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- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
788
- 英文名:
Instant Blue-White Vector T,Type D
- 保质期:
长期
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
低温运输
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
百奥莱博专业生产供应即用型蓝白T载体D型(无RNA启动子,有MCS)哪里卖,我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂,价格优惠,欢迎广大科研工作者垂询订购。
名称:即用型蓝白T载体D型(无RNA启动子,有MCS)哪里卖
编号:BTN120514
品牌:百奥莱博
产地:国产|进口
英文名:Instant Blue-White Vector T,Type D
规格:20次
本产品是用Xcm I酶切线性化的DNA片段,其两个末端的5´都有一个突出的T,可以用于快速克隆具有加尾活性的耐热酶(如Taq DNA聚合酶)扩增得到的PCR片段。
产品特点:
1. 由于是通过酶切制备,所以载体两端的带T率为100%,远高于用Taq DNA聚合酶和TdT末端转移酶在平末端载体加尾得到的T载体。
2. 克隆的阳性率一般在90%以上,缩短了筛选过程。
3. 插入位点两侧有多克隆(CMS)位点,便于对克隆的PCR片段进行近一步的分析。
4. 来源于pUC19质粒,两侧无RNA聚合酶启动子。
5.可以使用pUC/M13 Forward和Reverse测序引物测定插入片段的序列。
6. T克隆位点位于β-半乳糖苷酶的α 肽编码区内,可以进行蓝白斑筛选。
7.含有丝状噬菌体f1 复制起始子,可以制备单链DNA。
产品组成:
| 组分 | 规格 |
| 即用型蓝白T载体D型(10ng/μL) | 60μl |
| 阳性对照(35ng/μl) | 30μl |
储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期两年。
质粒图谱
多克隆位点
即用型蓝白T载体D型(无RNA启动子,有MCS)哪里卖极具性价比,此外,我公司正火爆促销以下产品:
BL1133 TOP10感受态细胞
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即用型蓝白T载体D型(无RNA启动子,有MCS)哪里卖关键词:无RNA启动子,有MCS,BTN120514,即用型蓝白T载体D型(无RNA启动子,有MCS),Instant Blue-White Vector T,Type D
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即用型蓝白T载体D型(无RNA启动子,有MCS)哪里卖关键词:无RNA启动子,有MCS,BTN120514,即用型蓝白T载体D型(无RNA启动子,有MCS),Instant Blue-White Vector T,Type D
·大肠杆菌SURE化学感受态细胞
编号:BTN90208
英文名称:E.coli SURE Chemical Competent Cell
规格:0.1mL*10
本产品是采用大肠杆菌SURE菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞,可用于DNA的化学转化。该菌株主要是用来克隆不稳定DNA结构如重复序列、二级结构(如Z-DNA)等。
菌株基因型:
| 基因型 | 表现型 |
| endA1 | 核酸内切酶I缺失 |
| gyr A96 | 具有*啶酮酸抗性 |
| lac | 不能利用乳糖 |
| rec B & rec J | DNA重组修复功能缺失 |
| relA1 | 允许在无蛋白质合成时有RNA合成 |
| sbcC | 允许基本重组 |
| supE44 | 抑制琥珀突变,为某些噬菌体必需 |
| thi-1 | 需要硫*才能生长 |
| umuC::Tn5 | 卡那霉素抗性 |
| uvr C | 不能切除变异碱基 |
| mcrA△(mcr CB-hsdSMR-mrr)171 | DNA甲基化系统缺失 |
| F’[ lacIlac Z△M15 Tn10 proAB+] | 提供α-互补所需的ω片断,具有四环素抗性 |
储存条件:干冰运输、-80℃保存,有效期半年。
自备试剂:目的DNA、SOC或LB培养基等
使用方法:
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl,可以根据实际情况分装使用。
以下实验以50μL感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后,向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA,通常100μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和),用移液器轻轻吹打混匀,冰浴30分钟。
3. 42℃热击45秒,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2-3分钟。
4. 每个离心管中加入450μl 无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃摇床,150rpm 振荡培养45分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求,取适量已转化的感受态细胞,加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于37℃直至液体被吸收,倒置培养,37℃培养12-16小时。
注意事项:
1. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多,可取少量转化产物涂布平板;若转化的DNA总量较少,可取200-300μl转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少,可通过离心(4,000rpm,2分钟)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2. 新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
3. 涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。
我公司正在打折促销克隆与表达全系列产品,恭候您的咨询选购即用型蓝白T载体D型(无RNA启动子,有MCS)哪里卖。
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文献和实验位点176-197 lacZ起始密码子180 lac操纵子200-216 β内酰胺酶编码区1337-2197 噬菌体f1区2380-2835 lac操作子序列2836-2996,166-395 pUC/M13正向测序引物结合位点2956-2972 T7RNA聚合酶启动子(-17至+3)2999-3 (2)目的片段与T载体的连接和转化 采用PromegaT载体克隆试剂盒(pGEM-TEasySystemIkit)进行DNA片段克隆,具体步骤如下: 1)按下表混合各反应
1 抄文献忽略单位 把 vg 当 TU、把 MOI 算错,用量差十倍 先分清 TU/mL(慢病毒)、vg/GC(AAV/腺病毒)含义再算 2 表达框超容量 AAV 超 4.7kb 包不出毒,慢病毒大基因出毒失败 AAV 超容换短启动子/去标签/双载体/改慢病毒;>4kb 慢病毒走 GV747 3 没设对照 分不清是病毒问题还是细胞/表型问题 过表达对照 MCS 不插片段,干扰/敲除对照插无义靶点 4 荧光弱=失败 误判病毒废了,其实只是 MOI 低或检测窗口没到 先确认感染时间和 MOI
基因克隆的四大要素(Four Elements for Gene Cloning)
一、受体细胞 :受体细胞的选择是否合适将关系到能否表达,特别是高效表达。首先要注意不同的表达载体与受体细胞的关系,即原核表达载体适合原核细胞,真核载体则适合真核细胞,而农杆菌仅适用于植物细胞。即使大肠杆菌质粒,也应注意选择合适的菌种。例如,当用含有T7 噬菌体启动子的载体表达外源基因时,由于T7 启动子只能被其本身的RNA 聚合酶(T7 RNA 聚合酶)所识别,所以必须使用具有产生T7 RNA 聚合酶能力的受体菌,如:BL21(DE3)、JM109(DE3)。对于一些缺失β-D-半乳糖酶氨
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