柱式动物 DNAOUT

中文名称：柱式动物 DNAOUT
英文名称：Column Animal DNAOUT
产品及特点：本产品在动物 DNAOUT基础上改良而得的柱式升级产 品，主要用于快速提取新鲜或冷冻的动物组织中的基因组 DNA。跟动物 DNAOUT 相比，它具有下列特点：
1. DNA 更加纯净，大多数 DNA 样品的 OD260/280 值在 1.8-1.9 之间。
2. DNA 产率一般在 200ug/g 左右(跟组织种类密切相关)。
3. 可直接用于 PCR、酶切、杂交等后续反应。
4. 操作更加简单，离心吸附操作代替离心沉淀，整个过程室温操作约 10 分钟， 适合大规模样品处理。
5. 安全无毒，本试剂盒对人体无毒，无腐蚀性和刺激性气味。
6. 性价比高，质量和国外同类产品相当，但价格更便宜。
7.产品仅供科研。
规格及成分：

成份	大纸盒包装
溶液 A	40 mL
溶液 B	20 mL
溶液 C	50 mL
离心吸附柱	50 套
通用洗柱液	50 mL
DNA 洗脱液 2.0	10 mL
使用手册	1 份

运输及保存：常温运输和保存、有效期一年。
自备试剂：氯仿（也可省略，但产量会降低）
使用方法：注意：溶液 A 容易产生沉淀，溶液 B 十分粘稠，用前均需要在 65℃水浴中加热使 沉淀溶解或粘稠度降低，用前充分摇匀。
1. 根据使用材料的不同进行下列操作： a) 对贴壁细胞：吸尽培养液，在每 10 平方厘米细胞中加入 0.8 mL 预热的溶液 A，用枪充分吹打以确保细胞全部裂解，然后把裂解液转移到 1.5 mL 塑料离 心管中。 b) 对悬浮细胞：离心收集细胞，吸尽液体，在每 1-5×106悬浮细胞中加入 0.8 mL 预热的溶液 A，用枪充分吹打以确保细胞全部裂解。然后把裂解液转移到 1.5 mL 塑料离心管中。如果是 fibroblasts 或 carcinoma 细胞，0.8 mL 溶液 A 的细胞使用量不要超过 1×106 个细胞。 c) 对新鲜或冷冻的组织：先将剪切成小块的新鲜组织或冷冻保存的组织放入 10 mL 或 15 mL 塑料离心管中，每 50-100 mg 组织加 0.8 mL 预热的溶液 A，用剪切式匀浆器匀浆 30 秒左右，然后把裂解液转移到 1.5 mL 塑料离心管中。 对肝、脾、胰、肾等细胞分裂十分旺盛的组织（细胞中含大量正在复制的 DNA）， 建议组织的使用量不要超过 50 mg。 d) 对 DNALOCKER 保存组织：先用纸吸去 DNALOCKER 液体后再剪切成小块，其余 操作同新鲜或冷冻组织的处理。
2. 加入 0.4 mL 预热的溶液 B 到裂解液中。由于溶液 B 十分粘稠，可将 1mL 枪 头剪掉一截再用，也可以用称量方法加 0.4 g。加入溶液 B 后需要颠倒数次充 分混匀。
3. 65℃水浴 5-10 分钟。如果室温放置，DNA 产量将降低 10-20%。
4. 加入 0.2 mL 自备氯仿，振荡器上充分振荡混均 30 秒，此时溶液将呈乳白色。 一定要确保离心管底的液体被震荡起来。
5. 12000-15000 g 室温离心 2 分钟。上清透明，中间层为白膜（蛋白层）。
6. 小心将上清液平均转移到两个新的离心管中，避免触及中间的白膜。
7. 每个管中加入 1.5 倍体积的溶液 C，充分颠倒混匀。
8. 分两次上柱（即先转移一半的混合液到离心吸附柱中，室温放置 2 分钟， 12000-15000 g 室温离心半分钟，弃穿透液，然后再将剩下的混合液到离心 吸附柱中，室温放置 2 分钟，12000-15000 g 室温离心半分钟，弃穿透液）。
9. 加 0.7 mL 通用洗柱液到离心吸附柱中，12000-15000 g 室温离心半分钟， 弃穿透液。
10. 加 0.3 mL 通用洗柱液到离心吸附柱中，12000-15000 g 室温离心半分钟， 弃穿透液。
11. 12000-15000 g 室温再离心半分钟。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液 会污染 DNA。
12. 室温放置半分钟使残留乙醇挥发。
13. 将离心吸附柱转移到一新的 1.5 mL 塑料离心管中，加入 50-100 uL DNA 洗 脱液 2.0，室温放置离心吸附柱 1-2 分钟。
14. 12000-15000 g 室温离心半分钟，离心管中溶液即为 DNA 样品，可以立即 使用或存放于冰箱待用。