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- 百奥莱博
- 北京
- WE0188-ORS
- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
室温(15～30℃)
- 保质期：
长期
- 英文名：
Blood Genomic DNA Batch Extraction Kit
- 库存：
954
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京血液基因组DNA批量提取试剂盒(96孔板)现货供应由专业试剂供应商北京百奥莱博提供，用于科研目的生化试验项目，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多血液基因组DNA批量提取试剂盒(96孔板)等DNA纯化产品请联系我司咨询订购。
名称：北京血液基因组DNA批量提取试剂盒(96孔板)现货供应
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口
英文名：Blood Genomic DNA Batch Extraction Kit
本试剂盒适用于从新鲜或冷冻全血(带有抗凝血剂，如柠檬酸盐、EDTA或肝素等)、血浆、血清、血沉棕黄层、骨髓、无细胞体液等样本中的总DNA，包括基因组DNA，线粒体DNA及病毒DNA。本试剂盒广泛的应用于临床样品的检测，可以同时处理96个样品，采用96孔吸附板可以特异性吸附结合DNA，经过纯化的DNA产量高、质量好，最大限度去除蛋白、色素、脂类及其他抑制性杂质污染，可直接用于PCR、Real-Time PCR、酶切和Southern Blot等实验。
试剂盒组成：
| 组份 | 50次 |
| Buffer RCL | 2×500ml |
| Buffer GR | 2×50ml |
| Buffer GL | 2×50ml |
| Buffer GW1(浓缩液) | 2×52ml |
| Buffer GW2(浓缩液) | 2×50ml |
| Buffer GE | 60ml |
| 蛋白酶K | 90 mg |
| 蛋白酶K 储存液 | 2×5ml |
| 吸附板及收集板 | 4套 |
| 收集板 | 4块 |
| 封板膜 | 16张 |
保存条件：Buffer RCL 2～8℃，其他组分室温(15～30℃)。
自备试剂：无水乙醇。
实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、向蛋白酶K 中加入9ml 蛋白酶K 储存液使其溶解，-20℃保存。配制好的蛋白酶K 勿长时间室温放置，避免反复冻融，以免影响其活性。
2、样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。
3、第一次使用前应按试剂瓶标签说明先在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇。
4、使用前请检查Buffer GL是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀，请将Buffer GL于56℃水浴重新溶解。
5、实验前配制Buffer GL与蛋白酶K 的混合溶液，每200μl Buffer GL中加入20μl蛋白酶K ，该溶液最好现用现配，在使用前配制时间最多不超过1小时。
6、使用排枪时注意不要打湿96孔板孔口，以防止离心过程中有液体溅出产生交叉污染。
操作步骤：
1、样本处理：
a. 将200μl样本加到收集板中。不足200μl的样本，加Buffer GR补足至200μl。
b. 样本超过200μl，且不超过600μl时，将血液样本加到收集板中，加入样本2倍体积
的Buffer RCL，吹打20次混匀，加盖新的封板膜，3600 rpm(～1200×g)离心10分钟。揭去封板膜，吸弃上清(可留下100μl液体以避免吸到细胞沉淀)。再加入样本2倍体积的Buffer RCL，吹打10-20次混匀，加盖新的封板膜，3600 rpm离心10分钟。揭去封板膜，吸弃上清，剩余约200μl液体。
