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- 技术资料
- 保存条件：
室温
- 保质期：
1年
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简石生物
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申请此产品试用，同时还可以申请 DNA/RNA Shield 试用
总RNA提取试剂盒(配合TRIZOL使用)
货号：TR205-50 (50次反应) 、TR205-200 (200次反应)
产品优势
产品组成
特性
试剂制备
RNA 洗涤液2 在使用之前一定要配好，添加好乙醇后在试剂瓶上做好标记！！！
添加40ml无水乙醇到10ml的 RNA洗涤液 中
操作步骤:
整个操作步骤是由2个步骤组成：（I）样品裂解匀浆（I I）样品纯化
（I）样品裂解匀浆
此步骤主要参考TRIZOL等类似裂解试剂说明书的裂解液用量，以下给出我公司提供的可完美替换TRIZOL的TRIcom试剂用量作为参考。
a.组织
动物组织：每30~50mg组织加1ml的TRIcom。
植物组织：每50~100mg组织加1ml的TRIcom。
b. 单层生长的细胞
单层贴壁细胞的收集（收集细胞数量请不要超过1×107 ）：可直接在培养容器中裂解（容器体积不超过10 cm2 ），或者使用胰蛋白酶处理后离心收集细胞沉淀。（在摇瓶中培养的单层贴壁细胞通常采用胰蛋白酶处理的方法）。
1) 直接裂解法： 直接在培养板中加入RNApure裂解细胞，每10 cm2 面积加入1 ml TRIcom。用 取样器吹打几次。 2) 胰蛋白酶处理法：确定细胞数量，吸除培养基，用PBS洗涤细胞，吸除PBS，向细胞中加入含 有0.1-0.25%胰蛋白酶的PBS 处理细胞，当细胞脱离容器壁时，加入含有血清的培养基失活胰 蛋白酶，将细胞溶液转移至RNase-free 的离心管中，300×g 离心5 分钟，收集细胞沉淀，仔 细吸除所有上清。去除液体培养基后，直接往培养板中加入RNA裂解液溶解细胞，并用移液枪轻轻吹打混匀。依据细胞的数量来决定所需的RNA裂解液量（105 细胞以内加100ul, 106 细胞加300ul）。
c. 悬浮生长的细胞
离心沉淀细胞(≤500 x g)，完全去除上清后用RNA裂解液重悬细胞沉淀。可短暂涡旋振荡。
d. 细胞悬液：离心取细胞。每5×106－107 动物、植物和酵母细胞或每107细菌细胞加入1 ml TRIcom。加入TRIcom前不要洗涤细胞，以免降解mRNA。一些酵母和细菌细胞可能需要匀浆仪处理。
e. 血液处理：直接取新鲜的血液，加入3 倍体积TRIcom（推荐0.25ml 全血加入0.75ml TRIcom），充分振荡并
且混匀。
其他难裂解的组织，酵母，植物匀浆需要配合蛋白酶K和裂解珠（选配）。
（ I I）样品纯化：以下离心力均在10,000-16,000 x g范围内进行。
该产品被引用文献：
1、Researchers used the Direct-zol RNA MiniPrep for heterologous E. coli expression of the FnCpf1 locus by means of RNA-seq and discovered a new endonuclease, Cpf1, which further improves upon the widely used CRISPR-Cas9 genome editing system. Cpf1 targets distinct PAM sequences, requires no tracrRNA, and cleaves DNA with staggered overhangs.
Zetsche B, et. al. (2015). Cpf1 is a Single RNA-Guided Endonuclease of a Class 2 CRISPR-Cas System. Cell. 163(3): 759-71.
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/26422227
2、The Direct-zol RNA Miniprep kit was used to isolate pure total RNA from Rat cells, and the high quality RNA was used to create a cDNA library for RT-qPCR analysis of several genes related to hematopoietic Stem Cell (HSC) Development. The consistent RNA extraction allowed the scientists to determine that HSC cells do not significantly contribute to kidney repair following acute kidney injuries.
Burst V. et al. (2012) Survival and distribution of injected haematopoietic stem cells in acute kidney injury. Nephrol Dial Transplant 0: 1–8
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/23197679
3、High-quality RNA isolated with the Direct-zol™ RNA MiniPrep from fecal and culture samples were shown to be instrumental in the development of a rotavirus early detection system using RT-PCR. The efficient RNA isolation helps in identification of severe gastroenteritis in infants and young children.
Yoshiki F, Takashi S, Takagi H, et al. Amplification of all 11 RNA segments of group A rotaviruses based on reverse transcription polymerase chain reaction Microbiol Immunol 2012; 56:
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/22708835
4、Total RNA was extracted from human, rat, and mouse cortical neurons using the Direct-zol RNA MiniPrep Kit. The high-quality RNA was reverse transcribed into cDNA and used to investigate the effect of BPA exposure on neurodevelopment by real-time PCR analysis.
