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- 详细信息
- 技术资料
- 保存条件:
室温(15~30℃)
- 保质期:
长期
- 英文名:
DNA Product Quick Clean-up Kit
- 库存:
995
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域,致力于为客户提供包括DNA产物快速纯化试剂盒多少钱在内的一系列分子生物学试剂产品,并提供一系列相关的技术服务。
名称:DNA产物快速纯化试剂盒多少钱
规格:50次|200次
英文名:DNA Product Quick Clean-up Kit
品牌:百奥莱博
产地:国产|进口
本试剂盒采用新型硅基质膜技术和试剂配方,通过离心吸附柱快速简单的结合-洗涤-洗脱三步即可从PCR产物或酶反应液(酶切,连接,探针标记等)中纯化回收100 bp-10 kb的DNA片段,每个吸附柱最高可吸附10μg的DNA,同时最大限度的去除引物、寡核苷酸、酶等杂质。纯化回收的DNA纯度及浓度高,完整性好,回收率高,可直接用于测序、连接和转化、标记、体外转录等分子生物学实验。
试剂盒组成:
| 组份 | 50次 | 200次 |
| Buffer PB | 30ml | 120ml |
| Buffer PS | 15ml | 60ml |
| Buffer PW(浓缩) | 6ml | 25ml |
| Buffer EB | 10ml | 30ml |
| 离心吸附柱DM及收集管 | 50套 | 200套 |
产品特点
1、快速简单:操作步骤少,15分钟完成,同时可处理多个样品,节省时间。
2、回收率高:新型硅基质膜技术和试剂配方保证每次最大量回收到纯度极高的目的DNA。
3、处理量大:每个离心吸附柱每次最多可吸附的DNA 量为10μg。
自备试剂:无水乙醇。
实验前准备及重要注意事项/strong>:
1、所有组分可在干燥、室温(15~30℃)环境稳定保存1年,更长时间保存可置于2- 8℃。当溶液低温保存时,使用前需在室温中放置一段时间,恢复至室温后使用。
2、本试剂盒可无选择性回收溶液中所有DNA片段,如需选择性回收特定片段,同时去除其他不同大小片段,请选择我公司的胶回收试剂盒(WE0168)
3、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer PW中加入无水乙醇。
4、使用前请检查Buffer PB是否出现结晶或者沉淀,如有结晶或者沉淀现象,可在37℃水浴几分钟,即可恢复澄清。
5、回收效率与初始DNA量和洗脱体积有关,初始量越少,洗脱体积越少,回收率越低。
6、所有离心步骤均可室温下进行。
操作步骤:
1、估计DNA反应液的体积,加入5倍体积的 Buffer PB,充分混匀(无需去除石蜡油或矿物油)。
注意:
1)如DNA反应体系为50μl(不包括石蜡油体积),则加入250μl Buffer PB。
2)在加入Buffer PB后检测溶液的pH值,若pH值>7.5,可向其中加入10-30μl的3 M醋酸*(pH5.0),从而将pH值调到5-7。
2、柱平衡:向已装入收集管中的吸附柱DM中加入200μl Buffer PS,13000rpm(~~~16200×g)离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
3、将步骤1中所得溶液加入到已装入收集管的吸附柱中,室温放置1分钟,13000rpm离心30-60 s,倒掉收集管中的废液,将吸附柱放回收集管中。
注意:吸附柱容积为750μl,若样品体积大于750μl可分批加入 。
4、向吸附柱中加入500μl Buffer PW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)13000rpm离心30-60 s,倒掉收集管中的废液,将吸附柱放回收集管中。
注意:如果纯化的DNA用于盐敏感实验(例如平末端连接实验或直接测序),建议加入Buffer PW后静置2-5分钟再离心。
5、13000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟,以彻底晾干。
注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除,乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。为确保下游实验不受残留乙醇的影响,建议将吸附柱开盖,置于室温放置数分钟,以彻底晾干吸附材料中残余的乙醇。
6、将吸附柱放到一个新离心管(自备)中,向吸附膜中间位置悬空滴加30-50μl Buffer EB,室温放置1分钟。13000rpm离心1分钟,收集DNA溶液。-20℃保存DNA。
注意:
1)洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液,应保证其pH值在7.0-8.5之间(可以用NaOH将水的pH值调到此范围)。
2)为了提高DNA的回收量,可将离心得到的溶液重新加到吸附柱中,室温放置2分钟,13000rpm离心1分钟。
3)洗脱体积不应小于30μl,体积过少会影响回收效率。
4)回收>10 kb的DNA片段时,Buffer EB应在50℃水浴中预热,适当延长吸附和洗脱时间,可增加回收效率。
储存条件:室温(15~30℃)。
除DNA产物快速纯化试剂盒多少钱外,我公司正在打折促销以下产品:
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DNA产物快速纯化试剂盒多少钱关键词:DNA产物快速纯化试剂盒,WE0170,DNA Product Quick Clean-up Kit
·快速实时荧光定量PCR的预混体系(荧光探针)(高含量ROX校正染料)
