大肠杆菌T1化学感受态细胞打折促销

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产销*(代"售")大肠杆菌T1化学感受态细胞打折促销，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：大肠杆菌T1化学感受态细胞打折促销
编号：BTN140391
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
规格：0.1mL*10
英文名：E.coli T1 Chemical Competent Cell
 本产品是采用大肠杆菌Mach1-T1 Phage Resistant菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的化学转化。

产品特点：
1. 本感受态细胞是目前生长速度最快的感受态细胞，在*苄青霉素平板上，8-9h可见克隆；用于蓝、白斑筛选，12 h可见蓝斑；将过夜培养的单克隆在2ml的LB培养基中培养4-5h即可进行小量质粒提取。
2.适用于高效的DNA克隆和质粒扩增，减少克隆DNA同源重组的发生，提高质粒DNA的产量和质量。
3. 本产品具有T1，T5噬菌体抗性。
4. 使用pUC19质粒检测，转化效率可达109cfu/μg。

菌株基因型：F- φ80(lac Z)ΔM15 ΔlacX74 hsdR(rkmk+)ΔrecA1398 endA1 tonA

储存条件：干冰运输、-80℃保存，有效期半年。

自备试剂：目的DNA、SOC或LB培养基等。

使用方法：
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μL，可以根据实际情况分装使用。
以下实验以50μl感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA，通常100μL感受态细胞能够被1ng超螺旋质粒DNA 所饱和)，用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。
3. 42℃热击45秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。
4. 每个离心管中加入450μl无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素)，混匀后置于37℃摇床，150rpm 振荡培养45分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16小时。

注意事项：
1. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA 总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA 总量较少，可取200-300μl转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少，可通过离心(4,000rpm，2分钟)后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2. 新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
3. 涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

关于大肠杆菌T1化学感受态细胞打折促销的更详细说明，请致电我公司咨询，我们将以最饱满的热情为您提供解答，此外，我公司专业供应下列产品：

·一站式DNA非变性PAGE电泳套装
编号：BTN100205
英文名称：One-Stop DNA Native PAGE Pack
规格：30次
本品就是专门用于非变性PAGE的试剂。非变性PAGE电泳是研究SSCP-PCR(single-strand conformation polymorphism-PCR、单链PCR片段构象多态性)和凝胶滞阻(Gel Shift)的重要研究手段，因为在非变性PAGE中，DNA的迁移率除跟长短相关外，还跟其构象和结合的蛋白质相关。

产品特点：
1.一站式，用户只需要准备水和样品，十分方便。
2. 安全，免去了实验人员接触粉末状的剧毒物品丙*(代"烯")酰胺。
3. 灵活，高浓度的丙*(代"烯")酰胺溶液可用于配制各种浓度的PAGE胶，分开提供的丙*(代"烯")酰胺和甲叉双丙*(代"烯")酰胺可用于配制各种交联度的PAGE胶。
4. PAGE电泳后可直接用于银染等后续试验。

产品组成：

 

成分	规格	保存
丙*(代"烯")酰胺	60g	室温
甲叉双丙*(代"烯")酰胺	2g	室温
TEMED	1.5ml	4℃，避光
过硫*(代"酸")铵(干粉)	1g	室温
非变性PAGE上样液，2×	1ml	4℃
10×TBE(BTN90313)	250ml	室温
说明书	1份

储存条件：常温运输，保存条件见上表，有效期一年。

使用方法：
用于SSCP-PCR分析的非变性PAGE电泳(其他应用请相应修改参数)

一、PAGE浓度的选择：最好使用浓度为5-12%的丙*(代"烯")酰胺胶，因为SSCP-PCR的扩增长度一般在150-200bp之间，而5%的PAGE的有效分辨范围为80-500bp、8%的PAGE的有效分辨范围为60-400bp、12%的PAGE的有效分辨范围为40-200bp。

二、PAGE交联度的选择：交联度越低，孔径越大，对DNA分子构象的变化越灵敏，SSCP分辨率越高，但过低则胶太软，不好进行电泳后的后续操作，所以一般选择1-2%的交联度(即丙*(代"烯")酰胺：甲叉双丙*(代"烯")酰胺在49:1到48:2之间)。

三、体积的选择：SSCP-PCR检测需要长约30-40cm的测序胶板，可以结合梳子的厚度，计算胶的体积。
操作：
1. 配制PAGE胶(这是配制100mL胶的用量，配制更大体积的胶则需以此用量为基础按比例增加)
A：新鲜配制10%的APS(过硫*(代"酸")铵)：按每0.1克过硫*(代"酸")铵干粉加1mL超纯水的比例将水加到装有硫*(代"酸")铵干粉的1.5mL EP管中，摇晃到粉末全部溶解。配制好的10%的APS溶液可以在4℃存放一周。
B：新鲜配制适当交联度29:1的30%的丙*(代"烯")酰胺-甲叉双丙*(代"烯")酰胺溶液(AB溶液，下同)：在本产品提供的装有60 g丙*(代"烯")酰胺干粉的塑料瓶中加入146mL自备的去离子水和全部的甲叉双丙*(代"烯")酰胺，充分摇晃直到溶解(约需10-20分钟)，即得到30%的AB(29:1)溶液。此溶液最好在一个月内用完，必须4℃避光保存。
C：配SSCP PAGE胶：在一个250mL的三角瓶中，先按下表的用量加入去离子水、30% AB溶液溶液和10×TBE缓冲液。丙*(代"烯")酰胺单体溶液具有神经毒性，一定要戴手套操作。

