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- 大有泰莱
- 北京
- dy18003
- 2025年07月16日
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-20度保存
- 规格：
48T
（Taqman探针一步法实时荧光RT-PCR）
编号：KA010.01YB
规格：48头份
介绍：禽流感（Avian influenza）是由A型流感病毒引起的一种人与动物共患病，不仅引起禽类以呼吸系统疾病、产蛋下降乃至急性致死和高死亡率等为特征的烈性传染病，而且可导致人的感染和死亡，严重威胁人类健康。禽流感病毒（Avian influenza virus ,AIV）最显著的生物学特征之一是亚型众多，变异频繁，按病原体类型的不同，可分为高致病性、低致病性和非致病性禽流感三大类。世界卫生组织（OIE）将其列为必须通报疾病。我国2008年修订的《一、二、三类动物疫病病种明录》将其列为一类动物疫病。
用途：该试剂盒用于对AIV H9亚型进行检测，有助于对AIV H9亚型的实验室诊断、监测和流行病调查。
原理：本试剂盒采用一步法实时荧光反转录聚合酶链式反应(One-Step Real Time RT-PCR) ，结合Taqman技术，对特异核酸进行定性或定量检测。
试剂盒的组成
| 试剂名称 | 数量 |
| AIV H9反应液 | 550μL×1管 |
| AIV H9酶 | 40μL×1管 |
| AIV H9引物探针 | 100μL×1管 |
| 无核酸水 | 1000μL×1管 |
| AIV H9阴性对照 | 1000μL×1管 |
| AIV H9阳性对照 | 150μL×1管 |
样品收集，操作和储存
1. 最好选择发病早期，无菌采样并立即送往实验室进行病毒检测。
2. 样品短期可在4℃冷藏保存，较长时间保存应在--20℃或者-70℃，并且避免反复冻融。
检测步骤
1.核酸提取
样品进行适当处理后，可采用本公司的核酸提取试剂盒，该试剂盒可用于对样本中病毒RNA的提取，请按照提取试剂盒说明书进行操作。也可选择其他合适的商品化产品。
2.扩增试剂的准备
将样品数+1份阴性对照+1份阳性对照设为N，计算试剂所需量，反应体系配制见下表
| 试剂名称 | N份用量（20μL 体系） |
| AIV H9反应液 | 10μL×（N+1） |
| AIV H9酶 | 0.5μL×（N+1） |
| AIV H9引物探针 | 1.8μL×（N+1） |
| 无核酸水 | 5.7μL×（N+1） |
3.加样
将制备好的样本，阴性对照，阳性对照各取2μL分别加入对应反应管中，加完后盖紧PCR反应管盖，置于PCR仪上。
4.荧光PCR扩增与信号收集
| 循环数 | 温度（℃） | 时间 | 数据收集位点 |
| 1 | 45 | 15min | - |
| 1 | 95 | 2min | - |
| 40 | 95 | 15s | - |
| 60 | 1min | 数据收集 |
注：报告基团选FAM,淬灭基团选NONE。
结果成立原则
阳性对照：CT值＜30并有明显的扩增曲线。
阴性对照：无CT值或者CT值>37，线性为直线或者轻微斜线，无明显扩增曲线。
以上要求需同时满足，否则本次实验无效，需要重新进行。
结果判定
| CT值 | 样本检测结果 |
| <30并有明显的扩增曲线 | 阳性，样本中检测出AIV H9亚型。 |
| 30-37 | 可疑，需重复检测。若第二次检测CT值仍为30-37并有明显扩增曲线则判定为阳性，否则为阴性。 |
| >37并无扩增曲线 | 阴性，样本中未检测出AIV H9亚型。 |
1.反应体系应在特定配液区或者超净工作台中配制，整个实验过程严格控制污染。
2.PCR整个试验分配液区、模板提取区、扩增区。流程顺序为配液区→模板提取区→扩增区。严禁器材和试剂倒流。
3.使用不含荧光物质的一次性手套，一次性离心管。
4.反复冻融试剂将减低检测灵敏度，本试剂盒应在5次内用完.
5．-20℃保存的各试剂管使用前应在室温下完全融化，液体融化后需彻底混匀，2000 rpm离心15 s ，使用后立即放回-20 ℃。
6．在RNA提取过程中，避免RNA酶污染，尽量缩短操作时间。
7．注意防止试剂盒组分受污染。不要使用超过有效期限的试剂，试剂盒之间的成分不要混用。
8.PCR反应管避免气泡存在，管盖需盖紧。
9.不同批次的试剂盒勿混用。
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文献和实验实验室检测和快速诊断的标准如《GB/T 19438.1-2004禽流感病毒通用荧光RT-PCR检测方法》、《GB/T 19438.2-2004 H5亚型禽流感病毒荧光RT-PCR检测方法》、《GB/T 19438.3-2004 H7亚型禽流感病毒荧光RT-PCR检测方法》等。以上实时荧光定量PCR技术在禽流感检测方面的国家标准是该技术在当前的人感染猪流感诊断中应用的基础和前提。实时荧光定量PCR技术及在我国卫生应急中的应用要求实时荧光定量PCR技术（Real-time quantitative
刘金华 ，山东冠县人，1966年9月出生，现为中国农业大学动物医学院教授，长期致力于动物流感病毒研究，取得多项流感病毒科研成果。 他从基因水平证明了近年来发生于中国的H9N2禽流感病毒已在流感家族中形成了一稳定的谱系，不同于在中国周围国家发生的流感，有力地驳斥了国外的禽流感是由中国引起的。特别是，在世界流感研究中，首次证明了大陆流感与香港流感的分子区别。成功制备了H9亚型流感病毒血凝素单克隆抗体，并应用该系列抗体证明了世界各地的H9N2流感病毒的抗原
性禽流感 。该试剂包括检测 H5 抗原的酶联免疫试剂盒、胶体金试剂盒以及检测 H5 抗体的酶联免疫试剂盒在内，已经发展成为系列诊断试剂，既有能检测抗原的，也能检测抗体的；既能用于检测禽类，也能用于检测人；有 ELISA 法，也有胶体金法，根据不同的检测目的分别进行了试剂细化，能够满足不同检测目的的需要。该试剂具有灵敏度高、特异性好的显著特点，能及时、高效的检测出 H5N1 亚型禽流感病毒抗原或抗体，可检测标本包括排泄物、口鼻腔分泌物、鸡胚培养的完整病毒或裂解病毒以及血清，最快在 30 分钟 , 最迟
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