北京T4 DNA连接酶厂家

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京T4 DNA连接酶厂家是高品质的工具酶产品，由北京百奥莱博供应，用于科研实验，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多T4 DNA连接酶等工具酶产品请联系我司咨询订购。

名称：北京T4 DNA连接酶厂家
英文名：T4 DNA Ligase
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口
  T4 DNA Ligase 是从表达T4 DNA Ligase 基因的大肠杆菌经诱导表达后分离纯化而来的，催化相邻DNA链的5’磷酸基团和3’羟基基团以磷酸二酯键结合反应。该酶可催化平末端或粘性末端DNA之间的连接，还可修复双链DNA、RNA、DNA/RNA杂交双链中的单链切口。本品可应用于DNA插入片段和载体DNA的粘性末端和平末端的连接，以及线性DNA的自身环化。

产品组成：

 

组份	100U	500U
T4 DNA Ligase，5 U/μl	20μl	100μl
10×Ligation Buffer	150μl	750μl
50%PEG Solution	150μl	750μl

实验前准备及重要注意事项
1、T4 DNA Ligase的最终用量不要超过推荐的用量，否则影响连接效率。
2、PEG可以极大提高平末端的连接效率，我们推荐加入终浓度为5% PEG Solution以提高平末端的连接效率。
3、为了提高转化效率，建议所加入连接产物的量不要超过感受态细胞体积的10%。
4、由于T4 DNA Ligase中含有甘油，比较粘稠容易挂壁，建议使用之前短暂离心将液体收集到管底，取样时枪头尽量不要深入液面太深以免粘在枪头上造成损失。

使用方法：

一、粘性末端的连接：

1、按以下体系配制反应液：

组份	20μl体系	终浓度
线性载体DNA	Xμl	20-100ng
插入DNA片段	Yμl	插入片段：载体1:1-5:1
10×Ligation Buffer	2μl
T4 DNA Ligase，5 U/μl	0.2μl	1 U
ddH2O	补充至20μl

2、涡旋震荡，瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底。
3、反应条件：22℃孵育10分钟。
4、瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底，65℃孵育10分钟或70℃孵育5分钟以灭活T4 DNA Ligase。
5、可取5μl连接产物热击转化50μl感受态细胞或取1-2μl连接产物电击转化50μl感受态细胞。
注意：如需电击转化，推荐用乙醇沉淀法去除T4 DNA Ligase后进行电击转化。

二、平末端的连接：

1．反应体系：

组分	20μl体系	终浓度
线性载体DNA	Xμl	20-100ng
插入DNA片段	Yμl	插入片段：载体1:1-5:1
10×Ligation Buffer	2μl
T4 DNA Ligase，5 U/μl	1μl	5 U
50%PEG Solution	2μl	5%
ddH2O	补充至20μl	20μl

2、涡旋震荡，瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底。
3、反应条件：22℃孵育1小时。
4、瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底，65℃孵育10分钟或70℃孵育5分钟以灭活T4 DNA Ligase。
5、可取5μl连接产物热击转化50μl感受态细胞或取1-2μl连接产物电击转化50μl感受态细胞。
注意：如需电击转化，推荐用乙醇沉淀法去除T4 DNA Ligase后进行电击转化。

三、线性DNA的自身环化：

1、反应体系：

组分	50μl体系	终浓度
线性载体DNA	Xμl	5-50ng
10×Ligation Buffer	5μl
T4 DNA Ligase，5 U/μl	1μl	5 U
ddH2O	补充至50μl	50μl

2、涡旋震荡，瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底。
3、反应条件：粘性末端22℃孵育10分钟；平末端22℃孵育1小时。
4、瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底，65℃孵育10分钟或70℃孵育5分钟以灭活T4 DNA Ligase。
5、可取5μl连接产物热击转化50μl感受态细胞或取1-2μl连接产物电击转化50μl感受态细胞。
注意：如需电击转化，推荐用乙醇沉淀法去除T4 DNA Ligase后进行电击转化。