PAGE胶浓度	各成分用量(单位：ml)			总体积(ml)
	去离子水	30%AB溶液	10×TBE缓冲液
5%	73.4	16.6	10.0	100
6%	70.0	20.0	10.0	100
7%	66.7	23.3	10.0	100
8%	63.3	26.7	10.0	100
9%	60.0	30.0	10.0	100
10%	56.7	33.3	10.0	100
11%	53.3	36.7	10.0	100
12%	50.0	40.0	10.0	100

注：有大量文献报道PAGE胶中加入5%-10%的甘油能提高某些位点的分辨率。如果选择加入10%的甘油，则减少去离子水的用量10mL，同时加入10mL甘油。
D：摇晃混匀。最好能抽真空10-15分钟以去除溶液中的氧气(氧气能抑制丙*(代"烯")酰胺聚合反应)，无条件也可以不脱氧。
E：加入500μL 10%APS和100μL TEMED，迅速摇匀后倒胶。
F:在胶的液面距离达到顶部时停止灌胶，插入梳子。
G:室温聚合30-60分钟(低温抑制聚合反应)。
H: 拔出梳子，用1×TEB液冲洗加样孔。
I: 放4℃冰箱预冷30分钟-12小时。为了防止胶收缩，最好顶部加少量1×TBE缓冲液。预冷的胶有利于保持单链DNA的构型。
2. 将预冷的凝胶板固定在电泳装置上，往上槽和下槽中加入足够1×TEB电泳液。
3. 取3-5μl SSCP-PCR样品，加入等体积2×非变性PAGE上样液，85℃处理5分钟后冰浴。用前短暂离心后取2μl上样。
4.连接电源线，打开电源开关。如果PAGE中不含甘油，则使用25W的功率，电泳5-7小时(对3—40cm长的PAGE胶而言)。如果使用含甘油的PAGE，则使用8W的功率，电泳16-18小时。由于温度变化过大会改变DNA构型，所以电泳时最好能保持恒温。对不含甘油的PAGE，最好恒温在4℃、对含甘油的PAGE，最好恒温在25℃。
5. 终止电泳，取出凝胶进行后续的处理(如银染)。

疑难解答：
一、为何SSCP-PCR带型有复合条带？
原因之一：可能是残留的PCR引物跟单链的DNA结合形成迁移率不同的条带。解决方法是稀释PCR或电泳前将PCR产物进行纯化。
原因之二：可能是PCR产物用量过高，彼此复性。解决办法是将PCR产物稀释后4-8倍后使用。
二、如何提高电泳分辨率？
可以在配胶时加入甘油(终浓度为5%-10%)，因为甘油是弱变性剂，能部分展开DNA折叠结构，增加表面积，增加电泳时位移差异。但加入甘油后粘性变大，电泳速度变慢，因此只适合室温电泳使用，不要4℃电泳。如果条件允许，最好同时做加甘油和不加甘油的电泳实验。


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ARB14243 人酪*酸酶(TyR)elisa测定使用说明书 
F020110 山羊抗乙肝核心抗原抗体 Polyclonal Goat Anti-HBcAg
PY02-418  LESEndo琼脂  250克  
Rosetta(DE3)感受态细胞 
酰基辅酶A氧化酶 L-Methionine ethyl ester hydrochloride 61116-22-1
CYB162022 兔抗猴IgG(抗血清) 0.5ml
α-紫罗酮 Albumin(bovine serum) 127-41-3
E0102 抗凝新生牛血(无菌 袋装) 500ml/1000ml/2000ml
ARB13369 牛总抗氧化能力(T-AOC)酶联免疫定量检测 
BTN70603 土壤腐殖酸清除剂 Soil Humic Acid Erasol
α-酮基缬*酸*盐 Glutathione Sepharose 4FF 51828-94-5
SJ0204 D(+)Galactosamine hydrochloride D-*基半乳糖盐*(代"酸")盐
BL0777 基底胶9.6mg/ml
革兰氏阳性菌蛋白提取试剂盒 Gram positive bacterial protein extraction kit  50T|100T
S-腺甘基蛋*酸 Calcium propionate 17176-17-9
脂多糖 VAZO67
77-92-9 Citric acid 柠檬酸
DH5α化学感受态细胞 20×100ul
1-*基-3-甲基-5-吡唑酮 Ruthenium Red 89-25-8
CYB161008 兔IgG(冻干粉)
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·Bradford法蛋白定量试剂盒
编号：BTN80814
英文名称：Bradford Protein Assay Kit
规格：100mL
Bradford法测定蛋白质浓度是最为常用的蛋白检测方法之一，在酸性条件下，考马斯亮蓝染料能与蛋白质结合形成复合物，其最大吸光值也由465nm转移到595nm，通过颜色的强弱测定蛋白质浓度的高低。本产品是基于Bradford法蛋白检测原理开发的产品。