注意：
1)在收集板上做好标记，以方便后续实验对样品的辨识。
2)如果样品为鸟类的血液，建议样品用量少于10μl。
2、配制Buffer GL与蛋白酶K 的混合溶液：按照200μl Buffer GL中加入20μl的蛋白酶K 的比例配制，混匀。
3、向每孔中加入220μl Buffer GL与蛋白酶K 的混合溶液，吹打20次，混匀。加盖新的封板膜，短暂离心，使管壁和管盖上的液体集中到管底。
4、56℃孵育10分钟。
注意：孵育10分钟DNA的产量已经达到最大，继续延长孵育时间对DNA产量和纯度没有影响。
5、揭去封板膜，加入200μl无水乙醇，吹打20次，混匀。短暂离心，使管壁和管盖上的液体集中到管底。
6、将步骤5所得溶液全部加入到已装入收集板的吸附板中，若一次不能加完溶液，可分多次转入。3600 rpm离心5分钟。倒掉收集板中的废液，将吸附板重新放回收集板中。
7、向吸附板每孔加入500μl Buffer GW1(使用前检查是否加入无水乙醇)，3600 rpm离心5分钟。倒掉收集板中的废液，将吸附板重新放回收集板中。
8、向吸附板每孔加入500μl Buffer GW2(使用前检查是否加入无水乙醇)，3600 rpm离心5分钟。倒掉收集板中的废液，将吸附板重新放回收集板中。
9、3600 rpm离心10分钟，倒掉收集板中废液。将吸附板置于室温数分钟以彻底晾干。
注意：这一步的目的是将吸附板中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
10、将吸附板置于一个新收集板中，向吸附板每孔中间部位悬空加入80-200μl Buffer GE或灭菌水，室温放置2-5分钟，3600 rpm离心10分钟，收集DNA溶液，加盖新的封板膜。-20℃保存DNA。
注意：
1)如果下游实验对pH值或EDTA敏感，可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响，若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5(可以用NaOH将水的pH值调到此范围)，pH值低于7.0时洗脱效率不高。
2)离心之前室温孵育5分钟可以增加产量。
3)因为保存在水中的DNA会受到酸性水解作用的影响，如需长期保存，推荐用Buffer GE洗脱并于-20℃保存。
储存条件：室温(15～30℃)。
欲咨询购买北京血液基因组DNA批量提取试剂盒(96孔板)现货供应，请致电北京百奥莱博科技有限公司，为您提供最全面周到的产品服务，除此之外，我公司正在促销以下产品：
·HRP标记抗c-Myc标签单克隆抗体
编号：WE0333
英文名称：HRP Conjugated Anti c-Myc Tag Mouse Monoclonal Antibody
规格：20μl|100μl
本抗体为经辣根过氧化物酶(HRP)直接标记的抗c-Myc标签鼠单克隆抗体，可高度特异识别重组蛋白C末端或N末端的c-Myc标签(EQKLISEEDL)， 而不受邻近*基酸组成的影响，可用于检测c-Myc Tag融合蛋白。本产品经HRP直接标记，无需使用二抗，可直接用相应酶底物显色或化学发光法检测目的蛋白，减化了实验步骤，避免由二抗交叉反应引起的非特异性条带。
抗体类型：鼠IgG
免疫原：人工合成多肽
标记物：HRP
应用范围：WB(1：1000-5000)、ELISA(1：1000-20000)
·GST琼脂糖凝胶
编号：WE0269
英文名称：Glutathione-Sepharose Resin
规格：10ml
本产品为基于三甘醇(16原子间隔臂)的谷胱甘肽琼脂糖，可快速、温和、特异性地纯化包含谷胱甘肽结合序列的非变性蛋白质，如谷胱甘肽-S-转移酶(GST)、谷胱甘肽过氧化物酶等，尤其适用于在大肠杆菌、昆虫细胞和哺育动物细胞中表达的GST融合表达蛋白。该填料具有很好的物理和化学稳定性，使用寿命长，使用方便，批次重复性好，可一步分离得到纯度较高的目标蛋白，纯化条件温和，可保证蛋白的活性。
支持物：CL-6B琼脂糖凝胶
载量：5-10 mg GST标签蛋白/ml 填料
