北京miRNA cDNA第一链合成试剂盒厂商

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北京百奥莱博科技有限公司专业生产供应北京miRNA cDNA第一链合成试剂盒厂商，产品信息：

类别：核酸扩增(PCR)

英文名：miRNA First Strand cDNA Synthesis Kit

产品名	产品编号	包装规格
miRNA cDNA第一链合成试剂盒	BTN130911	25次

产地：国产|进口

规格：25次

品牌：百奥莱博

编号：BTN130911

英文名：miRNA First Strand cDNA Synthesis Kit

本试剂盒采用在miRNA 3´末端加多聚A 尾的方法来使miRNA 具有Poly(A)尾，之后再使用Oligo(dT)-Tag引物进行逆转录反应，最终合成miRNA 对应的第一链cDNA。其反应流程如下：

 

产品特点：

1. 两步式操作，先进行Poly(A)加尾，再进行逆转录反应。

2. 只需要1μg的total RNA。

3. 所得cDNA可用于检测多种miRNA，不仅减少了误差、节约了样品，同时还实现了检测的高通量。

4.与miRNA荧光定量PCR 检测试剂盒兼容。

5.特异性好，独特的miRNA引物及反应体系避免了Pre-miRNA的非特异扩增。

 

试剂盒组成：

 

成分	规格
E.coli Poly(A)聚合酶(5U/μL)	10μl
10×Poly(A)聚合酶反应液	50μl
ATP溶液，1mM	50μl
Oligo(dT)-Tag引物(0.5ug/μL)	25μl
MMLV 逆转录(含RI)	50μl
4×RT Buffer(含dNTP)	125μl
RNase-free 水	1ml

 

储存条件：低温运输，-20℃保存。

 

使用方法：

 

一、对miRNA 3´末端进行加Poly(A)处理

1.在冰上预冷RNase-Free的反应管内加入以下试剂至总体积20μL。注意需要最后加入E.coli Poly(A)聚合酶。

 

试剂组份	体积
自备的Total RNA(见注)	1μg
10× Poly(A)聚合酶反应液	2μl
ATP溶液，1mM	2μl
RNase-Free水	补水至20μL
E.coli Poly(A)聚合酶(5U/μL)	0.4μL(2U)

注：在反应中使用的Total RNA必须含有miRNA。也可以直接使用miRNA(建议加入量为2–5μL，需根据目的miRNA的丰度决定)。

2. 移液器轻轻混匀上述配制的反应液，短暂离心后在37℃反应60 min。所得的反应液可以直接进行下游实验(注意：只能把2μL 直接用于后续的RT反应，多于2μL 则需要先乙醇-乙酸*沉淀，再将加尾后的miRNA 溶于水，然后再取所需量用于RT。如果不经过沉淀，带入的残留的poly(A)聚合酶反应液将会干扰RT反应)，也可以放置-20℃短暂保存。如需长期保存建议存放于-80℃。

 

二、对带Poly(A)尾巴的miRNA进行逆转录反应

3. 按照下表设置20μL体系的RT反应：

 

成分	体积
Poly(A)反应产物(来于上步)	2μl
RNase-Free水	10μl
Oligo(dT)-Tag引物	1μl
4×RT Buffer(含dNTP)	5μl
MMLV 逆转录酶(含RI)	2μl

4. 移液器轻轻混匀上述配制的反应液，短暂离心后在42℃反应60 min。

5. 70℃保温10 min 终止反应。

6. 合成的cDNA反应液可放置于-20℃保存；也可以暂时冰上放置，立即用于后续的荧光PCR 定量检测，不需要纯化。

北京miRNA cDNA第一链合成试剂盒厂商专业优质供应商：北京百奥莱博科技有限公司

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编号	类别	名称
BTN120421	工具酶	T4 RNA连接酶
BTN130917	核酸扩增(PCR)	dCTP溶液(100mM)
BTN120501	DNA纯化	柱式动物线粒体DNA提取试剂盒(测序级)
BTN60402	核酸电泳和回收	超快非醇核酸沉淀剂
BTN3080	RNA纯化	植物RNA提取试剂盒
BTN140645	克隆与表达	大肠杆菌TB1感受态细胞
BTN100603	蛋白质研究	银染清除剂
BTN81109B	克隆与表达	酵母化学感受态细胞制备试剂盒(B型)
BTN80801	DNA纯化	柱式拭子DNA提取试剂盒
BTN131074	蛋白质研究	SDS-PAGE样品预处理试剂盒
BTN100307E	DNA纯化	酸洗玻璃珠(1500～2000μm)
BTN130672	工具酶	核糖核酸酶RNase If
BTN81104	核酸电泳和回收	超快核酸银染试剂盒
BTN131090	蛋白质研究	中性亲和素蛋白
BTN81209	RNA纯化	去离子水
BTN130846	RNA纯化	白色念球菌RNA提取试剂盒
BTN120681	克隆与表达	两性霉素B
BTN70302	DNA纯化	一步离心式石蜡清除剂
BTN131293	其他细胞生物学试剂	对*醌固定液
BTN130958B	核酸电泳和回收	蓝色DNA上样液(6×,非甘油)
BTN60405	其他生化试剂	1M DTT溶液(RNase-Free)
BTN160681	细胞组织染色	乙酰胆碱酯酶染色试剂盒(亚铁*化铜法)
BTN130923	核酸扩增(PCR)	LAMP扩增阳性对照
BTN160655	细胞组织染色	Levaditi硝酸*(代"银")法螺旋体染色试剂盒
BTN70503S	核酸电泳和回收	DNA marker(200-5000bp)
BTN131117	探针标记及检测	DNA包被溶液
BTN131189	核酸电泳和回收	糖原干粉(分子生物学级)

 

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