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- NobleRyder
- P0897
- 北京
- 2025年12月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
99
- 保质期：
3个月
- 供应商：
北京诺博莱德科技有限公司
- 保存条件：
已收到实际货物为准
产品简介：
本试剂为配制SDS-PAGE分离胶缓冲液，可用于配制各种浓度的变性及非变性PAGE凝胶，方便、快捷。产品中已加入10%SDS，使用时不用另外加入。
产品组成：
| 编号 名称 |
P0897 | P0897 | Storage |
| SDS-PAGE分离胶缓冲液(4×) | 100ml | 500ml | 4℃ |
| 使用说明书 | 1份 | ||
自备材料：
1、 凝胶模具
2、 Acr-Bis(30%,29:1)
3、 10%APS(过硫酸铵)
4、 TEMED
5、 蒸馏水
SDS-PAGE分离胶缓冲液(4×)
操作步骤(仅供参考)：
根据目的蛋白分子量大小选择合适的PAGE分离胶配制浓度，最佳胶浓度请参考附表1。
(一)灌制分离胶(各试剂使用量请参考附表2)
1、参照凝胶模具说明书，装配好凝胶模具。(注：加入上层筛板有助于加样时保持填料与样品均匀接触，是否加入上层筛板可根据实际情况选择。)
2、将不同体积的Acr-Bis(30%,29:1)、分离胶缓冲液和蒸馏水在小烧杯或试管中混合。
3、加入10%APS和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。
4、在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液(对于mini-gel，凝胶液加至约距前玻璃板顶端
1.5 cm或距梳齿约0.5cm即可)，然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1～2cm的水层，
使凝胶表面保持平整。
6、 静置30～60min，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后，表面凝胶已聚合。
(二)灌制浓缩胶(各试剂使用量请参考附表3)
1、小心倾倒出覆盖在分离胶上的水层。
2、将不同体积的Acr-Bis(30%,29:1)、浓缩胶缓冲液和蒸馏水在一个小烧杯或试管中混
合。
3、加入10%APS和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。
4、将浓缩胶溶液加至分离胶的上面，直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端。
5、将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。
6、静置10~20min，等待浓缩胶聚合。
7、待凝胶聚合后，小心地拔出梳子，以免破坏加样孔。
8、进行常规电泳操作。
注意事项：
1、 过硫酸铵配制成10%溶液后应当-20℃保存。应尽量减少室温存放时间以防失效。有效避免失效的方法是分成小份，-20℃保存，用2~3次，剩余的弃用，亦可4℃保存几天。
2、 TEMED易挥发，使用后请盖紧瓶盖。另外凝胶凝聚的速度和温度及光照关系密切，可通过适当调节TEMED的用量，控制在不同的室内环境下凝胶凝聚的速度。
3、 配制聚丙烯凝胶的过程中，如果室温较低，可以置于37℃放置，加速凝固。
4、 Acr-Bis(30%,29:1)有轻微神经毒性，请小心操作。
5、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
SDS-PAGE分离胶缓冲液(4×)
有效期： 3个月有效。
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文献和实验聚丙烯酰胺凝胶电泳法（PAGE）分离血清蛋白质（核黄素-TEMED聚合系统）（图）
。 浓缩胶：为大孔凝胶，用光聚合法制备，有防对流作用。样品在其中浓缩，并按其迁移率递减的顺序逐渐在其与分离胶的界面上积聚成薄层。 分离胶：为小孔胶，一般采用化学聚合法制备。样品在其中进行电泳和分子筛分离。也有防对流作用。 蛋白质分子在大孔凝胶中受到的阻力小，移动速度快。进入小孔凝胶时遇到的阻力大，速度就减慢了。由于凝胶层的不连续性，在大孔与小孔凝胶的界面处就会使样品浓缩，区带变窄。 （2）缓冲液离子成分的不连续性 在电场中如有两种电荷符号相同的离子向同一方面泳动，其迁移率不同，两种离子
蛋白样品15ul 加入0.5mlEP 管中, 每样品管中分别加入5ul 4× 蛋白 质凝胶电泳上样缓冲液, 轻轻混合，98℃ 变性5 分钟，立即插入冰中，voltex 数秒，短暂 离心. （3 ）吸出变性蛋白液，贴紧加样孔上方，将样品轻轻加至凝胶孔中。 （4 ）将电泳仪设置成稳压状态，接通电源，将电压调至80V 使样品通过浓缩胶（电压 约8v/cm ）。当染料进入分离胶后，将电压调高到120V （约12v/cm ), 继续电泳使染料至分 离胶适当位置（4℃ 冰箱中进行电泳）, 结束电泳
的用量每次为0.5-1毫升。洗涤时离心条件和吸除上清的要求同上面的步骤C3。 5）.完成最后一次洗涤后，去除上清，加入20-40微升1XSDS-PAGE电泳上样缓冲液Vortex重悬沉淀，瞬时高速离心把样品离心至管底。 6）.100℃或沸水浴处理3-5分钟，取部分或全部样品可测定浓度或者用于SDS-PAGE电泳，暂时不用的样品可以-20℃保存。Western blot检测实验试剂：Phosphotyrosine抗体( Millipore, #05-321, 1:500)；Goat Anti
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