大肠杆菌DH10B化学感受态细胞批发

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产销*(代"售")大肠杆菌DH10B化学感受态细胞批发，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：大肠杆菌DH10B化学感受态细胞批发
品牌：百奥莱博
规格：0.1mL*10
英文名：E.coli DH10B Chemical Competent Cell
编号：BTN140374
产地：国产|进口
本产品是采用大肠杆菌DH10B菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的化学转化。

产品特点：
1. 使用 pUC19质粒检测，转化效率可达10⁸，-80℃保存几个月转化效率不发生改变。
2.可用于高效转化150Kb大小的质粒，可用于蓝、白斑筛选。
3. DH10B菌株基因型：F- mcrA Δ(mrr -hsdRMS-mcrBC)Φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1araD139 Δ(ara,leu)7697 galU galK λ- rpsL nupG
4. 本产品质量稳定，使用方便，质优价廉。

储存条件：干冰运输、-80℃保存，有效期半年。

自备试剂：目的DNA、SOC或LB培养基等

使用方法：
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl，可以根据实际情况分装使用。
以下实验以100μL感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA，通常100μl感受态细胞能够被1ng超螺旋质粒DNA 所饱和)，用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。
3. 42℃热击90秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。
4. 每个离心管中加入450μl 无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素)，混匀后置于37℃摇床，150rpm 振荡培养45分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含有相应抗生素的LB 固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16小时。

注意事项：
1、涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA 总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA总量较少，可取200-300μl转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少，可通过离心(4,000rpm ，2分钟)后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2、新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
3、涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

除大肠杆菌DH10B化学感受态细胞批发外，我公司正在打折促销以下产品：

·柱式真菌DNA提取试剂盒
编号：BTN70901
英文名称：Fungus DNA Column extraction kit
规格：50次
本试剂盒是真菌DNA提取试剂盒的柱式升级产品，能够破裂各种真菌坚硬的外壳，同时使用硅胶膜DNA 纯化技术，得到的DNA适用于各种后续实验。

试剂盒特点：
1. DNA 纯净，OD260/280一般都在1.9左右、DNA片段大小在30-50 Kb左右，可直接用于PCR、酶切、杂交等。
2. 操作简单，整个过程约15分钟，比大多数同类产品短。
3. 安全无毒，本试剂盒对人体无毒，无腐蚀性和刺激性气味。
4.液体培养物处理量在0.1-3mL之间，真菌菌丝、孢子、子实体的处理量在0.1-0.5g之间。
5. 价廉物美，与国外同类产品相比质量相当，但价格便宜。

试剂盒组成：

 

成分	规格
溶液A	50ml
溶液B	50ml
溶液C	50ml
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
DNA洗脱液	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输及保存，有效期一年。

使用方法：
1. 称取0.1-0.5g 湿的真菌菌丝、孢子、子实体或0.1-3mL液体培养物离心得到的沉淀，转移到塑料研钵中，液氮研磨成粉后转移到一个干净的1.5mL塑料离心管中。
 注意：最好避免使用含二氧化硅的玻璃研钵，因为DNA 会吸附在表面，影响得率。如果菌丝或子实体等已经十分干燥，则使用量最好比上面推荐的使用量低5-10倍；如果需要预先从环境中对真菌进行纯化(如从血液病原真菌中提取DNA，则需要先去除红细胞等成份，具体方法请参考相关文献和相关产品的使用说明书，如红细胞裂解液)。
2.在离心管中加入1mL 65℃预热的溶液A并用移液枪头充分吹打混匀(如果溶液A有沉淀，需先在65℃加热溶解后摇匀再使用)。
3. 65℃保温5-30分钟，其间最好吹打混匀2-3次。
4. 12000～15000g室温离心3分钟。
5. 将不超过0.75mL的上清转移到新离心管中。有时候上清液中还会有少量细小悬浮物，但对后续操作没有影响，不必进行特殊处理。
6.在上清液中加入等体积的溶液B，上下颠倒30秒充分混匀，溶液将呈白色混浊状。
7. 将其置于冰浴中放置5-10分钟。
8. 12000～15000g室温离心3分钟，转移上清到新的1.5mL塑料离心管中。
9. 加入0.2mL的*仿(自备)，震荡器上充分振荡30秒混匀。
10. 12000～15000g室温离心3分钟，两相交界面将有白色膜状物，小心转移上清到新1.5-5mL塑料离心管中。注意：由于下一步要加1.5倍体积的溶液C，所以新的离心管的体积要足够大。
11. 加入1.5倍体积的溶液C，上下颠倒30秒混匀，然后分多次的将混合液转移到离心吸附柱中。
12. 每次转移0.7-0.8mL 混合液后，室温放置5-10分钟。
13. 12000～15000g室温1分钟，弃穿透液。
14. 对需要多次上柱的样品，可以在此将剩余的样品加到离心吸附柱式中，重复第12-14 步的操作。
15. 将0.7mL 通用洗柱液加入离心柱，室温离心1分钟，弃穿透液。
16.在离心吸附柱中加入0.3mL的通用洗柱液，12000～15000g离心半分钟(此步为第二次洗涤)。
17. 空甩1分钟去除残留液体。
18. 将离心柱放置在一新的1.5mL塑料离心管中，加入30-100μL通用洗脱液。
19.室温放置5分钟后离心1分钟，管底即为真菌DNA溶液，可立即使用，也可长期保存在－20℃。
20.可以重复上步一次，以洗脱更多的DNA。


