DH5α 电转感受态细胞

电转感受态细胞的制备

试剂准备： LB培养基: 500mL 双蒸水：600mL 高压灭菌 预冷 10%甘油：1000mL 预冷 250ml离心杯：高压灭菌 预冷 50mL离心管数个，250mL摇瓶4个，1.5mL EP管 高压灭菌 制备步骤： 1、接种原代菌（DH5α或DH10B），次日挑取单菌落，放入1mL LB培养基中，37℃，300rpm，6 hr

CRISPR 实验利器：BTX 电转仪

（如 Cas9）（图 2）,Cas9 能够将该序列进行切除（图 3）。正是基于细菌的这种后天免疫防御机制，CRISPR/Cas9 技术应运而生，从而使科学家们利用 RNA 引导 Cas9 核酸酶实现对多种细胞基因组的特定位点（如 NHEJ 非同源性末端接合) (图 4) 进行修饰。为什么要电转？CRISPR 革命已经开始，将 CRISPR 结构导入特定细胞 (如干细胞、神经细胞、造血细胞、受精卵, 等等) 用普通地方法往往很困难。电穿孔技术可使这些细胞在精确的电脉冲作用下，在细胞膜上形成瞬时的空隙

关于原代 T 细胞电转 DNA 条件的优化探索

北京生物研究所的团队优化了 CAR-T 生产的电转染条件，可以在 6 天内生产出对肿瘤细胞有正常杀伤效果的 CAR-T 细胞。 无论做基础研究还是在临床的免疫治疗中，拥有一套关于人原代T细胞工程的有效基因转导系统是十分重要的。假病毒系统和电转染是目前最流行的基因转导策略，但与病毒颗粒介导的方法相比，电转染理论上更安全，因为它没有使转导的基因整合到宿主基因组上。此外，电转导具有方便、快捷的有点，使其更有吸引力。在此，北京生物研究所的研究者开发了一种用于生产嵌合抗原受体(CAR)-T 细胞的电转