DNA产物纯化试剂盒，阿拉丁

产品内容：

产品简介：

本试剂盒采用新型硅基质膜技术和试剂配方，通过快速简单的结合-洗涤-洗脱三 步即可从PCR产物或酶反应液（酶切，连接，探针标记等）中纯化回收100 bp-10 kb的 DNA片段，每个吸附柱最高可吸附10 μg的DNA，同时最大限度的去除引物、寡核苷酸、 酶等杂质。纯化回收的DNA纯度及浓度高，完整性好，回收率高，可直接用于测序、 连接和转化、标记、体外转录等分子生物学实验。

自备试剂：无水乙醇。

实验前准备及重要注意事项：

1 ．所有组分可在干燥、室温（15-30℃)环境稳定保存1年，更长时间保存可置于2- 8℃。 当溶液低温保存时,使用前需在室温中放置一段时间，恢复至室温后使用。

2 ．本试剂盒可无选择性回收溶液中所有DNA片段，如需选择性回收特定片段，同时去除其他不同大小片段，请选择我公司的胶回收试剂盒。

3 ．第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer PW中加入无水乙醇。

4 ．使用前请检查Buffer  PB是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀现象，可在37℃ 水浴几分钟，即可恢复澄清。

5 ．回收效率与初始DNA量和洗脱体积有关，初始量越少，洗脱体积越少，回收率越低。 

6 ．所有离心步骤均可室温下进行。

操作步骤

1.估计DNA反应液的体积，加入5倍体积的 Buffer PB，充分混匀（无需去除石蜡油或 矿物油） 。

注意：1) 如DNA反应体系为50 µl(不包括石蜡油体积)，则加入250 µl Buffer PB。

2)在加入Buffer PB后检测溶液的pH值，若pH值＞7.5 ，可向其中加入10-30 μl的3 M醋酸钠（pH5.0 ）， 从而将pH值调到5-7。

2.柱平衡：向已装入收集管中的吸附柱（Spin Columns DM）中加入200 μl Buffer PS， 13,000 rpm（~16,200×g）离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回 收集管中。

3.将步骤1中所得溶液加入到已装入收集管的吸附柱中，室温放置1分钟， 13,000 rpm 离心30-60 s，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。

注意：吸附柱容积为750 µl，若样品体积大于750 µl可分批加入 。

4.向吸附柱中加入500 µl Buffer PW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇）13,000 rpm 离心30-60 s，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。

注意：如果纯化的DNA用于盐敏感实验（例如平末端连接实验或直接测序），建议加入Buffer PW后 静置2-5分钟再离心。

5.13,000 rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。

注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应（酶切、  PCR等）。为确保下游实验不受残留乙醇的影响，建议将吸附柱开盖，置于室温放置数分钟，以彻

底晾干吸附材料中残余的乙醇。

6.将吸附柱放到一个新离心管（自备）中，向吸附膜中间位置悬空滴加30-50 µl Buffer EB，室温放置1分钟。 13,000 rpm离心1分钟，收集DNA溶液。 -20℃保存DNA。

注意： 

1 ）洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液，应保证其pH值在7.0-8.5之间 （可以用 NaOH将水的pH值调到此范围）。

2 ）为了提高DNA的回收量，可将离心得到的溶液重新加到吸附柱中，室温放置2分钟，13,000 rpm 离心1分钟。

3 ）洗脱体积不应小于30 μl ，体积过少会影响回收效率。

4 ）回收＞ 10 kb的DNA片段时， Buffer EB应在50 ℃水浴中预热，适当延长吸附和洗脱时间，可增加 回收效率。