产品特点：
1．快速，10-20个样品只需要10分钟即可完成测定。
2．稳定，加样混匀后2分钟既可测定，1小时内吸光度变化不超过10%。
3．线性范围在 50～1000μg/mL。
4．最小测量体积为1-20μL，最低测量蛋白量为0.5μg。
5．即开即用，不需要单独购买每个成分再配制。
6．有常规和微量两种检测模式。
7．不受绝大部分样品中的化学物质的影响。巯基乙醇的浓度可高达1M，二硫苏糖醇的浓度可高达5mM。
8．但受略高浓度的表面活性剂影响，各种蛋白质与染料的结合效率可能有差异。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	100ml
BSA标准(2mg/mL)	1ml
滤纸	20张
说明书	1份

储存条件：常温运输和保存，BSA 标准-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

一、常规检测流程：
此方法在蛋白浓度30-1000μg/mL范围内呈现R2 = 0.996的直线线性回归，可精确定量蛋白浓度在此范围内的蛋白样品。
1．制备 1×工作液。溶液A与无菌水按1：4 比例充分混合即为1×工作液(例：4mL溶液A+ 16mL 无菌水 = 20mL 1×工作液)。
2．滤纸过滤。过滤后的工作液室温条件下可稳定使用1-2 星期。
3．检测：蛋白样品与1×工作液按1：50 比例混合(例：100μl蛋白样品 + 5mL 1×工作液，适用于3mL的比色杯；40μl蛋白样品 + 2mL 1×工作液，适用于1mL的比色杯；20μl蛋白样品 + 1mL 1×工作液，适用于平底透明96孔板)。
4．加样后，充分混匀。
5．室温放置5分钟。
6．检测吸光度。波长设定 = 595nm。
注意事项：
1．不同型号、规格的滤纸，具有不同的孔径，导致可通过的分子各不相同。请使用本公司指定提供的滤纸，否则会导致不同的测定结果。
2．检测样品之前，应首先制备蛋白标准曲线。一般可使用BSA。
a)常规检测：建议使用下述浓度的BSA。
 0μg/mL、31.25μg/mL、62.5μg/mL、125μg/mL、250μg/mL、500μg/mL、750μg/mL、1000μg/mL
b)微量检测：建议使用下述浓度的BSA。
 0μg/mL、2.5μg/mL、5μg/mL、7.5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL。
3．检测细胞提取物或纯化蛋白样品，应使用相应的缓冲液制备蛋白标准曲线。
4．用 96孔板测定时，应确保没有气泡，否则会绝对增加吸光度的读数。
5．此检测试剂不受绝大部分样品中的化学物质的影响。巯基乙醇的浓度可高达1M，二硫苏糖醇的浓度可高达5mM。但受略高浓度的表面活性剂影响。若SDS高于0.1%，TritonX-100高于0.1%，Tween20，60，80高于0.06%，可取少量样品加水稀释到适当浓度，再行测定。

二、微量检测流程：
此方法在蛋白浓度1～20μg/mL范围内呈现R2=0.992的直线线性回归，可精确定量蛋白浓度在此范围内的蛋白样品。
1．蛋白样品与溶液A按4:1比例混合，例：

蛋白样品	溶液A	适用性
400μL	100μL	平底透明96孔板
2mL	0.5mL	1mL的比色杯
4mL	1mL	3mL的比色杯

2．加样后，充分混匀。
3．室温放置5分钟。
4．检测吸光度。波长设定= 595nm。
注意事项：
1．Bradford蛋白浓度测定的显色反应受许多去污剂的影响。应避免使用SDS，Triton X-100，Tween等溶解蛋白样品。对于难溶解的蛋白样品，可用1MNaOH 溶解和稀释。
2．Bradford蛋白浓度测定的显色反应依赖于蛋白中精*酸残基的数目，因此不同蛋白间测定的差异可能较大。
3．标准品曲线配制时，如果吸量不准确或者加样枪不精确会造成标准曲线相关系数减小，可根据需要使用倍比梯度稀释的方法来配制，或者使用精确度高的加样枪。
4．由于Bradford法在蛋白浓度增高到一定时候，颜色反应并不成比例增加，因此得到的标准曲线只是在一定范围内可以近似看成直线，每次应按照实际测得的标准曲线计算出相对精确的蛋白浓度。
5．不像其它一些蛋白浓度测定方法(包括Lowry法)，Bradford法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响。样品中巯基乙醇的浓度可高达1M，二流苏糖醇的浓度可高达5mM。但受略高浓度的去垢剂影响。需确保SDS低于0.125%，Triton X-100低于0.125%，Tween 20低于0.06%，可以考虑用超纯水稀释，透析/除盐，ACETONE/TCA沉淀蛋白后重溶于超纯水等方法来消除干扰物质的影响。

北京百莱博科技有限公司专业生产供应销*(代"售")生物试剂、化学试剂、抗原抗体、血清血浆、Elisa试剂盒，更多试剂产品需求，欢迎来电咨询选购大肠杆菌T1化学感受态细胞打折促销。