Yeo M, et. al. (2013) Bisphenol A delays the perinatal chloride shift in cortical neurons by epigenetic effects on the Kcc2 promoter. Proc Natl Acad Sci U S A. 110(11):4315-20.
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/23440186
申请此产品试用，同时还可以申请 DNA/RNA Shield 试用
总RNA提取试剂盒(配合TRIZOL使用)
货号：TR205-50 (50次反应) 、TR205-200 (200次反应)
产品优势
- 适用于从细胞，组织，酵母菌，植物，细菌或生物液体（任何TRIZOL或类似产品可以裂解的样品）中提取到总RNA（含microRNA）。
- 无需进行相分离，无需使用氯仿，无需沉淀过程。
- 提取到的RNA不含DNA,并可应用于Q-PCR，高通量测序等实验。
- 整个过程仅需10分钟。
| 试剂盒组成 | 保存 | 50次 | 200次 |
| RNA洗涤液1 | 室温 | 50 ml | 200 ml |
| RNA洗涤液2 | 室温 | 10 ml 40 ml | |
| 第一次使用前按说明加指定量乙醇 | |||
| RNase-free H2O | 室温 | ||
| 2号柱 | 室温 | 50个 | 200个 |
| 收集管（2ml） | 室温 | 50个 | 200个 |
特性
- 样品来源：TRIZOL等类似试剂裂解的样品。
- 样品范围：≥17核苷酸。
- RNA纯度：高质量的RNA可应用于高通量测序等敏感的下游实验。
- RNA结合量：每个柱子可最多结合50ug的RNA。
试剂制备
RNA 洗涤液2 在使用之前一定要配好，添加好乙醇后在试剂瓶上做好标记！！！
添加40ml无水乙醇到10ml的 RNA洗涤液 中
操作步骤:
整个操作步骤是由2个步骤组成：（I）样品裂解匀浆（I I）样品纯化
（I）样品裂解匀浆
此步骤主要参考TRIZOL等类似裂解试剂说明书的裂解液用量，以下给出我公司提供的可完美替换TRIZOL的TRIcom试剂用量作为参考。
a.组织
动物组织：每30~50mg组织加1ml的TRIcom。
植物组织：每50~100mg组织加1ml的TRIcom。
b. 单层生长的细胞
单层贴壁细胞的收集（收集细胞数量请不要超过1×107 ）：可直接在培养容器中裂解（容器体积不超过10 cm2 ），或者使用胰蛋白酶处理后离心收集细胞沉淀。（在摇瓶中培养的单层贴壁细胞通常采用胰蛋白酶处理的方法）。
1) 直接裂解法： 直接在培养板中加入RNApure裂解细胞，每10 cm2 面积加入1 ml TRIcom。用 取样器吹打几次。 2) 胰蛋白酶处理法：确定细胞数量，吸除培养基，用PBS洗涤细胞，吸除PBS，向细胞中加入含 有0.1-0.25%胰蛋白酶的PBS 处理细胞，当细胞脱离容器壁时，加入含有血清的培养基失活胰 蛋白酶，将细胞溶液转移至RNase-free 的离心管中，300×g 离心5 分钟，收集细胞沉淀，仔 细吸除所有上清。去除液体培养基后，直接往培养板中加入RNA裂解液溶解细胞，并用移液枪轻轻吹打混匀。依据细胞的数量来决定所需的RNA裂解液量（105 细胞以内加100ul, 106 细胞加300ul）。
c. 悬浮生长的细胞
离心沉淀细胞(≤500 x g)，完全去除上清后用RNA裂解液重悬细胞沉淀。可短暂涡旋振荡。
d. 细胞悬液：离心取细胞。每5×106－107 动物、植物和酵母细胞或每107细菌细胞加入1 ml TRIcom。加入TRIcom前不要洗涤细胞，以免降解mRNA。一些酵母和细菌细胞可能需要匀浆仪处理。
e. 血液处理：直接取新鲜的血液，加入3 倍体积TRIcom（推荐0.25ml 全血加入0.75ml TRIcom），充分振荡并
且混匀。
其他难裂解的组织，酵母，植物匀浆需要配合蛋白酶K和裂解珠（选配）。
（ I I）样品纯化：以下离心力均在10,000-16,000 x g范围内进行。
- 加入等体积(95-100%)的无水乙醇到上一步TRIZOL裂解液中混匀。
- 将上述混合物放入套在收集管上的2号柱子里，离心1分钟。去除滤出液。
- 添加400ul的RNA洗涤液1到2号柱子里，离心1分钟。去除滤出液。
- 添加700ul的RNA洗涤液2到2号柱子里，离心1分钟。去除滤出液。
- 空转2分钟以去除残留的乙醇，以免抑制下游反应。
- 取出2号柱，放入一个无RNA酶的离心管中，在吸附膜的中间部位加50μl RNase-free water（事先在 65-70℃水浴中加热效果更好）， 室温放置2分钟， 离心1分钟洗脱RNA。
该产品被引用文献：
1、Researchers used the Direct-zol RNA MiniPrep for heterologous E. coli expression of the FnCpf1 locus by means of RNA-seq and discovered a new endonuclease, Cpf1, which further improves upon the widely used CRISPR-Cas9 genome editing system. Cpf1 targets distinct PAM sequences, requires no tracrRNA, and cleaves DNA with staggered overhangs.
