大提柱式动物DNA提取试剂盒 DNA纯化

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

大提柱式动物DNA提取试剂盒 DNA纯化的品牌：百奥莱博，是优质的DNA纯化产品，用于生化研究，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多大提柱式动物DNA提取试剂盒等DNA纯化产品请联系我司咨询订购。

名称：大提柱式动物DNA提取试剂盒 DNA纯化
编号：BTN80923
规格：4次
英文名：Animal DNA Column large-scale extraction kit
本试剂盒在柱式动物DNA提取试剂盒(BTN71206)基础上改良而得的大提升级产品，主要用于大量快速提取新鲜或冷冻的动物组织中的基因组DNA。

产品特点：
1.处理量是柱式动物DNA提取试剂盒的10-20倍。
2. DNA 纯净，大多数DNA样品的OD260/280 值在1.8-1.9之间，无可见的RNA污染，可直接用于PCR、酶切、杂交等后续反应。
3. DNA产率一般在0.5-2mg/g(具体跟组织有关)。
4.快速，整个过程室温操作约需20分钟。
5. 安全无毒，本试剂盒对人体无毒，无腐蚀性和刺激性气味。

试剂盒组成：

 

成分	规格
溶液A	100ml
溶液B	100ml
大提离心吸附柱	4套
通用洗柱液	100ml
DNA洗脱液	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输及保存、有效期一年。

使用方法：
1.溶液A和溶液B在放置在4℃放置可能会产生沉淀，用前需要在65℃水浴中加热直到沉淀全部溶解，用前还需要充分摇匀。
2. 估算组织细胞的用量。每次大量提取一般需要1-5g动物组织、剪切成小块。
3. 先将剪切成小块的动物组织，放入50mL塑料离心管中，加入25mL溶液A，然后用匀浆器匀浆。匀浆时会产生泡沫，但不影响提取效果。
4. 65℃保温5分钟。
5. 12000～15000g室温离心3～5分钟。
6.小心将上清液转移到一新的50mL塑料离心管中。
 注意：下面第7-9 步的*仿抽提操作可以省略，直接进入第10 步，但DNA的产量会低30%左右，OD260/280不受影响。
7. 加入5mL的自备*仿，振荡器上充分振荡混均30秒。
8. 12000～15000g室温离心3～5分钟。
9.小心将上清液转移到一新的离心管中。
10. 加入等体积的溶液B，充分混匀。
11.一次或分两次上柱，每次上柱后室温放置2分钟。12000～15000g室温离心半分钟，弃穿透液。
12. 加25mL 通用洗柱液到离心吸附柱中，12000～15000g室温离心半分钟，弃穿透液。
13. 重复上步一次。
14. 12000～15000g室温再离心半分钟。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液会污染DNA。
15. 将离心吸附柱转移到一新的50mL塑料离心管中，加入1mL 通用洗脱液。
16.室温放置离心吸附柱1-2分钟。
17. 12000～15000g室温离心半分钟，离心管中溶液即为DNA样品，可以立即使用或存放于冰箱待用。

关于大提柱式动物DNA提取试剂盒 DNA纯化的更详细说明，请致电我公司咨询，我们将以最饱满的热情为您提供解答，此外，我公司专业供应下列产品：

·PCR专用LIC克隆套装
编号：BTN120402
英文名称：LIC Cloning Kit for PCR
规格：1μg
本产品就是基于LIC原理开发的即用型载体。LIC就是不依赖于连接的克隆技术(Ligation-Independent Cloning),它是继限制性内切酶切/连接酶克隆方法后出现的第二代DNA克隆技术，它效率高,尤其适用于大规模分子克隆，其原理如下：


产品特点：
1. 操作简单,一管式一步反应,只需加入插入片段即可,客户不需要购买任何额外的酶。
2.时间短,整个过程只要15分钟。
3.高效,比常用的AT克隆效率更高,阳性率接近于100%。
4. 克隆方向和位置精准和可控,适合表达型克隆工作。
5. 便于自动化,适合高通量克隆。
6.适用于长片段克隆。