粒径：50-160μM
注意事项：
1、请勿将 GST琼脂糖凝胶冷冻、干燥和离心，整个纯化过程中切忌凝胶脱水变干。
2、蛋白层析应使用高纯度的试剂和水，层析前缓冲液应用0.45μM滤膜过滤后使用。另外为防止柱子阻塞，上柱前建议将裂解液进行离心，或者使用0.45μM滤膜过滤。
3、GST 融合蛋白与还原型谷胱甘肽的结合比较缓慢，为获得最大结合量，上样流速建议为：0.2-1ml/min(6ml层析柱)，0.5-2ml/min(12ml层析柱)。对于吸附效果不好的样品，可以先把介质和样品混合，轻轻振摇 2-4小时，再装柱，用平衡缓冲液进行重新平衡、洗脱等操作，另外在细菌抽提试剂中添加5 mM DTT，可以显著提高GST标签结合能力。
4、不同的 GST 融合蛋白取得最佳纯化效果所需还原型谷胱甘肽浓度、洗脱体积和洗脱时间可能有所不同。必要时需对流穿液、洗脱液进行 SDS-PAGE 以及 Western 杂交分析，以确定最佳纯化条件。
5、GST 融合蛋白以包涵体形式存在时不能与介质结合，必须先进行变性、复性、透析处理后才能用介质进行纯化。建议优化蛋白表达条件尽量使蛋白可溶性表达。
6、如后续实验需要除去洗脱液中还原型谷胱甘肽，可采用超滤或透析的方法。
使用方法：
I 缓冲液的准备
1、结合缓冲液(PBS)：10 mMNa2HPO4，1.8 mMKH2PO4，140 mMNaCl，2.7 mMKCl，pH7.4
2、洗脱缓冲液：10 mMNa2HPO4，1.8 mMKH2PO4，140 mMNaCl，2.7 mMKCl，10 mM还原型谷胱甘肽(GSH)，pH7.4。将0.1 g还原型谷胱甘肽(GSH)溶于30ml 结合缓冲液，或将0.25 g溶于75ml结合缓冲液中。
3、再生缓冲液1：0.1 MTris-HCl，0.5 MNaCl，0.1% SDS，pH8.5
4、再生缓冲液2：0.1 M Sodiumacetate，0.5 MNaCl，0.1% SDS，pH4.5
II 样本制备
1、收集菌体后，每100 mg菌体(湿重)加1-5ml细菌蛋白抽提试剂(每1ml细菌蛋白抽提试剂中加入10μl蛋白酶抑制剂混合物)，如有需要可以超声裂解菌体。
注意：
1)当提取物粘度高时，建议加入DNase I和Lysozyme。每1ml 细菌抽提试剂中加入1μlDNase I(1000U/ml)，2μl Lysozyme(50 mg/ml)，DNase I和Lysozyme可单独从我公司购买，货号：Lysozyme(WE0214)、 DNase I(WE0213A)，或直接从我公司购买WE0261细菌蛋白抽提试剂盒，包含细菌蛋白抽提试剂、DNase I、Lysozyme和蛋白酶抑制剂混合物。
2)超声过程中保持菌液处于冰浴中，超声条件依赖于所使用的超声仪功率，探头种类，容器的大小形状，需实验中自己摸索，应避免连续超声导致溶液过热，可分成短时间，多次超声，最终以菌液变清即可。
2、10000rpm，4℃离心15分钟，将上清转移至新的已预冷的离心管中，然后用预冷的PBS Buffer重悬沉淀(每50ml裂解液的沉淀加入3ml PBS)。
3、分别取10μl上清和沉淀悬液进行SDS-PAGE电泳检测，以确定蛋白存在于上清或沉淀中。若目的GST融合蛋白形成包涵体(不可溶蛋白)，应在纯化以前以适当的方式进行溶解和重折叠。
III 组装层析柱
1、将Glutathione-Sepharose Resin混合均匀直至重悬，用吸管移取适量的填料至层析柱中。室温静置10分钟，待凝胶与溶液分层后，把底部的出液口打开，让乙醇通过重力作用缓慢流出。
注意：
1)填料的上层是乙醇保护液，将填料与乙醇一起混匀，以每ml填料纯化5-10 mg GST标签蛋白计算，取需要的填料与乙醇混合液加入层析柱中。
2)如果乙醇不流出，可以给柱子一个外力，例如用大拇指对柱口轻轻按压一下，迫使乙醇流出。
3)本实验都是通过重力作用使溶液流出。
2、加入5倍柱体积的去离子水洗涤，再用10倍柱体积的结合缓冲液平衡，平衡结束后即可上样。
注意：柱体积指的是填料的体积。
Ⅳ GST融合蛋白的纯化
1、将层析柱的出口连接上紫外蛋白监测仪，根据紫外蛋白监测仪观察280 nm处的吸收值来监控层析柱流出蛋白情况。
