TRIzon试剂(总RNA提取)库存

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名称：TRIzon试剂(总RNA提取)库存
品牌：百奥莱博
英文名：TRIzon Reagent
产地：国产|进口
规格：100ml
  TRIzon是广谱型总RNA提取试剂。实验操作快速方便，颜色鲜明，便于分层。本试剂适用范围广泛，可以从动物组织、植物材料、各种微生物及培养细胞等样品中提取总RNA。样品在TRIzon中被充分裂解的同时能够最大限度地保证RNA的完整性。在加入*仿离心后，溶液会分成三层：上层无色水相、中间层和下层红色有机相，RNA分布在上清层中。收集上清层后，经异丙醇沉淀便可以回收得到总RNA。提取的总RNA完整性好，无蛋白和DNA污染，可用于各种分子生物学常规实验，如RT-PCR、Real-time RT-PCR、Northern Blot、Dot Blot、体外翻译等。

自备试剂：*仿、异丙醇、75%乙醇、无RNase的水(新开封或提取RNA专用)。

实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、预防RNase污染，应注意以下几方面：
1)使用无RNase的塑料制品和枪头，避免交叉污染。
2)玻璃器皿应在使用前于180℃高温下干烤4小时，塑料器皿可在0.5M的NaOH中浸泡10分钟，用水彻底冲洗后高压灭菌。
3)配制溶液应使用无RNase的水。
4)操作人员戴一次性口罩和手套，实验过程中要勤换手套。
2、提取的样品避免反复冻融，否则影响RNA提取得率和质量。
3、本品中含有*酚，具有毒性和腐蚀性。如果吸入体内、接触皮肤、吞食等会导致中毒、灼伤以及其他身体伤害。使用本制品时应穿戴防护物品，如防护服装、手套、眼罩、面罩等。如果不小心接触到眼睛，应立即用大量的水冲洗并前往医院治疗。
4、样品用TRIzon 匀浆后，如不即刻加入*仿，置于-70℃下可放置一个月以上。
5、保存在75%乙醇中的RNA沉淀，2～8℃可以保存一周，-20℃条件下可以保存1年。RNA半衰期比较短，容易降解，建议提取后尽快进行后续实验，如反转录成cDNA，Northern Blot等。
6、若下游实验对DNA非常敏感，建议用不含RNase的DNase I(货号：WE0213A)对RNA进行处理。

操作步骤：

1．各种材料的处理
1a.植物组织：取新鲜植物组织在液氮中充分研磨或将植物组织剪碎后直接在TRIzon中迅速研磨，每30-50 mg组织加入1ml TRIzon，混匀。
注意：样品体积一般不要超过TRIzon体积的10%。
1b.动物组织：取新鲜或-70℃冻存的动物组织尽量剪碎，每30-50 mg组织加入1ml的TRIzon，匀浆仪进行匀浆处理。或在液氮中研磨后加入TRIzon 1ml混匀。
注意：样品体积一般不要超过TRIzon体积的10%。
1c.单层培养细胞：吸去培养液，可直接在培养板中加入适量TRIzon(每10cm2面积需要1ml TRIzon)，用取样器反复吹打使细胞裂解。也可用胰蛋白酶处理后，将细胞溶液转移至RNase-Free的离心管中，300×g离心5 min，收集细胞沉淀，仔细吸除所有上清，加入TRIzon 1ml混匀。
注意：
1)收集细胞数量不要超过1×107。
2)TRNzol加量根据培养板面积决定，不是由细胞数决定。如果TRIzon加量不足，可能导致提取的RNA中有DNA污染。
3)收集细胞时一定要将细胞培养液去除干净，否则会导致裂解不完全，造成RNA的产量降低。
1d.细胞悬液：离心收集细胞。每5×106-1×107动物、植物和酵母细胞或每107细菌细胞加入1ml TRIzon。
注意：
1)加入TRIzon前不要洗涤细胞，以免RNA降解。
2)一些酵母和细菌细胞可能需要匀浆仪或液氮研磨处理。
1e.血液处理：直接取新鲜的血液，加入3倍体积TRIzon(推荐0.25ml全血加入0.75mlTRIzon)，充分振荡混匀。
1f.可选步骤：对于蛋白、脂肪、多糖或胞外物质含量高的样品，如肌肉组织、脂肪组织或植物的块茎，可以在匀浆处理后4℃，12000rpm(~～13400×g)离心10分钟以除去不溶物质，此时沉淀中含胞外物质、多糖和高分子量的DNA，而RNA存在于上清中。

