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北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博生产销*(代"售")的SYA074型霍乱弧菌荧光PCR检测试剂盒(O1)北京现货促销,是高品质的细菌PCR检测试剂盒产品,欢迎的您垂询订购。
名称:SYA074型霍乱弧菌荧光PCR检测试剂盒(O1)北京现货促销
产地:国产|进口
编号:SYA074
等级:科研试剂
品牌:百奥莱博
规格:48次/盒
欲咨询购买SYA074型霍乱弧菌荧光PCR检测试剂盒(O1)北京现货促销,请致电北京百奥莱博科技有限公司,为您提供最全面周到的产品服务,除此之外,我公司正在促销以下产品:
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规格:48次/盒
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规格:48次/盒
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英文名称:Fluorescent PCR detection kit for Bacillus paratyphosus
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
一、简介:
本试剂盒用一对鼠疫杆菌特异性引物,结合一条特异性探针,用荧光PCR技术对鼠疫杆菌进行体外扩增检测,用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。
二、用途:
本试剂盒适用于检测全血等样品中的鼠疫杆菌(YP),用于鼠疫杆菌(YP)的辅助诊断,其检测结果仅供临床参考。
三、试剂盒组成:(48T)
组份 数量 规格
YP反应液(YP-qPCR MIX) 1管 672μL/管
DNA抽提液(DNA Extraction) 2管 1.5ml/管
酶混合物(Enzymes MIX) 1管 48μL/管
阴性对照(NTC) 1管 50μL/管
YP阳性对照(YP-PTC) 1管 50μL/管
四、储存条件及有效期:
本试剂盒于-20℃以下保存,有效期为6个月。
五、荧光PCR仪器适用范围:
ABI系列、MJ系列、Roche系列、博日系列及其他荧光定量PCR检测仪等。
六、样品的采集与RNA提取
6.1 样品的采集
取抗凝血下层血细胞50μL,加入100μL双蒸水吹匀。
6.2 RNA提取
可采用PCR试剂盒配备的DNA抽液体,按以下说明进行DNA核酸的提取。也可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的DNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品,并按照相应试剂盒说明进行操作。
对上述处理好的样本加入50μL核酸提取液,100℃恒温处理10min,13000rpm离心5min,取上清液转移至新的1.5ml EP管,-20℃保存。
注:阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取),直接取5µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高,建议最后在样品制备区域加入阳性对照。
七、检测步骤:
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(YP-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1µL N×1µL
总量 15 µL N×15µL
向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液,向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(YP-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qRT-PCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM,淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。
八、结果分析:
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整,以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
8.2 试验成立判定
(1) 阴性对照(NTC):不应产生任何的扩增曲线。
(2) 阳性对照(YP-PTC):均产生扩增曲线。
(3) 以上条件应同时满足,否则,此次试验视为无效。
8.3 结果判定
(1) 在试验成立的条件下,Ct值≤35的样本为阳性,表明鼠疫杆菌核酸阳性。
(2) Ct值显示为无的样本为阴性样本,表明鼠疫杆菌核酸阴性。
(3) 如果35<Ct值≤40,判为可疑样品。对于可疑样品,先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线,则为可疑阳性,否则判为阴性。
