北京Ki67细胞增殖检测试剂盒(ICF/FACS法)大量库存

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名称：Ki67细胞增殖检测试剂盒(ICF/FACS法)
规格：20T
英文名：Ki67 cell proliferation Detection Kit
编号：KFS336
产地：国产|进口
Ki67 蛋白是细胞周期相关的一种核蛋白，主要表达于细胞增殖分裂的各个时期（G1、S、G2 和M 期），但是在静息的细胞（G0 期）中不表达。Ki67 常用于检测肿瘤细胞的生长指数（免疫组化法利用计算细胞总数中的Ki67 阳性细胞数所占比例得到Ki67 指数）。

Ki67 通常通过标记抗Ki67 的抗体（FITC 绿色荧光）和DNA 染料碘化丙啶（PI，红色）而利用流式细胞仪检测来实现对细胞周期的检测。

操作方法
1. 在最适的环境下培养细胞。
2. 除去培养液，用PBS 洗一次。
3. 胰蛋白酶处理和收集细胞，离心，（注意1）保证每管细胞数在106 个。
4. 用0.3 ml PBS 轻轻的重悬细胞, 然后慢慢加入0.7 ml 预冷的100%乙醇。用1 ml 玻璃移液管小心的混匀。在4°C 至少1h。（注意2）
5. 沉淀细胞，完全吸去上清。
6. 用150 μl PBS/1 % BSA 洗细胞2 次。
7. 用100μl 抗体孵育液（0.5% Tween-20/1%BSA/PBS）重悬细胞，加入1ul Ki67 抗体(1μg/106 cells)，室温孵育1 小时。
8. 离心收集细胞，用150μl1% BSA-PBS 洗2 次。
9. 离心收集细胞，用50μl 抗体孵育液重悬，加1μl (1.5μg/106 cells) 羊抗鼠IgG-FITC，室温孵育30 分钟。离心收集细胞，150μl PBS/ 1 % BSA 洗2 次。
10. 用含有终浓度为10 μg/ml RNase A 和20μg/ml PI 的0.5 ml PBS（pH7.4）重悬细胞。
11. 避光使细胞在室温下孵育20min 后，离心收集细胞，150μl PBS/ 1 % BSA 洗2 次后，转移至流式检测管中重悬。
12. FACS 检测或者储存于4℃。
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