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564
- 英文名:
DNA ladder(φX174 DNA/Hinc II)
- 保质期:
长期
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
低温运输、-20℃保存
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
百奥莱博专业生产供应北京现货DNA marker(φX174 DNA/Hinc II)优惠价,我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂,价格优惠,欢迎广大科研工作者垂询订购。
名称:北京现货DNA marker(φX174 DNA/Hinc II)优惠价
品牌:百奥莱博
产地:国产|进口
编号:BTN90602I
规格:50次
本系列产品为传统的酶切分子量标准,由单一的质粒DNA或噬菌体DNA经单个限制性内切酶完成消化后,加热灭活而成。每次上样总DNA含量已知,每条带的含量可根据其摩尔数的比值计算出来。本系列产品成分中已经含有上样缓冲液,所以可以直接上样电泳。得到的电泳条带长度准确,明亮清晰,背景较低,稳定性很好。
每次加样量为5μL,可用于相对定量。本系列产品与各种琼脂糖和各种电泳缓冲液兼容。
储存条件:低温运输、-20℃保存,有效期一年。
使用方法:直接上样电泳,每次加样量为5uL。
使用效果:

疑难解答:
a)如对带型要求较高,建议使用0.8-1.5%琼脂糖凝胶(对SuperBuffer-2缓冲液,电压为250-400V)或1.5-2.0%琼脂糖凝胶(对TAE或TBE缓冲液,电压为80V),同时适当延长电泳时间。
b)电泳图象的质量与琼脂糖、电泳缓冲液有关。请采用高质量的琼脂糖,同时要经常更换电泳缓冲液。
除北京现货DNA marker(φX174 DNA/Hinc II)优惠价外,我公司正在打折促销以下产品:
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北京现货DNA marker(φX174 DNA/Hinc II)优惠价关键词:DNA marker,DNA ladder(φX174 DNA/Hinc II),DNA marker(φX174 DNA/Hinc II),BTN90602I
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北京现货DNA marker(φX174 DNA/Hinc II)优惠价关键词:DNA marker,DNA ladder(φX174 DNA/Hinc II),DNA marker(φX174 DNA/Hinc II),BTN90602I
·96孔板质粒DNA提取试剂盒(真空法)
编号:BTN130994
英文名称:Plasmid DNA extraction kit(96-well plates)(Vacuum method)
规格:1次
·随机引物法DNA探针地高*(代"辛")标记试剂盒
编号:BTN90603C
英文名称:Random Primer DNA Labeling Kit(Digoxin)
规格:5次
本试剂盒是基于Feinberg和Vogelstein发明的随机引物标记法而开发出来的即用型DNA探针标记试剂盒,标记过程由双链DNA热变性、随机引物与单链DNA结合、在Klenow DNA聚合酶催化下,引物的延伸合成DNA探针并掺入标记的核苷酸三步组成,可用下面的示意图表示:

本产品对Feinberg和Vogelstein经典方法进行了改良。
产品特点:
1. 提供的标记反应液整合了除酶和模板外的所有成分,简化了反应加样步骤,提高了标记反应的可重复性。
2. 使用无外切活性的Klenow exo- DNA聚合酶,已标记DNA探针不会被酶降解。
3.快速,最快1小时即可完成标记反应。
4. 得到的DNA探针比活性高(如果是同位素,可以达到109cpm/μg DNA),检测灵敏度高。
5. 所需模版DNA量少(只需要10ng以上即可),DNA可以是各种形状(线状和环状)的、也可以是单链或双链的,长度在100bp以上均可。
6. 得到的探针长度在200-400nt之间,可以用于Southern杂交、Northern杂交、原位杂交、菌落和斑点印迹杂交等。
7. 提供三种标记选择,其中BTN90603A可用于各种同位素标记和其他任何非同位素标记,但需自备标记底物;BTN90603B和BTN90603C可分别用于生物素和地高*(代"辛")标记,不需自备标记底物。
试剂盒组成:
