比TBE 稍好，但文献报道(BioTechniques 2000，28:414-415)，它不能分离某些大小不同的RNA分子。
Q：上样孔里的红色荧光物一定是污染的基因组DNA 吗？
A：不是。用TAE或TBE电泳液和非变性胶电泳RNA时容易产生此现象，初步研究发现大部分红色荧光物是变性不充分的单链RNA通过碱基互补或通过硼*(代"酸")络合(如果使用TBE作电泳液的话)形成的复合物，加RNase处理后，这些红色荧光物一般会消失。为避免此现象，建议最好使用甲醛变性胶电泳。如果需要使用非变性胶，也必须在上样前使RNA变性。
使用百奥莱博优化的上样/变性/染色三用溶液RNAload可以使RNA在非变性胶上电泳时也有较好分辨率。使用非变性胶时，可以使用TAE或超快电泳液SuperBuffer-2，最好不要使用TBE缓冲液，因为TBE中的硼*(代"酸")能与RNA的多羟基形成复合物，RNA 很难形成锐利的条带。
Q：如何确认和去处除污染的基因组DNA？
A：如果怀疑有DNA污染，可以用RNase处理RNA样品，然后再电泳。如果上样孔里的红色荧光物不消失，则表示是基因组DNA污染。进一步确认可以使用PCR扩增法。去除污染的DNA可以使用非酶的DNA去除剂DNAScavenger或RNase-free DNase，由于RNase-free DNase一般都有残留的RNase污染，所以必须严格按照厂家提供的使用手册进行操作。
Q：为何我的植物RNA样品有4-5 条带？
A：部分植物组织有叶绿体等质体，而叶绿体有核糖体，所以也有其rRNA。
叶绿体的rRNA跟细胞浆里面核糖体的rRNA大小不同，所以一般会多出两条带(共4 条rRNA 条带)。小的tRNA和5S rRNA 有时可见，有时不可见，取决于回收效率。

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