编号:WE0153
英文名称:Fast TaqMan Mixture(High ROX)
规格:5ml
本品是专用于探针法(TaqMan,Molecular Beacon等)实时荧光定量PCR的预混体系,浓度为2×,包含Fast Taq DNA Polymerase、PCR Buffer、dNTPs、Mg2+等,操作简单方便。主要用于基因组DNA靶序列和RNA反转录后的cDNA靶序列检测。本品含有的Fast Taq DNA Polymerase,能有效减少在常温条件下由引物和模板非特异性结合或引物二聚体而产生的非特异性扩增,酶的激活仅需在95℃孵育30s。整个PCR反应过程比普通反应可节省约40分钟,大大缩短了PCR的反应时间。独特的PCR缓冲体系与快速热启动酶的组合,有效抑制了非特异产物的产生,并显著提高了PCR的扩增效率,荧光信号更强,灵敏度更高,线性范围更宽。该产品适用范围广,可用于普通和快速定量PCR程序。
ROX染料用于校正定量PCR仪孔与孔之间产生的荧光信号误差,一般用于ABI、Stratagene等公司的Real Time PCR 扩增仪。不同仪器的激发光学系统有所不同,因此ROX染料的浓度必须与相应的荧光定量PCR仪相匹配。
不需要ROX校正的仪器(WE0151):
Roche LightCycler 480,Roche LightCyler 96,Bio-rad iCyler iQ,iQ5,CFX96等。
需要Low ROX校正的仪器(WE0152):
ABI Prism7500/7500 Fast,QuantStudio® 3 System,QuantStudio® 5 System,QuantStudio® 6 Flex System,QuantStudio® 7 Flex System,ViiA 7 system,Stratagene Mx3000/Mx3005P,Corbett Rotor Gene 3000等。
需要High ROX校正的仪器(WE0153):
ABI Prism7000/7300/7700/7900,Eppendorf,ABI Step One/Step One Plus等。
试剂盒组成:
| 组份 | WE0151-5ml | WE0152-5ml | WE0153-5ml |
| 2×Fast TaqMan Mixture | 5×1ml | 5×1ml | 5×1ml |
| 50×Low ROX | - | 200μl | - |
| 50×High ROX | - | - | 200μl |
| ddH2O | 5×1ml | 5×1ml | 5×1ml |
注意事项:
1、使用前请上下颠倒轻轻混匀,尽量避免起泡,并经短暂离心后使用。
2、避免反复冻融本品,反复冻融可能使产品性能下降。本产品长期保存可置于-20℃,避光。如果在短期内需要频繁使用,可在2~8℃保存。
使用方法:
以下举例为常规PCR反应体系和反应条件,实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。
1、PCR反应体系
| 试剂 | 50μl反应体系 | 终浓度 |
| 2×Fast TaqMan Mixture(With ROX) | 25μl | 1× |
| Forward Primer,10μM | 1μl | 0.2μM |
| Reverse Primer,10μM | 1μl | 0.2μM |
| Probe,10μM | 1μl | 0.2μM |
| Template DNA | 2μl | |
| 50×Low ROX or High ROX(可选) | 1μl | 1× |
| ddH2O | up to 50μl |
注意:
1)通常引物浓度以0.2μM可以得到较好结果,可以在0.1-1.0μM作为设定范围的参考。
2)所用探针的终浓度,与使用的荧光定量PCR仪、探针种类、荧光标记物质种类有关,实际使用时请参照仪器说明书,或各荧光探针的具体使用要求进行浓度的调节。
3)通常DNA模板的量以10-100ng基因组DNA或1-10ng cDNA为参照,因不同物种的模板中含有的目的基因拷贝数不同,可对模板进行梯度稀释,以确定最佳的模板使用量。
4)不同仪器的激发光学系统有所不同,根据使用荧光定量的仪器选择加入50× Low ROX or 50×High ROX。
2、PCR反应程序:
建议采用两步法PCR反应程序,本程序是以ABI 7500荧光定量PCR仪为参照设定。
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 预变性 | 95℃ | 30 s | |
| 变性 | 95℃ | 5 s | 35-40 个循环 |
| 退火/延伸 | 60℃ | 30 s |
注意:
1)本产品所采用的酶须在预变性95℃、30s条件下实现酶的活化。在此条件下,大多数模板可良好的进行解链。对GC含量高、二级结构复杂的模板,可将预变性时间延长至1-4分钟,以使起始模板充分解链。
2)建议采用两步法PCR反应程序,若因使用Tm值较低的引物等原因,得不到良好的实验结果时,可尝试进行三步法PCR扩增,退火温度请以 56℃-64℃的范围作为设定参考。
储存条件:-20℃,避免反复冻融
DNA产物快速纯化试剂盒多少钱关键词:DNA产物快速纯化试剂盒,WE0170,DNA Product Quick Clean-up Kit
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CD117 dNTP Mixture(2.5mM each)
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DNA产物快速纯化试剂盒多少钱
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