| 成分 | 规格 |
| 2×A型标记反应液(自备标记物型) | 50μl(仅A型有) |
| 2×B型标记反应液(生物素型) | 50μl(仅B型有) |
| 2×C型标记反应液(DIG型) | 50μl(仅C型有) |
| dATP,2mM | 10μL(仅A型有) |
| dTTP,2mM | 10μL(仅A型有) |
| dGTP,2mM | 10μL(仅A型有) |
| dCTP,2mM | 10μL(仅A型有) |
| Klenow exo-聚合酶(2U/μL) | 5μl |
| 超纯水 | 1ml |
| 说明书 | 1份 |
储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期一年。
使用方法:
1.在一干净的硅化的塑料离心管中加入下列成分:
| 成分 | 用量 |
| 模板DNA | 50-150ng |
| 2×标记反应液(ABC三种之一) | 10μl |
| 超纯水 | 补水到15μl |
注意:非同位素标记物由于疏水性强,容易与常用的塑料离心管表面非特异性结合,所以一定要使用硅化的塑料离心管。模板DNA并非越多越好,因为模板会在杂交反应中跟标记的探针杂交,竞争性地抑制探针跟靶分子的杂交。
2. 沸水浴5-10分钟,或在PCR仪上100℃加热5-10分钟使DNA模版充分变性,立即放冰上待用。注意:如果PCR仪器不能设置到100℃,99℃加热5分钟也可。
3.高速离心数秒使所有液体集中在管底,根据试剂盒类型加入下列成份:
| 试剂盒类型 | 成分及用量 |
| BTN90603A型 | dATP、dGTP、dCTP各1μl(共3μL,浓度均为2mM) 自备的2mM dTTP/标记dUTP混合物(见注)1μL 1μl Klenow exo聚合酶 |
| BTN90603B型 | 1μl Klenow exo聚合酶 4μl超纯水 |
| BTN90603C型 | 1μl Klenow exo聚合酶 4μl超纯水 |
注:上表中的dTTP/标记dUTP混合物中dTTP和标记的dUTP的总浓度为2mM(在20μL体系中混合液的终浓度为0.1mM,dTTP与生物素或DIG标记的dUTP的比例最好为65:35)。由于空间阻碍,并非标记生物素或DIG标记的dUTP越多灵敏度越高,一般dTTP与标记dUTP的比例在65:35为最佳。但如果使用自备的其他标记核苷酸,如fluorescein、hydroxycoumarin、resorufin和aminoallyl标记的dUTP,则用户需要自己摸索其与dTTP之间的最佳比例,如果使用32P标记的dUTP,则比活最好为3000Ci/mmol,浓度为好为10uCi/μL,并且不需要加入dTTP。
4. 轻柔吹打混匀。如有液滴沾在管壁上,高速离心数秒使所有液体集中在管底。
5. 37℃保温1-20小时。标记效率跟模版量和保温时间相关,具体见下表:
| 模版DNA用量 | 1小时后探针合成量 | 20小时后探针合成量 |
| 10ng | 80ng | 900ng |
| 30ng | 150ng | 1.35μg |
| 100ng | 350ng | 1.65μg |
| 300ng | 750ng | 2.2μg |
| 1μg | 1.3μg | 2.6μg |
| 3μg | 1.6μng | 2.6μg |
6. 加1μl自备的0.5M EDTA(pH8.0)终止反应,立即放冰上待用或放-20℃保存一年。用前需要加热100℃ 5分钟使DNA探针变性成单链,然后直接加入到杂交反应液中即可。如果电泳检测,标记产物将是弥散状态。
注意:本方法标记核苷酸掺入率极高,因此可以不经纯化直接使用。如果需要纯化,注意不要用酚抽提法纯化非同位素(生物素、DIG和其他等)标记的DNA探针,因为这些标记分子疏水性强,能使标记的DNA进入疏水的有机相而丢失,但可以用乙醇沉淀和Sephadex G50回收(可另购非同位素探针柱式纯化试剂盒)。对比活高的同位素探针,由于其极其不稳定,因此应该立即使用,不要长久放置。
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Molecular Weight Marker l Hin dIII Digest Marker Solution Digest 20 µg l DNA (40 µl DNA if at 0.5 µg/µl) Add 50 µl 10X Tracking Dye Bring volume of the digested DNA up to 500 µl
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