2、样品中加入TRIzon后反复吹打几次，使样本充分裂解。室温放置5分钟，使蛋白核酸复合物完全分离。
3、向以上溶液中加入*仿，每使用1ml TRIzon加入0.2ml*仿，盖好管盖，剧烈振荡15秒，室温放置2-3分钟。
4、4℃下12000rpm离心15分钟，此时样品分成三层：红色有机相，中间层和上层无色水相，RNA 主要在水相中，把水相(约600μl)转移到一个新的RNase-Free离心管(自备)中。
5、在得到的水相溶液中加入等体积异丙醇，颠倒混匀，室温放置10分钟。
6、4℃ 12000rpm 离心10分钟，弃上清。
7、加入75%乙醇(用无RNase的水配制)洗涤沉淀。每使用1ml TRIzon用1ml 75%乙醇对沉淀进行洗涤。
8、4℃ 12000rpm离心3分钟，小心吸弃上清，注意不要吸弃RNA沉淀。
注意：剩余的少量液体可短暂离心，然后用枪头吸出，注意不要吸弃沉淀。
9、室温放置2-3分钟，晾干。加入30-100μl无RNase的水，充分溶解RNA，得到的RNA保存在-70℃，防止降解。
注意：沉淀不要过分干燥，以免难于溶解。

储存条件：2～8℃避光。

更多有关TRIzon试剂(总RNA提取)库存的价格及使用说明等，请联系我们的业务经理王欣女士咨询，我公司还销*(代"售")以下产品：

·超纯dNTP混合液(10 mM)
编号：WE0160
英文名称：UltraPure dNTP Mix(10 mM each)
规格：1ml|5ml
  本产品是dATP、dGTP、dCTP、dTTP的等摩尔数混合物(各10mM)，可与所有的耐热聚合酶配套使用。UltraPure dNTP纯度均达到99%以上。

使用方法：
UltraPure dNTP(10 mM each)可直接使用，或用调节至中性(PH7.5 左右)的无菌超纯水稀释至适当浓度使用。可用于要求较高的PCR反应(如Real-time PCR)、DNA序列测定、分子标记、cDNA合成等。

储存条件：-20℃。

·动物组织/细胞RNA提取试剂盒(含DNase I)
编号：WE0198
英文名称：RNAtiqu Tissue&Cell RNA Extraction Kit(DNase I)
规格：50次
  本试剂盒将高效的异硫*酸胍裂解技术与硅基质膜纯化技术相结合，可从动物细胞及组织中高效提取总RNA。起始样本一般最多30 mg组织或1x107细胞。本试剂盒还可回收未完全纯化的RNA、体外转录和酶促反应后得到的RNA。用本试剂盒可提取纯化分子量大于200碱基的高品质RNA，几乎无DNA残留。如果要进行对微量DNA非常敏感的RNA实验，残留的DNA可利用无RNase的DNase在柱上进行消化去除。提取的RNA可用于RT-PCR、 Nothern Blot、Dot Blot等下游实验。

试剂盒组成：

 

组份	50次
DNase I	1000 U
10×Reaction Buffer	1000μl
Buffer RL	35ml
Buffer RW1	30ml
Buffer RW2(浓缩液)	11ml
RNase-Free Water	10ml
吸附柱RM及收集管	50套
RNase-Free离心管(1.5ml)	50个