储存条件：-20℃。

更多有关北京T4 DNA连接酶厂家的价格及使用说明等，请联系我们的业务经理王欣女士咨询，我公司还销*(代"售")以下产品：

·高效多重PCR Mix
编号：WE0124
英文名称：Super Multiplex PCR Mix
规格：1ml|5ml
  本品是由SuperStar DNA Polymerase、Mg2+、dNTPs以及PCR稳定剂和增强剂等组成的预混体系，专用于多重PCR扩增。本品所含的 SuperStar DNA Polymerase是全新高效热启动酶，在常温下没有聚合酶活性，可有效减少PCR反应初期因引物错配而产生的非特异性扩增。独特的缓冲体系与热启动酶的组合，显著提高了PCR的扩增效率，扩增范围更广泛。本产品适用于各种类型的多重PCR反应，比如微卫星分析、基因分型和SNP检测等。

产品组成：

组份	1ml	5ml
2×Super Multiplex PCR Mix	1ml	5×1ml
ddH2O	1ml	5×1ml

注意事项：
1、使用前请上下颠倒轻轻混匀，尽量避免起泡，并经短暂离心后使用。
2、避免反复冻融，反复冻融可能使产品性能下降。如果在短期内需要频繁使用，可在2～8℃保存。

使用方法：
以下举例为常规PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

1、PCR反应体系

试剂	50μl反应体系
2×Super Multiplex PCR Mix	25μl
Primer Pool	0.1-0.3μM
DNA or cfDNA	5ng-100ng
ddH2O	up to 50μl

注意：引物浓度请以终浓度0.1-0.3μM作为设定范围的参考。

2、PCR反应条件

步骤	温度	时间	循环数
预变性	95℃	2 min
变性	98℃	20 s	30-40个循环
退火延伸	65℃	90 s
终延伸	72℃	5 min

注意：
1)一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。
2)可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。

储存条件：-20℃，避免反复冻融。


北京T4 DNA连接酶厂家关键词：WE0239,T4 DNA连接酶,T4 DNA Ligase


·多彩预染蛋白Marker
编号：WE0282
英文名称：Multicolor Protein Marker
规格：20次(100μl)|100次(5×100μl)
  本品由10.5-175 kD范围的11条蛋白组成(10.5 kD、14 kD、22 kD、29 kD、42 kD、51 kD、62 kD、70 kD、95 kD、130 kD、175 kD)。由低到高的分子量范围可监测电泳过程中的蛋白分离情况、判断目标蛋白的分子量，并且可以监测Western Blot实验中的转膜效率。10.5 kD、42 kD、95 kD的三条带结合有蓝色染料更便于实时观察电泳进程、判断蛋白分子量。本产品推荐上样量为5μl。

注意事项：
1、本品已包含上样缓冲液，直接使用，不可在100℃加热或煮沸。
2、为避免反复冻融及污染，可将本产品分装后，-20℃保存。

操作步骤：
1、加样前在室温或37-40℃数分钟解冻后轻轻摇匀，以确保溶液混合均匀。
2、根据加样孔的大小，每泳道加5μl进行聚丙*(代"烯")酰胺凝胶电泳。

实验图例

15%的聚丙*(代"烯")酰胺凝胶电泳后结果

储存条件：-20℃保存，避免反复冻融。


北京T4 DNA连接酶厂家关键词：WE0239,T4 DNA连接酶,T4 DNA Ligase


·0.5 M Tris-HCl缓冲液(pH6.8)
编号：WE0285
英文名称：0.5 M Tris-HCl(pH6.8)
规格：500ml

·抗His标签抗体琼脂糖介质
编号：WE0330
英文名称：Anti-His Mouse Monoclonal Antibody Agarose
规格：100μl|500μl
抗His标签免疫亲和介质是将抗His标签的单克隆抗体共价偶联到琼脂糖上，这种琼脂糖能进行免疫沉淀或者免疫共沉淀，能检测包含有His标签的蛋白。

抗体类型：鼠单克隆抗体IgG1
免疫原：人工合成多肽序列
应用范围：IP

·免疫组化试剂盒(鼠源一抗)
编号：WE0315
英文名称：Mouse HRP Kit(DAB)
规格：3ml
  本试剂盒根据生物素与链霉亲和素具有强亲和力的原理设计。在鼠源的一抗与相应的靶抗原结合后，本试剂盒中的生物素标记羊抗鼠二抗与一抗特异结合；二抗上标记的生物素与标记过氧化物酶(HRP)的链霉亲和素结合，形成抗原～特异性一抗～生物素化的二抗～HRP标记的链霉亲和素复合物。HRP可以催化底物显色，从而推断待检抗原的存在及分布。该试剂盒使用的生物素化二抗、SA-HRP，均采用优化的标记和纯化技术，使得其染色有更高灵敏度和更低的背景，适合于检测福尔马林固定石蜡包埋组织切片，以及冰冻切片、细胞爬片、新鲜制备的血涂片等。鼠Streptavidin-HRP试剂盒适合与百奥莱博即用型或浓缩型抗体配套使用。