产品组成：

成分	规格
LIC载体(50μg/μL)	1μg
溶液A	10μl
溶液B	150μl
阳性对照插入片段	8μl
说明书	1份

储存条件：-20℃运输及保存，有效期一年。

一. PCR引物设计,合成和PCR反应
1. 按常规方法设计PCR引物,只是必须在一条引物5´端再加上GGCGGCCGCGGTAC序列,在另一条引物5´端加上GGCGCCGGCGGTAC序列。此序列决定克隆的方向,如果不在乎方向,可以随机组合。
2. 所用引物最好为HPLC纯化获得。注意：如果购买本公司产品,免费合成LIC引物一对。
3. 按常规的方法进行PCR,最好使用高保真DNA聚合酶。
4. 按常规的胶回收的方法回收PCR片段。注意：必须去除残余的dNTP和PCR引物,否则会极大降低LIC效率。
5. 对PCR片段电泳定量,即电泳后通过肉眼比较PCR片段和DNA Marker的相对强度,通过DNA Marker条带的浓度(一般商品化的DNA Marker每条带的浓度都是已知的)推测出PCR片段的浓度。
二. PCR片段与载体退火
1.在纯化的2μL PCR产物中加入0.4μL溶液A、2μL载体(100ng)以及5μL溶液B,混合。
 注意：PCR产物跟载体的摩尔数比例最好是1：1。
2.室温放置5分钟。注意：保温时间长短很关键,不要轻易延长或缩短。
3.在PCR仪器上按75℃ 10分钟,然后放冰上或-20℃待用。
三.转化
1. 按常规方法进行转化。
2. 按菌落PCR方法筛选,可选用我公司的菌落PCR试剂盒(BTN50901)。进行快速筛选,需要T7和SP6 RNA聚合酶启动子引物。


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·*苄青霉素干粉
编号：BTN60101
英文名称：Ampicillin Powder
规格：1g
*苄青霉素为白色晶体或粉末，分子式是C16H19N3O4S，分子量为349.41。溶于稀酸和稀碱，微溶于水和甲醇，几乎不溶于*仿、96%乙醇、乙*(代"醚")、乙酸乙酯和固定油。无臭，味苦。抗革兰氏阳性及阴性菌，用于分子 生物学和组织培养(防止微生物污染和抗性筛选)。

储存条件：常温运输、4℃保存，有效期一年。

·Verhoeff固定液
编号：BTN140588
英文名称：Verhoeff Fixative Solution
规格：250mL
本产品为眼球常用固定液，主要成分为甲醛、酒精、苦味*(代"酸")。固定48h后，即可脱水。固定于Verhoeff固定液中的眼球可以长期保存。

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

·单细胞悬浮液
编号：BTN130805
英文名称：Single Cell Suspension Solution
规格：1mL
本产品是单细胞悬浮溶液，本产品与后续各种单细胞分析实验、单细胞扩增实验兼容。

储存条件：低温运输，4℃保存，有效期一年。

·细胞核微量制备试剂盒
编号：BTN100601
英文名称：Nuclei Miniprep Kit
规格：50次
用高密度介质来分离动物软体组织(如肝脏、脾脏等)细胞核是目前主流的方法，它是由Chauveau于1956年发明，其原理是细胞核的密度较大，在高速离心条件下(40000g 1小时)可在高密度介质(2.2mol/l 蔗糖溶液)中沉降下来，从而达到与细胞质其它成分分开的目的。该方法能通过一步离心得到较高纯度的细胞核，得到广泛应用。本产品就是在Chauveau方法的基础上优化改进而来。

产品特点：
1．基于密度梯度分离，可有效去除细胞质及其他细胞器，得到的细胞核纯净。
2．加进*化*、*化*、*化*(代"*")等改变分离介质渗透压的物质，减少了细胞核的脆性，增加了细胞核的完整性。
3．精心调节了介质的pH，防止细胞核在分离过程中的聚集，还能保持细胞核的精细结构。
4．快速，整个操作过程仅需1小时即可完成(对一个样品而言)。
5．提供染色试剂，可以在普通光学显微镜下检测纯化的细胞核的纯度。
6．处理温和，得到的细胞核中的大部分蛋白质都具有活性，可以用于胶迟阻实验、酶活性分析细胞凋亡、信号传递、代谢和蛋白组学等的研究；也可用于超大片段DNA的纯化。
7．不但适用于动物和植物培养细胞，还能用于实体组织(能用Dounce或Potter 匀浆器匀浆的组织均可)。
8．一次微量提取足够处理0.1 克组织或10E7个培养细胞，本产品足够50次微量提取。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A成分一	100ml
溶液A成分二(干粉)	约20g
溶液B成分一	50ml
溶液B成分二(干粉)	约100g
细胞核染色液	1套
说明书	1份

储存条件：常温运输和保存，有效期一年。

使用方法：

一、准备工作：先将溶液A的成分二(干粉)全部加入到溶液A成分一(溶液)中，摇晃溶解后得到100mL溶液A。将溶液B的成分二(干粉)全部加入到溶液B成分一(溶液)中，摇晃溶解后得到50mL溶液B。4℃放置不能超过2 天，长期放置需要放-20℃。