保存条件：DNase I及10×Reaction Buffer -20℃保存，其它组分室温(15～30℃)。

自备试剂：β-巯基乙醇、无水乙醇(新开封或提取RNA专用)。

实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、预防RNase污染，应注意以下几方面：
1)使用无RNase的塑料制品和枪头，避免交叉污染。
2)配制溶液应使用无RNase的水。
3)操作人员戴一次性口罩和手套，实验过程中要勤换手套。
2、提取的样品避免反复冻融，否则影响RNA提取的量和质量。
3、Buffer RL在使用前请加入β-巯基乙醇，1ml Buffer RL加10μl β-巯基乙醇。加入β-巯基乙醇的Buffer RL室温可保存1个月。
4、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在Buffer RW2中加入无水乙醇。
5、Buffer RL如果产生沉淀，可于56℃加热使其溶解后室温放置。
6、所有离心步骤均在室温下进行，且所有操作步骤动作要迅速。

操作步骤：
1、样品处理
① 组织：将组织在液氮中磨碎。每20-30 mg组织加600μl Buffer RL(使用前检查是否加入β-巯基乙醇)，组织样本少于20 mg加350μl Buffer RL。样品体积不超过Buffer RL体积的十分之一。
② 单层培养细胞：将细胞在培养瓶中直接裂解或处理成细胞悬液，离心得到细胞沉淀，弃上清，每6-10cm2培养面积加入600μl Buffer RL，小于6cm2加入350μl Buffer RL，反复吹打几次，使其充分裂解。
③ 细胞悬液：12000rpm(～～13400×g)离心1分钟弃上清，得到细胞沉淀。每5×106-1×107细胞加入600μl Buffer RL，少于5×106细胞加入350μl Buffer RL，反复吹打几次，使其充分裂解。
注意：
① 尽量除尽细胞培养基，细胞培养基可能抑制细胞的裂解影响RNA产量。
② 尽量使细胞充分悬浮并充分裂解，否则影响RNA产量。
2、样品充分裂解后，室温放置5分钟，使蛋白核酸复合物完全分离。
3、12000rpm离心2-5min，取上清进行以下操作。
4、向步骤3中得到的溶液中加入1倍体积(600μl 或350μl)的70%乙醇(无RNase水配制)，混匀。
注意：加入乙醇后可能会产生沉淀，不会影响后续实验。
5、将上步所得溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱中，若一次不能将全部溶液加入吸附柱中，请分两次转入，12000rpm离心1分钟，弃废液。将吸附柱放回收集管中。
注意：吸附柱的最大载量为100μg，不要超载，否则会影响RNA的产量和纯度。
6、向吸附柱中加入350μl Buffer RW1，12000rpm离心1分钟，弃废液，将吸附柱重新放回收集管中。
7、配制DNase I 混合液：取52μl RNase-Free Water，向其中加入8μl 10×Reaction Buffer和20μl DNase I(1 U/μl)，混匀， 配制成终体积为80μl的反应液。
8、向吸附柱中直接加入80μl DNase I 混合液，20-30℃孵育15分钟。
9、向吸附柱中加入200μl Buffer RW1，12000rpm离心1分钟，弃废液，将吸附柱重新放回收集管中。
10、向吸附柱中加入500μl Buffer RW2(使用前检查是否加入无水乙醇), 12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。
11、重复步骤10。
12、12000rpm离心2分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干吸附柱中的无水乙醇。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
13、将吸附柱转入新的离心管中，向吸附膜中间位置加入30-50μl RNase-Free Water，室温放置1分钟，12000rpm离心1分钟，收集RNA溶液，-70℃保存RNA，防止降解。
注意：
① RNase-Free Wate体积不应小于30μl，体积过小影响回收率。
② 如果要提高RNA的产量，可用30-50μl新的RNase-Free Water重复步骤13。
③ 如果要提高RNA浓度，可将得到的溶液重新加入到吸附柱中，重复步骤13。

储存条件：室温(15～30℃)。


TRIzon试剂(总RNA提取)库存关键词：总RNA提取,TRIzon Reagent,TRIzon试剂(总RNA提取),WE0191

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