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- 保存条件:
负80度
- 保质期:
3年
- 英文名:
pSK+KanaRpsL
- 库存:
100
- 供应商:
上海柯雷生物
- 规格:
20ul
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柯雷生物拥有数万种质粒,菌种,基因,细胞株,试剂盒等科研资源,还提供基因合成,质粒改造,载体构建和蛋白表达等精品实验服务
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文献和实验,近年来人们较多采用此方法克隆基因启动子。苏宁等根据已报道的水稻叶绿体16SrRNA启动子基因序列设计5'启动子序列的引物,以水稻叶绿体DNA为模板,PCR扩增出16SrRNA基因5'启动子区的片段,酶切克隆到pSK的SacI和SphI位点,构建测序载体质粒pZ16S,进行序列测定,结果表明所克隆的片段长为144bp,含有SD序列。同源比较结果表明,所克隆的片段与水稻叶绿体16SrRNA启动子序列具有100%的同源性。上述的PCR方法简便、快捷、操作简单,是人们较为广泛使用的技术。1.3 环状PCR
基因装在运载体上,运载体将目的基因运到受体细胞是基因工程的最后一步。一般情况下,转化成功率为百万分之一。为此,遗传工程师们创造了低温条件下用氯化钙处理受体细胞和增加重组 DNA 浓度的办法来提高转化率。采用氯化钙处理后,能增大体细胞的细胞壁透性,从而使杂种 DNA 分子更容易进入。目的基因的导入过程是肉眼看不到的。因此,要知道导入是否成功,事先应找到特定的标志。例如我们用一种经过改造的抗四环素质粒 PSC100 作载体,将一种基因移入自身无抗性的大肠杆菌时,如果基因移入后大肠杆菌不能被四环素杀死
常见问题具体情况可能的原因处理办法备注样品准备问题菌培养不好或失败抗性不对或菌已死核对抗性,尽可能提供载体信息。 或菌培养条件特殊重新提供菌液,或提供2μg纯化质粒。质粒提不出质粒拷贝数极低或客户自己采取大量提取的方法提供2μg纯化质粒。 培养方式不当质粒产量很低低拷贝数质粒或客户自己采取大量提取的方法提供2μg纯化质粒。 培养方式不当自带质粒或已纯化PCR产物量极低是否为电泳法定量,质粒:电泳检测浓度大于100ng/ul,体积大于20ul。测OD值法不可靠,电泳检测总量是否足够已纯化PCR
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