酵母化学感受态细胞制备试剂盒(B型) 克隆与表达

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百奥莱博专业生产供应酵母化学感受态细胞制备试剂盒(B型) 克隆与表达，我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂，价格优惠，欢迎广大科研工作者垂询订购。

北京百奥莱博科技有限公司专业生产供应酵母化学感受态细胞制备试剂盒(B型) 克隆与表达，产品信息：

类别：克隆与表达

英文名：Yeast Chemical Competent Cell Preparation Kit

产品名	产品编号	包装规格
酵母化学感受态细胞制备试剂盒(B型)	BTN81109B	20次

编号：BTN81109B

产地：国产|进口

规格：20次

品牌：百奥莱博

本酵母化学感受态细胞制备试剂是一种通过化学处理，高效快速制备酿酒酵母化学感受态细胞，用于长期冻存以备后续转化的产品。

 

产品特点：

1.一次制备，-80℃保存，多次使用，免去每次转化都要制备酿酒酵母感受态细胞。

2. 操作简单，单溶液制备，除酵母培养的时间外，整个操作只需要30分钟

3. 主要用于酿酒酵母S. cerevisiae，也适用于其他多种实验用酵母菌株，包括S. pombe、C. albicans、Pichia pastoris等。

4. 受体酵母可以不含质粒，也可用于携带有选择性质粒的酵母。

5. 对酿酒酵母，最高转化效率可达到0.2-1×105个转化子/μg质粒DNA。对其他酵母，效率稍低，范围在100-2000个转化子/μg质粒DNA。

6. 得到的感受态细胞可以用各种线性或环状酵母穿梭质粒DNA进行转化，例如YIp，YRp，YCp，YEp和YAC等。

7.可以用于酵母双杂交、定点突变(Site－Directed Mutagenesis)、基因破坏(Gene Disruption)、等位突变基因修复(Mutant Allele Recovery)等实验。

8. 本产品可以制备20 只酵母感受态细胞(需要200mL 酵母培养液)，其中A型只用于制备感受态细胞，B型还带高效转化液。

 

储存条件：常温运输和保存，有效期一年。

 

产品组成：

 

成分	20T(A)	20T(B)
制备液A	120ml	120ml
制备液B	6ml	6ml
制备液C	10ml	10ml
转化液A	无	30ml
转化液B	无	30ml
说明书	1份	1份

 

自备试剂：YPD培养基

 

使用方法：

 

一：酵母化学感受态细胞的制备

说明：按本方法制备1 管酵母化学感受态细胞就需要OD600达到0.6-1.0的新鲜酵母培养液10mL，用户需根据所需酵母感受态细胞的数量决定培养细胞的体积。如果超过10mL，则制备液的使用量需要按比例增加。

1. 挑取酵母受体菌的新鲜的单菌落(4℃放置不超过3周的也可以)，接种到装在50mL离心管中的10mL的自备的YPD培养基中。

2. 30℃摇晃培养，摇床速度250rpm/分钟，直到OD600达到0.6-1.0(相当于0.6-1×107细胞/mL)。

3.室温3000rpm离心5 min，弃上清得酵母细胞沉淀。

4. 新鲜制备适量的酵母感受态制备工作液。对10mL 酵母需要5.25mL的工作液，其配制方法是：将4.75mL 制备液A、0.25mL 制备液B和0.25mL 制备液C 加入到一个无菌的离心管中后充分震荡混匀即可。酵母感受态制备工作液可放室温待用。

5. 用0.5倍体积的新鲜配制的酵母感受态制备工作液洗涤酵母细胞沉淀一次(对10mL 酵母则需要5mL 酵母感受态制备工作液)。即混合后振荡1分钟，室温3000rpm离心3分钟，去上清得洗涤后的酵母细胞沉淀。

6. 再用0.02倍体积的酵母感受态制备工作液充分重悬菌体(对10mL酵母，则需要0.2mL 酵母感受态制备工作液)。

7. 按每管0.2mL 分装到冷冻管中，放入保温冰盒中冷却半小时后再放入-80℃冰箱待用。0.2mL的感受态细胞足够1次转化使用。注意：放入保温冰盒的目的是使温度缓慢下降，急冻将使转化效率降低，这点跟大肠杆菌感受态制备过程不同。

 

二：化学转化酵母感受态细胞(只有B型提供相关试剂)

1. 将总体积不超过20μl的0.1-5μg质粒DNA 加到刚从-80℃冰箱取出的、还处于凝固状态的0.2mL 酵母感受态细胞上。注意：最好同时做一个不加质粒DNA的阴性对照组。

2.室温充分振荡直到凝固的感受态细胞完全融化。注意：此步非常关键，如果能在恒温振荡器上37℃振荡5分钟，则效果更好。

3. 加入1.4mL转化液A，轻柔颠倒混匀一分钟。

4. 30℃培养1小时。

5.室温3000g离心5秒，弃上清。

6.在酵母细胞沉淀中加1.0mL转化液B，振荡一分钟。

7.室温3000g离心5秒，弃上清。

8.在酵母沉淀细胞中加入适量(如100μl)的转化液B，混匀后在在选择培养基上全部涂盘。

9. 30℃培养3-5 天后即得酵母转化菌落。

酵母化学感受态细胞制备试剂盒(B型) 克隆与表达专业优质供应商：北京百奥莱博科技有限公司

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编号	类别	名称
BTN150801	克隆与表达	大肠杆菌BL21 Star(DE3)化学感受态细胞
BTN100836	蛋白质研究	亮抑蛋白酶胎溶液(10mg/mL)
BTN80901	RNA纯化	柱式动物RNA大量提取试剂盒
BTN3060	RNA纯化	非冻型组织RNA保存液
BTN100211	核酸电泳和回收	50×TAE电泳液
BTN100880	核酸电泳和回收	四甲基乙二*(代"胺")(电泳级)
BTN131232	克隆与表达	壮观霉素溶液
BTN130506	核酸扩增(PCR)	PCR级海藻糖溶液
BTN60309	工具酶	RNase A溶液(2mg/mL)
BTN50901	克隆与表达	菌落PCR试剂盒2.0
BTN130951	DNA纯化	革兰氏阳性菌DNA提取试剂盒(Southern级)
BTN130864	细胞及免疫学	Hoechst 33258干粉
BTN120654A	核酸电泳和回收	Southern专用DNA Marker(生物素标记)
BTN90604A	探针标记及检测	PCR法DNA探针标记试剂盒
BTN121001	DNA纯化	血液游离DNA提取试剂盒(液体样品DNA提取试剂盒)
BTN60306	DNA纯化	柱式血液DNA提取试剂盒
BTN100882	核酸电泳和回收	*酚蓝溶液(电泳级)
BTN91204	蛋白质研究	动植物膜蛋白微量制备试剂盒
BTN80808	蛋白质研究	蛋白酶抑制剂混合液
BTN71201	RNA纯化	动物RNA提取试剂盒(柱式Trizol)
BTN131056	蛋白质研究	TCEP溶液(0.5M)

 

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