AAV在肌肉组织中的应用

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更新日期 2020年11月21日

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AAV在肌肉组织中的应用

一、病毒载体的选择

	慢病毒	腺病毒	腺相关病毒
优势	感染表达范围广泛，对培养的肌肉细胞和肌肉干细胞（如卫星细胞）均能高效感染	感染能力强，特别适合于原代细胞（如原代心肌细胞等）的感染	安全性及高；免疫原性低，长效表达（稳定表达3-6个月）；病毒颗粒小，感染均一性高；注射方式多样
局限	对肌肉组织的感染表达非常有限	免疫原性高，可能引发强烈的免疫反应；大分子容易被清除，表达周期短，大约2周时间；较少被应用于肌肉组织的靶向表达	表达到高峰所需的时间长、载体容量小

腺相关病毒是在体实验的最佳选择，腺相关病毒很小，易于扩散，具有均一性；这一特点也使得不易被免疫系统发现，免疫原性低，安全性高；能持续在体内表达3-6个月，具有长效性；可以选择特殊血清型AAV1/2/9感染，相对特异性强；可以直接静脉注射；也可以肌肉原位注射。大文章必备。

二、AAV血清型的选择
目前靶向肌肉的AAV载体血清型主要为AAV1、AAV2和 AAV9。其中，AAV9的表达效率最高，并且更容易在肌肉中高表达。
需要注意的是，无论AAV1/2/9中的哪种血清型，都不能在肌肉组织特异性表达。除了肌肉外，AAV1还可能在肌肉、骨骼肌、神经组织表达；AAV2可以感染肝脏等；AAV9还可以在肌肉、中枢神经、肺、肝脏表达。

汉恒肌肉特异性AAV，通过AAV9优选肌肉特异性启动子，实现肌肉的高效基因转导：
①高感染表达率：汉恒强启动子载体AAV9，通过静脉注射，高效感染肌肉，特异性上略差。
②高肌肉特异性AAV：汉恒经严密筛选，确定肌肉特意的MCK特异性启动子，高特异的表达于肌肉组织。肌肉中起始MCK正常转录的元件较多，因此在肌肉中相对表达量较其他部位高出很多。这里的表达是相对的，也就是说其他部位也可能会表达目的基因，但是跟肌肉的表达量相比，可以忽略不计。

三、AAV注射方式

感染部位	推荐的血清型	注射方式	动物	注射体积（ ul）
骨骼肌	9型	肌肉注射	大鼠	10-15/点，3-5个点
骨骼肌	9型	肌肉注射	小鼠	10-15/点，3-5个点

腿部肌肉注射视频：

四、实例

五、客户文章发表节选

名称	杂志名称	IF	单位	使用方法
Prevention of Muscle Wasting by CRISPR/Cas9-mediated Disruption of Myostatin In Vivo	MOLECULAR THERAPY	6.688	中科院营养所/汉恒研究中心	AAV9感染小鼠肌肉
CRISPR/Cas9-mediated targeting of the Rosa26 locus produces Cre reporter rat strains for monitoring Cre–loxP-mediated lineage tracing	FEBS Journal	3.902	中国医学科学院北京协和医院	AV9-CAG-Cre感染大鼠海马和肌肉

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