Zetsche B, et. al. (2015). Cpf1 is a Single RNA-Guided Endonuclease of a Class 2 CRISPR-Cas System. Cell. 163(3): 759-71.
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/26422227
2、The Direct-zol RNA Miniprep kit was used to isolate pure total RNA from Rat cells, and the high quality RNA was used to create a cDNA library for RT-qPCR analysis of several genes related to hematopoietic Stem Cell (HSC) Development. The consistent RNA extraction allowed the scientists to determine that HSC cells do not significantly contribute to kidney repair following acute kidney injuries.
Burst V. et al. (2012) Survival and distribution of injected haematopoietic stem cells in acute kidney injury. Nephrol Dial Transplant 0: 1–8
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/23197679
3、High-quality RNA isolated with the Direct-zol™ RNA MiniPrep from fecal and culture samples were shown to be instrumental in the development of a rotavirus early detection system using RT-PCR. The efficient RNA isolation helps in identification of severe gastroenteritis in infants and young children.
Yoshiki F, Takashi S, Takagi H, et al. Amplification of all 11 RNA segments of group A rotaviruses based on reverse transcription polymerase chain reaction Microbiol Immunol 2012; 56:
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/22708835
4、Total RNA was extracted from human, rat, and mouse cortical neurons using the Direct-zol RNA MiniPrep Kit. The high-quality RNA was reverse transcribed into cDNA and used to investigate the effect of BPA exposure on neurodevelopment by real-time PCR analysis.
Yeo M, et. al. (2013) Bisphenol A delays the perinatal chloride shift in cortical neurons by epigenetic effects on the Kcc2 promoter. Proc Natl Acad Sci U S A. 110(11):4315-20.
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/23440186
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文献和实验相关实验
光PCR曲线图 实验讨论与分析： 从微量分光光度计测的结果上分析，使用Simgen植物总RNA提取液套装，不论是土豆块茎还是桑叶都获取到了纯度非常高的RNA。通常Trizol试剂提取的RNA会出现的A260/A230值偏低的情况也没有出现。 从电泳图上分析，RNA条带完整，有不明显的基因组DNA污染（土豆RNA）或者根本就观察不到基因组DNA污染（桑叶RNA），与分光光度计测得的数据有较好的对应关系。 从荧光PCR结果上分析，扩增曲线正常，无抑制现象。 综上所述，植物总RNA提取液套装
本文针对艾德莱生物RNA提取产品选择指南（仅供参考）首先询问客户提取的大致种类，是动物组织细胞？植物？血液样品？真菌？细菌？病毒？酵母？不同的种类应该选择不同的产品。动物组织细胞(1) RN01 TRIpure reagent,这个就是Invitrogen的TRIzol，我们质量完全和进口一样可以100%替代进口TRIzol。(2) RN04 总RNA提取试剂盒。这款就是TRIzol，只是把TRIzol配套使用的氯仿，异丙醇，70%乙醇，DEPC处理的水和配全了。等于
填补Qiagen空白的植物RNA提取试剂盒（包括多糖多酚困难样品）
后要回收，效果不好，还常常降解RNA，让人望而生畏，而且成本高昂，单单Qiagen的配套DNA酶柱上消化试剂盒就要1100元/50次，如果还要使用RNA清洁纯化回收DNA酶消化后的盒子就更昂贵了。近年来北京艾德莱又投入大量研发人力物力，终于独家并且首家推出RN38 EASYspin plus 植物RNA提取试剂盒解决了DNA残留问题，该试剂盒使用基因组DNA清除柱子，配合独家研发的溶液，不需要DNA酶消化，操作简单仅需增加10秒钟清除基因组DNA残留的步骤，不用苯酚，氯仿，30分钟完成全部试验过程
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