大型/大量质粒提取试剂盒(溶液型、转染型)

产品介绍
    本试剂盒用碱裂解法从培养菌中提取质粒DNA，采用独特的溶液配方和内毒素清除试剂，只需要几次简单离心去除蛋白质、多糖、内毒素、RNA等杂质，获得高质量的质粒DNA。纯化DNA的OD260/280通常在1.8左右，得到的质粒可直接应用于细胞转染甚至动物体内实验等对DNA纯度要求很高的工作中。纯化后期过程均在Eppendorf管中操作，方法简单，不需特殊设备，无需过柱，不用酚氯仿抽提；基本可完全回收细菌裂解释放出的质粒，不必担心质粒DNA的丢失。本方法提取纯化质粒DNA，对质粒损伤小，即使是10kb甚至100kb以上的大型质粒或超大型BAC/PAC质粒，只要碱裂解法能够提取，就可以有效纯化。 

产品特点
    1. 不需要使用有毒的苯酚，氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀。快速、方便、从100-140ml大肠杆菌LB(Luria-Bertani)培养液中，可快速提取
      0.2-0.5mg纯净的高拷贝质粒DNA，提取率达80-90%。
    2. 获得的质粒产量高，超螺旋比例高，纯度好，可直接用于酶切、转化、PCR、体外转录、测序等各种分子生物学实验。
    3. 内毒素含量极低（<10 EU/μg DNA），可直接应用于细胞转染。 

产品储存
    本产品收到后按照说明书指示温度存放各成份，储存18个月不影响使用效果。 
 

自备试剂

    异丙醇、70%乙醇、TE

 

注意事项

    1. 提取的质粒量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。如果所提质粒为低拷贝质粒或大于10kb的大质粒，应加大菌体使用量，同时按比例

       增加P1、P2、P3的用量。

    2. 提取大质粒时操作动作要轻柔，应该使用剪大了开口的吸头，防止机械剪切对DNA的损坏。

    3. DNA沉淀液沉淀离心后，可能看不到明显沉淀。如未见沉淀，担心DNA丢失，可保留上清液，待完成全部操作后电泳鉴定，以确定是否获得终

       产物(数百微克DNA离心沉淀在管的侧壁上，可能无法看到明显团块)。

    4. 得到的质粒DNA可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。OD260值为1相当于大约50μg/ml DNA。电泳可能为单一条带，也可

       能为2条或者多条DNA条带，这主要是不同程度的超螺旋构象质粒泳动位置不一造成，与提取物培养时间长短、提取时操作剧烈程度等有关。

       本公司产品正常操作情况下基本超螺旋可以超过95%。

 

实验图例