试剂盒组成：

组份	3ml
Solution A(Endogenous Peroxydase Enzymes Blocking Buffer，White Solution)	3ml
Solution B(Normal Goat Serum For Blocking，White Solution)	3ml
Solution C(Goat anti-Mouse IgG，Biotin，Ready to Use，Yellow Solution)	3ml
Solution D(Streptavidin-HRP，Ready to Use，Red Solution)	3ml
DAB-A(20×)	250μl
DAB-B(1×)	5ml

注意事项：
1、本试剂盒仅适用于一抗为的鼠源抗体的IHC实验。
2、以每张切片加入1滴(约50μl)计算，3ml可做60张切片，18ml可做360张切片。
3、对于内源性生物素含量比较丰富的组织，使用本试剂盒时最好用内源性生物素阻断剂进行封闭。
4、DAB工作液现配现用，配制好的工作液2～8℃避光1小时内有效。
5、实验过程中避免组织片干燥，因此各步孵育时工作液用量必需充足，保证完全覆盖组织样本，且尽量在湿盒中进行孵育。
6、为获得最佳实验结果，请务必优化实验条件及试剂用量。
7、DAB为可疑致癌物，使用时请采取必要的防护措施。
8、本产品仅用于科研，不能用于人体反应或人体治疗。

操作步骤：

1、常规处理欲检测的石蜡或冰冻组织切片或细胞爬片等样本。
1)组织切片或细胞爬片染色前处理：
a. 石蜡切片
脱蜡水化：60ºC烤片1小时，二甲*脱蜡二次，每次5分钟；再依次浸入梯度乙醇(无水乙醇－无水乙醇－95%－85%－75%乙醇)和蒸馏水中各5分钟水化。
b. 冰冻切片和细胞爬片
切片(或爬片)浸于0.01 M pH7.4 PBS洗涤3次×5分钟。然后用0.1%Triton X-100覆盖组织(或细胞)浸润15分钟，0.01 M pH7.4 PBS洗涤2次×5分钟。
2)石蜡切片的抗原修复：绝大大多数情况下，石蜡组织切片用柠檬酸缓冲液高压修复都是适合的。
修复工作液配制：1 L去离子水中加入10ml柠檬酸缓冲液(IHC抗原修复液, 100×)(Cat#：WE0318)，混匀即可。
修复过程：修复液加入高压锅内，待修复切片浸于修复液中(必需没过组织)，盖上压力锅盖，加热至均匀喷汽，从喷汽开始计时，1~2分钟后压力锅离开热源，自然冷却至室温，取出切片，蒸馏水淋洗后，再用PBS(0.01 M pH7.4)漂洗2次，每次3分钟。
2、滴加适量Solution A白色溶液，即内源性过氧化物酶封闭液室温孵育10分钟，PBS充分淋洗。
3、滴加适量Solution B白色溶液，即封闭用正常羊血清工作液，室温孵育10分钟，甩干。
4、滴加适量一抗工作液(商品化即用型抗体或适当比例稀释的浓缩抗体)，按实验要求孵育，然后PBS充分淋洗。
5、滴加适量Solution C黄色溶液，即生物素标记羊抗鼠二抗工作液，室温孵育10分钟，PBS充分淋洗。
6、滴加适量Solution D红色溶液，即HRP标记的链霉亲和素，室温孵育10分钟，PBS充分淋洗。
7、DAB显色工作液配制：根据需要量，将DAB-A和DAB-B以1：19的体积比混匀后即为DAB显色工作液。也可选择每毫升试剂B中滴加1滴(约50μl)试剂A，混匀即可。
8、显色：加适量的DAB显色工作液于需要显色的组织切片或细胞爬片上即可显色，显色时间一般为1-5分钟。显微镜下观察控制显色时间，当达到最佳显色效果后，自来水冲洗终止显色。显色后的切片经复染、脱水透明，封片后可长期保存。

储存条件：2～8℃

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