小鼠组织直接PCR试剂盒 Mouse Tissue Dire

产品描述

本试剂盒可直接快速地对小鼠组织（如鼠尾、鼠耳、鼠趾等）样本进行PCR扩增，具有极强的样本兼容性。本试剂盒配备了强力的裂解缓冲液，可以快速裂解样品，释放基因组DNA。裂解产物可以直接加入到PCR反应体系中，无需精提纯化，操作方便。此外，本试剂盒对样品投入量要求低，2-5 mm2鼠耳或肝脏、1-5 mm鼠尾、1-2个脚趾均可进行实验。

本试剂盒提供的2× Hieff® Tissue Direct PCR Mix为2倍浓度的热启动PCR反应液，包含了用于PCR扩增除模板和引物外的所有组分，大大简化操作过程，降低污染几率。

该试剂盒可用于转基因鉴定、小鼠基因分型等。

产品组分

a) Lysis solution为裂解液，请戴手套操作。
b) 2× Hieff^® Tissue Direct PCR Mix：包含热启动Taq DNA聚合酶、dNTP混合物、4 mM Mg²⁺、PCR反应增强剂、稳定剂等。

运输方法

干冰运输。

保存方法 
1. 组分A：2-8℃保存，有效期1年。若长时间多次使用，请分装后储存，避免交叉污染。
2. 组分B/C：-20℃保存，避免反复冻融。有效期1年。

操作方法

样品基因组DNA释放

1. 剪取2-5 mm²鼠耳或肝脏组织，或1-5 mm鼠尾、或1-2个脚趾，置于1.5 mL离心管中；

2. 在上述离心管中加入200 μL Lysis solution和10 μL Proteinase K，轻轻涡旋混匀，使得样品完全被浸润，短暂离心；

3. 在恒温孵育仪中70℃孵育10 min；

4. 孵育完成后，将样品置于95℃或者沸水浴中加热5 min灭活Proteinase K;

5. 将裂解产物涡旋振荡充分混匀后，12000 rpm (13400× g)离心10 min；

6. 将上清转移至新的离心管，-20℃保存不超过48小时或直接取上清用于后续PCR扩增。

【注】：1. 组织应尽量剪碎，以便裂解反应更顺利进行。

2. 70℃孵育，一般10 min即可满足多数PCR需求。若需要的DNA量较大或样品较难裂解，可将时间延长至20-30 min。组织块不需完全裂解，残余的部分在后续离心步骤中可被除去。

PCR反应体系

【注】：各组分使用前应充分混匀。
a) 模板使用量：50 μL体系建议初步采用2 μL上清液作为模板起始投入量，若产物量较少，可适当增加模板投入量；
b) 引物终浓度：0.2-0.4 μM可以得到较好结果。反应性能较差时，可在0.1-0.5 μM范围内调整引物浓度；
c) 反应体系：推荐使用50 μL，也可根据使用习惯调整体系体积大小；
d) 体系配制：配制好PCR反应体系，置于涡旋仪上涡旋混匀，瞬时离心将反应液集于管底。

PCR反应程序

【注】：a) 退火温度：请参考引物的理论Tm值，退火温度可设置低于引物理论值 2-5℃。

b) 延伸时间：1-4 kb用3-10 s/kb，4 kb以上用20 s/kb。

c) 扩增循环数：35个循环已可以扩增足量产物。

d) 电泳上样：取5-7 μL扩增产物上样即可。

对照反应

在PCR结果分析时，不管是阳性结果或阴性结果，如果没有对照反应，都不能确定结果是否可靠。为了便于后续实验结果的分析，建议在进行PCR时，设置阳性（小鼠基因组DNA）和阴性（通常为生理盐水）PCR对照反应以便于排除假阳性或假阴性的干扰。

注意事项

1. 为了避免样本间交叉污染，每次取样后都需要将取样器材的刃口或与样本直接接触的部位浸入2%NACLO溶液或75%酒精中，反复洗刷数次进行清洗，然后用干净的纸巾擦干残余液体后再进行使用。为了试验方便，也可准备多个取样器材，在使用完后进行统一清洗，确保每一单独样本均使用的是无污染的取样器材。

2. 建议使用新鲜采取的动物组织，若为长期冷冻组织，应尽量避免反复冻融，否则会导致模板的降解，影响PCR效率。
3. 建议扩增片段长度6 kb以内，以便扩增效率最佳。
4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
5. 本产品仅作科研用途！

常见问题与解决方法

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