2、上样：将制备的蛋白样品用结合缓冲液等体积稀释后，加入到已平衡好的层析柱中，建议上样流速为： 0.5-1ml/min(6ml层析柱)，1-2ml/min(12ml层析柱)。观察280 nm吸收情况并收集流穿蛋白。
注意：
1)样品在上柱前可以离心或0.45μM微孔滤膜过滤。或者使用本试剂盒中附带的一块筛板，使用时先将筛板加至填料的上层，该筛板可用于杂质较多的蛋白的过滤，防止过多的杂蛋白堵塞柱子的作用。再将处理好的样品负载上柱，但是筛板放入柱子后就不易取出。
2)通过控制加入的菌体裂解液的速度或流出速度来控制柱流速，流速过快会影响柱效。
3、洗涤：使用10倍柱体积的结合缓冲液过柱，洗涤杂蛋白，观察280 nm吸收情况并收集杂蛋白。建议洗涤流速为0.5-1ml/min(6ml层析柱)，1-2ml/min(12ml层析柱)。
注意：建议洗涤液中加入蛋白酶抑制剂终浓度为1mM，如蛋白酶抑制剂混合物，以抑制蛋白酶活性。
4、洗脱：使用10-15倍柱体积的新鲜配制的洗脱缓冲液过柱，洗脱目的蛋白，观察280 nm吸收情况并收集目的蛋白。建议洗涤流速为0.5-1ml/min(6ml层析柱)，1-2ml/min(12ml层析柱)。
5、蛋白检测：分别取等量的流穿液，洗涤液和目的蛋白洗脱液进行SDS-PAGE以分析蛋白的层析情况。
6、洗脱后，依次用3-5倍柱体积的结合缓冲液和3-5倍柱体积的去离子水洗涤填料，再用2-3倍柱体积的20%乙醇洗涤(乙醇要将填料浸没)，封柱后2～8℃保存。
Ⅴ 柱再生
当填料使用多次后，结合效率会有下降，可用以下方法再生，提高填料的使用寿命和蛋白质的结合效率。
1、使用5倍柱体积的再生缓冲液1洗涤填料，而后用5-10倍柱体积超纯水洗涤。
2、使用5倍柱体积的再生缓冲液2洗涤填料，而后用5-10倍柱体积超纯水洗涤。
3、保存：使用2-3倍柱体积的20%乙醇洗涤，将层析柱的头尾密封后(乙醇要将填料浸没)2～8℃保存。
4、再次使用时加入5倍柱体积的去离子水将乙醇洗涤后，使用10倍柱体积的结合缓冲液平衡填料，平衡结束后即可上样。
储存条件：2～8℃，避免冷冻
北京血液基因组DNA批量提取试剂盒(96孔板)现货供应关键词：血液基因组DNA批量提取试剂盒(96孔板),Blood Genomic DNA Batch Extraction Kit,WE0188
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北京血液基因组DNA批量提取试剂盒(96孔板)现货供应关键词：血液基因组DNA批量提取试剂盒(96孔板),Blood Genomic DNA Batch Extraction Kit,WE0188
·FITC标记兔抗人IgG(H+L)
编号：WE0359
英文名称：Rabbit Anti-Human IgG, FITC Conjugated
规格：100μl
本产品为FITC(硫*酸荧光素)标记的经亲和纯化的兔抗体，特异识别人IgG重链和轻链，其检测灵敏度高，本底低。荧光素标记抗体广泛应用于免疫学、细胞化学、流式细胞分析等研究，在临床检验上也用于细菌、病毒和寄生虫的检验及自身免疫病的诊断等。
免疫原：人IgG
缓冲液：0.01M PBS，50%甘油，pH7.6
稳定剂：15 mg/ml BSA(不含IgG和蛋白酶)
防腐剂：0.05%叠氮*
荧光团：FITC，Amax=492; Emax=520
应用范围：对于大多数实验(1：50-200)
·BaHF高保真DNA聚合酶
编号：WE0113
英文名称：BaHF High Fidelity DNA Polymerase
规格：500U|2500U
本产品是经过特殊处理的热启动高保真聚合酶。该聚合酶具有5"-3"DNA聚合酶活性，5"-3"核酸外切酶活性和3"-5"核酸外切酶活性，在普通PCR条件下，与BaldStar Taq DNA Polymerase相比，具有扩增效率高、错配率低的优良性能。化学修饰使该酶在常温下没有聚合酶活性，有效避免在常温条件下由引物和模板非特异性结合或引物二聚体而产生的非特异性扩增，酶的激活须在95℃下孵育10分钟，该条件可以整合入已有的PCR热循环程序。优化的缓冲体系使酶的作用发挥最大功效，实现对目的片段的高保真、高特异性、高扩增效率、高灵敏度扩增。使用本制品扩增得到的PCR产物的3"端附有一个“A”碱基，因此可直接用于T/A克隆。本产品应用于常规的PCR、RT-PCR和多重PCR，特别适用于对特异性、保真性和扩增效率均有较高要求的PCR。