二、微量细胞核分离(放量提取各试剂的用量可以按比例放大)：
1．对组织细胞：称取100～200mg 新鲜组织(如动物肝脏、脑、心肌和植物叶片等)，用自备的PBS或生理盐水洗净血水，滤纸吸干，用剪刀或刀片将其剪为碎块(最好大小为1cm3，过小反而不利于匀浆)放入小容量Dounce或Potter 玻璃匀浆器内。
2．对培养细胞：用自备胰酶按标准方法消化培养细胞，PBS 洗涤，800×g 5～10分钟离心收集细胞，计数。每次微量提取需要5×10E7个细胞，加入1.0mL预冷的溶液A重悬细胞，然后转移到小容量Dounce或Potter 玻璃匀浆器内
3．用Dounce或Potter 组织匀浆器在冰上破碎组织或细胞。如果用手动匀浆器，一般需要20～30次。如果用电动匀浆器，一般需要处理3-5次，每次5～10秒钟(转速为500r/min)。
4．将匀浆液转移到离心管中。如果匀浆液有可见的结缔组织和未破碎的组织块，可以用三层自备的纱布放在1.5mL离心管管口，将匀浆液过滤进入离心管。可取少量滤液涂在载玻片上制得涂片A，自然干燥涂片以便染色做显微镜观察。
5．4℃，700-800×g 水平离心5-10分钟。细胞核沉淀在收集管底部，弃上清。可取少量上清液涂在载玻片上制得涂片B，自然干燥涂片以便染色做显微镜观察。
6．加入0.5mL预冷溶液A重悬沉淀。用预冷的匀浆器(用前需要将表面的组织洗去)重悬沉淀。可取少量上清液涂在载玻片上制得涂片C，自然干燥涂片以便染色做显微镜观察。
7．在水平型离心管中加入0.5mL预冷的溶液B，然后靠管壁慢慢加入上步得到的重悬液。
8．在4℃ 23000g离心30分钟，管底的沉淀即为细胞核。
9．小心吸弃上清液。注意：上清一般比较粘稠，最好倒立一段时间。
10．用0.5mL溶液A重悬沉淀。
11．在4℃ 1500g离心5分钟，吸弃上清，沉淀即为纯净的细胞核。可以直接使用，也可以加等体积的自备甘油，混匀后放液氮或-70℃保存。可取少量上悬浮液涂在载玻片上制得涂片D，自然干燥涂片以便染色做显微镜观察。
12．用本方法一般可以从0.1g 肝脏组织中纯化到1-2×107个细胞核。如果后续试验是Western Blot和2D-胶电泳，可直接加入上样缓冲液裂解细胞核后上样。

三、显微镜检测涂片，计算效率
1．将干燥后的A-D 四张涂片加入固定液固定15分钟，晾干。
2．Giemsa 染液染10分钟。
3．自备蒸馏水漂洗数秒，用滤纸吸干水。
4．用显微镜(40×)检查涂片，细胞核将呈紫红色，混杂的细胞质为浅蓝色碎片。根据每步细胞核的数量可以粗略估计回收效率。

疑难解答：
本说明书强烈建议用离心力g 而不是转速计算所需的离心速度，因为不同的离心机转子直径不同，即使是同一转速，其离心力也不同。如果只知道转速，可用下式计算离心力。
G＝1.11×(10-5)×R×[rpm]２
G为离心力，一般以g(重力加速度)的倍数来表示；[rpm]２即转速的平方；
R为离心机转子的半径(单位为厘米)。


大提柱式动物DNA提取试剂盒 DNA纯化关键词：大提柱式动物DNA提取试剂盒,BTN80923,Animal DNA Column large-scale extraction kit

RPMI 1640 Medium   500ml
磷酸铵 DAB 25447-33-0
BTN60910 非冻型血液DNA保存液 Blood DNALOCKER
ARB13548 兔子S100蛋白(S-100)酶免分析 Rabbit soluble protein-100,s-100 ELISA KIT
ARB13137 小鼠前列腺素E2(PGE2)酶标法分析 Mouse prostaglandin e2，pg-e2 ELISA KIT
对羟基*丙*(代"酮") o-Cresolphthalein 70-70-2
BTN81206 *基黑染膜液 Amido Black 10B BlotStain
石蜡包埋组织DNA提取试剂盒 
ARB10376 人甘露糖受体(MR)含量测试 Human mannose receptor,mr ELISA KIT
12774-36-6 Sephadex G-150 medium(葡聚糖凝胶G-150)
ARB13619 兔子促卵泡素(FSH)ELISA代测服务 Rabbit follicle-stimulating hormone,fsh ELISA KIT
ARB11005 人补体7(C7)Elisa定量检测 Human complement fragment 3c,c3c ELISA KIT
ARB12485 大鼠总甲状腺激素(TT4)含量检测 Rat tt4 ELISA KIT
BTN100880 四甲基乙二*(代"胺") TEMED
ARB12520 大鼠热休克蛋白60(Hsp-60)含量测试 Rat heat shock protein 60,hsp-60 ELISA KIT
细胞裂解液 Cell lysis solution  50ml|100ml
BL0825 HRP标记兔抗猴IgG抗体

北京百莱博科技有限公司专业生产供应销*(代"售")生物试剂、化学试剂、抗原抗体、血清血浆、Elisa试剂盒，更多试剂产品需求，欢迎来电咨询选购大提柱式动物DNA提取试剂盒 DNA纯化。