(4) 对于可疑阳性样品,重新抽提核酸,再次进行鼠疫杆菌qPCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线,判为样本阳性,表明鼠疫杆菌核酸阳性;否则判为样本阴性。
九、注意事项:
(1) 初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
(2) 所有使用的离心管最好高压灭菌,而且必须不含DNA酶。
(3) PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等),防止实验室污染。
(4) 样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行,以免污染。
(5) 试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
SYA074型霍乱弧菌荧光PCR检测试剂盒(O1)北京现货促销关键词:SYA074,霍乱弧菌荧光PCR检测试剂盒(O1),百奥莱博
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编号:SYA192
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规格:48次/盒
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等级:科研实验专用
规格:96次/盒
【主要成分】
组份 数量 规格
包被板 1 块 96T
阴性血清对照 1 管 1ml/管
阳性血清对照 1 管 1ml/管
样品稀释液 1 瓶 50ml/瓶
10×洗液 1 瓶 30ml/瓶
兔抗牛IgG酶标抗体 1 瓶 12ml/瓶
底物显色液 1 瓶 12ml/瓶
终止液 1 瓶 6ml/瓶
说明书 1 份
【作用与用途】
适用于牛血清中牛支原体抗体的检测。
【用法与判定】
1、试剂准备
仔细阅读说明书,所有的试剂在使用前需放置于室温至少1小时,使试剂盒恢复到室温。
2、洗涤液的配制
取1 份10×洗液加入到9份双蒸水中,混匀。配好的液体,应在3天内用完。
3、稀释待检血清。用样品稀释液将待检血清做1∶160(VV)倍稀释(建议在1.5ml微量离心管中加入400μl 样品稀释液,吸取2.5μl 待检样品加入该管中充分混匀)。
4、操作步骤
4.1 加样
包被板上对照和待检样品添加如下所示。
4.2 孵育
将稀释好的样品加入包被板中,100μl/孔。将包被板置37℃下孵育1小时。
4.3 洗涤
甩去孔内液体,用稀释好的洗涤液洗涤包被板,300μl/孔,振荡洗涤3次,拍干。
| 1 | 2 | |||||||||||
| 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | |||
| A | P | S1 | S2 | S3 | S4 | |||||||
| B | P | |||||||||||
| C | N | |||||||||||
| D | N | |||||||||||
| E | ||||||||||||
| F | ||||||||||||
| G | ||||||||||||
| H |
(注:“P”为阳性血清对照;“N”为阴性血清对照;S1、S2、S3、S4 为待检血清样品)
4.4 二抗孵育
向各孔中加入兔抗牛IgG 酶标抗体,100μl/孔。将包被板置37℃下孵育1小时。
4.5 洗涤
方法同4.3。
4.6 显色
加入底物显色液,100μl/孔,置室温(15~25℃)下,避光孵育9分钟。
4.7 终止
加入终止液,50μl/孔,轻微震荡混合均匀。
4.8 读数
在加入终止液15分钟内,将包被板置于酶标仪中,用波长450nm(OD450)读数。
4.9 S/P值计算
按照以下计算公式,计算S/P值。
4.10 判定标准
4.10.1 试验结果有效的条件是:阳性血清对照OD450值均应≥0.8,阴性血清对照OD450 值均应<0.1。
4.10.2 待检样品的S/P 值≥0.418时,判定为阳性;待检样品的S/P值<0.418时,判定为阴性。
【注意事项】
(1)所有试剂在2~8℃条件下保存。
(2)贮存时,所有的板条一定要用封口膜密封,防止潮气对包被板的损伤。
(3)不要使底物溶液接触强光和氧化物。取出后,不得再加回瓶中。
(4)仔细阅读说明书。
(5)不要使用过期的成分或者不同批次试剂混合使用。
(6)稀释10×洗液时,如发现存在结晶,可置37℃下加热使其溶解后再使用。
(7)注意加样和洗涤过程,以确保试验的准确度,不能用嘴吸液。
(8)被检血清发生腐败时勿用于检测。
(9)检验用器皿必须清洁,操作过程避免与金属类器物接触。
(10)在加样时,应使各孔的加样时间差别小于5 分钟,以保证各孔反应时间一致。
(11)操作过程中使用手套,终止液是硫*(代"酸"),如接触,应用清水迅速冲洗接触部位。
【贮存与有效期】
2~8℃保存,有效期为9个月。
SYA074型霍乱弧菌荧光PCR检测试剂盒(O1)北京现货促销关键词:SYA074,霍乱弧菌荧光PCR检测试剂盒(O1),百奥莱博
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