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- Sci-P-0252
- 2025年07月11日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
9999
- 细胞类型：
原代细胞
- 品系：
详见说明
- 组织来源：
新鲜组织
- 相关疾病：
呼吸系统，内分泌系统，血液淋巴系统，骨关节系统
- 物种来源：
新鲜组织
- 免疫类型：
血液科、肿瘤科
- 细胞形态：
悬液、冻存管
- 器官来源：
正常组织源性
- 运输方式：
常温或者干冰
- 年限：
长久
- 生长状态：
悬浮、贴壁
发货：客户可根据自身科研项目的需要选择不同类型的细胞培养瓶和相应的细胞密度。公司提供标准的鉴定流程，保证细胞的纯度在90%以上，且不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
发货的新鲜细胞还包含:1、50ml完全培养基（包含生长因子和血清）；2、说明书及注意事项；
大鼠前脂肪细胞保存和应用：客户可以根据自己的需求选择新鲜或者冻存的原代细胞，如是新鲜原代细胞，客户收到细胞后应立即将其放入CO2细胞培养箱内静置后2-3h，再进行后续的实验操作。如是冻存细胞，客户收到细胞后应立即将其放入液氮、-80℃冰箱或立即进行复苏。
所购买细胞只可用于科研，不得用于临床应用。
细胞培养方法
1）复苏细胞：将含有大鼠前脂肪细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为类；
1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗一遍后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入1ml含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2. 4min 1000rpm 离心去掉上清。加1ml血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和DMSO，轻轻混匀，DMSO终浓度为10%细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
大鼠前脂肪细胞RBC形态及其临床意义：
● 正常红细胞为直径 7.2~ 7.6 mm ，厚度 2 mm 圆盘状，两面凹陷，中央较薄，着色较浅，在涂片中形态基本一致。
● 正常 RBC 在体内能经受通过微血管的严重变形而不受损害。在高度粘稠血液中的RBC变成椭圆形，红细胞膜围绕着所含Hb旋转，像坦克的踏板（Tread）。脾脏可筛选缺乏弹性红细胞、红细胞异常变形或丧失弹性红细胞，加强对这些红细胞的清除。
● 在贫血或有关疾病时红细胞可出现异常，往往一张较满意的血片，观察红细胞形态，对贫血的性质确定和某些疾病的诊断有一定的帮助。
● 贫血在红细胞形态 中主要表现个体及群体大小、形状、血红蛋白浓度的差异。
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文献和实验甲腺原氨酸（T3 ）200pmol/L； 8. 筛网：孔径为25μm的尼龙网筛。 实验方法： 1. 取材 ① 取用普通食物喂养的4周龄雄性大鼠，乙醚麻醉后断头处死； ② 在无菌条件下从附睾周围切取脂肪垫，放入培养皿中。尽量除去血管。然后用清洗液冲洗3次； 2. 分离细胞 ① 充分剪碎所取脂肪细胞。然后放入消化液中，37℃水浴中振荡消化40
吸管反复吹打使组织块分散，然后通过孔径25μM（200目）的筛网过滤，收集滤液和未过滤的组织块。5、将滤液以600g离心5分钟弃上清，加入原代培养的基础培养基制成细胞悬液。6、将未滤过的组织按照上述过程再处理一次，将俩次获得的细胞悬液混匀计数，按照104个/cm2的密度接种于培养瓶里，于37度，5％CO2培养箱中培养。接种12－16小时基本贴壁。在增殖状态下的前脂肪细胞可以使用胰蛋白酶消化的方法传代，并且可以冻存和复苏。
组织，洗净血污。称取脂肪垫的重量； 2. 分离细胞； ① 将脂肪垫剪成1mm3 左右的小块，转入50ml锥形离心管中； ② 每0.1g组织块加入3—4ml消化液。在37℃水浴摇床上以60r/min的转速轻微振荡，消化1h。其间每隔10min取出离心管，摇动，使组织块与消化液充分混匀； ③ 消化完后，用吸管反复吹打消化液，分散组织块，制成细胞悬液； ④ 用孔径为250µm的尼龙网筛过滤细胞悬液，除去未分散的组织块，收集滤液。将滤过液再用孔径为80µm的尼龙网筛过滤，除去大部分成熟脂肪细胞
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