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·一步法96孔板质粒DNA提取试剂盒(真空法)
编号：BTN131198
英文名称：One-step plasmid DNA extraction kit with 96-wells plate
规格：1次

·T7核酸内切酶I
编号：BTN130635
英文名称：T7 Endonuclease Ⅰ
规格：250U
T7核酸内切酶I识别并切割不完全配对DNA、十字型结构DNA、Holliday结构或交叉DNA、异源双链DNA或者以更慢的速度切割含切刻的双链DNA。该酶切割错配碱基5´端的第一、第二或第三个磷酸二酯键。其反应原理图如下：


产品用途：
1．识别错配DNA。
2．分解四方向交叉DNA或分支DNA。
3．检测或切割异源二聚体DNA和切刻DNA。
4．随机切割线性DNA进行shot-gun克隆。

产品组成：

成分	规格
T7 核酸内切酶I，10000U/mL	25μl
10×反应缓冲液	1.25ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

活性定义：1单位指在 50μL反应体系，37℃条件下，1小时将90%以上的1μg超螺旋十字型结构的pUC(AT)转化成90%以上的线性结构所需要的酶量。
* pUC(AT)来自 pUC19，在其 EcoRI和PstI 位点之间的多克隆位点处有修改。

实验步骤举例(使用T7核酸内切酶I消化PCR产物确定基因打靶效率)：
1．在一个塑料离心管中，按次序加入下列成分：

成分	加入量
PCR产物	200ng
10×反应缓冲液	2μl
超纯水	补水到19μl

2．取上步溶液，在PCR 仪内进行如下操作：

步骤	温度	时间
初步变性	95℃	5min
Annealing	95-85℃	-2℃/second
	85-25℃	-0.1℃/second
Hold	4℃

3．添加T7核酸内切酶I至退火后的PCR产物(20μL体系)：

成分	加入量
PCR产物	19μl
T7 核酸内切酶I	1μl

4．37℃保温15分钟。
5．添加1.5μL 0.25M EDTA终止反应。

备注：
T7核酸内切酶I是一种具有底物结构选择性的酶。该酶以不同的活性作用于不同的DNA底物。切割特定底物时，必须控制酶量和反应时间。反应温度超过42℃时，会增加非特异性核酸酶活性。


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2′-脱氧胸苷-5′-三磷酸三*盐 Carvacrol 18423-43-3
BTN81214 Tricine-SDS-PAGE阳极电泳液(干粉) Tricine-SDS-PAGE Cathod Buffer
乙酸*溶液(3mol/L,pH4.8,RNase free)   500ml
血液总RNA提取试剂盒 
F040107 鸡卵清蛋白偶联沙丁胺醇 OVA-SAL
BTN90403 蛋白胶中量回收试剂盒 Protein Gel Midi-Extraction Kit
ARB12435 大鼠骨形成蛋白-2(BMP-2)ELISA检测服务 Rat bone morphogenetic protein 2,bmp-2 ELISA KIT
ECL化学发光法检测试剂盒"
J0303                 兔抗猪IgG(H+L)抗血清                       
金胺-酚染色液   3×20ml
ARB11418 人结缔组织活化肽Ⅲ(CTAPⅢ)ELISA代测服务 Human connective tissue-activating Peptide Ⅲ,ctapⅢ ELISA KIT
BL0646 丁基-琼脂糖凝胶4B Butyl -Sepharose 4B
F030102 HRP标记小鼠抗乙肝e抗原抗体 Monoclonal Mouse Anti-HBeAg*HRP
5486-84-0 Fast Blue BB Salt 固蓝BB盐
细胞蛋白提取试剂盒 Cell protein extraction kit  50T|100T
ARB11113 人乳腺癌易感蛋白1(BRCA-1)ELISA检测服务 Human breast cancer susceptibility protein 1,brca-1 ELISA KIT

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