产品组成：
| 组份 | 500U | 2500U |
| BaHF DNA Polymerase, 5 U/μl | 100μl | 5×100μl |
| 5×BaldStar PCR Buffer | 1.9ml | 5×1.9ml |
注意：本产品的5×BaldStar PCR Buffer中含有8.5 mM*离子。
活性定义：
用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，在74℃，30分钟内，将10 nmol脱氧核苷酸掺入到酸性不溶物质所需的酶量定义为1个活性单位(U)。
质量控制：
1、经过多次柱纯化，SDS-PAGE检测其纯度大于99%；
2、经检测无外源核酸酶活性；
3、PCR方法检测无宿主残余DNA；
4、能有效地扩增人基因组中的单拷贝基因；
5、室温存放一个月，无明显活性改变。
使用方法：
以下举例为以人基因组DNA为模板，扩增1 kb的片段的PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。
1、PCR反应体系
| 试剂 | 50μl反应体系 | 终浓度 |
| 5×BaldStar PCR Buffer | 10μl | 1× |
| dNTP Mix，10 mM each | 1μl | 200μM each |
| Forward Primer，10μM | 2μl | 0.4μM |
| Reverse Primer，10μM | 2μl | 0.4μM |
| Template DNA | ＜0.5μg | ＜0.5μg/50μl |
| BaHF DNA Polymerase ，5 U/μ l | 0.5μl | 2.5 U/50μl |
| ddH2O | up to 50μl |
注意：引物浓度请以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。
2、PCR反应条件
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 预变性 | 95℃ | 10 min | |
| 变性 | 94℃ | 30 s | 30-40个循环 |
| 退火 | 55-65℃ | 30 s | |
| 延伸 | 72℃ | 60 s | |
| 终延伸 | 72℃ | 5 min |
注意：
1)一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。
2)延伸时间应根据所扩增片段大小设定，本产品中所包含的BaHF DNA Polymerase的扩增效率为1-2 kb/min。
3)可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。
4)本产品须在预变性95℃，10 min条件下实现酶的活化。
储存条件：-20℃，避免反复冻融。
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高校、研究所、各科研机构、大批量种子检测、疫病监控、流行病控制、血液初筛、血库建库、高通量基因测序等机关、部门、企业广泛采纳，逐步成为核酸提取的主流应用方法。 应用实例 1、KingFisher的磁珠回收率：KingFisher 96 DW Plate板型与加热块匹配嵌合的独特设计也保证加热的最大效率。如果用其它型号的96孔板，热块会抬升板底高度，从而影响混匀操作甚至造成仪器不稳定性。实验数据表明96 DW Plate的磁珠回收率比其他96孔板的回收率更高。使用96 DW Plate进行
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