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-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
Plasmid#20871
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pSK+KanaRpsL抗性基因质粒
别称: Plasmid#20871
启动子：RpsL
复制子: pUC
质粒分类: 基因文库质粒；其它基因质粒；其它种源质粒
质粒大小：4678bp
质粒标签：Kana-RpsL
原核抗性: Amp,Kan
筛选标记：G418
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：大肠杆菌
载体用途：蛋白表达
基因种属：
基因类型：ORF
原核抗性：Amp,Kan
真核抗性：
荧光蛋白：
质粒简介
pSK+KanaRpsL质粒了一个完整的KanaRpsL的基因模板。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 4678 bp ds-DNA circular SYN 14-AUG-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
KEYWORDS pSK+KanaRpsL.dna
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 4678)
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Aug 14, 2017 from MiaoLingPlasmid
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..4678
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
rep_origin complement(3..458)
/direction=LEFT
/label=f1 ori
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 626..644
/label=T7 promoter
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
CDS 1031..1405
/codon_start=1
/label=RpsL
/translation="MATVNQLVRKPRARKVAKSNVPALEACPQKRGVCTRVYTTTPKKP
NSALRKVCRVRLTNGFEVTSYIGGEGHNLQEHSVILIRGGRVKDLPGVRYHTVRGALDC
SGVKDRKQARSKYGVKRPKA"
CDS 1446..2240
/codon_start=1
/gene="aph(3')-II (or nptII)"
/product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
/label=KanR
/note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418
(Geneticin(R))"
/translation="MLEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPATC-PFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
GLAPAELFARLKARMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
promoter complement(2487..2505)
/label=T3 promoter
/note="promoter for bacteriophage T3 RNA polymerase"
rep_origin complement(2928..3516)
/direction=LEFT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(3687..4547)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/label=AmpR
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(4548..4652)
/gene="bla"
/label=AmpR promoter
ORIGIN
1 ggaaattgta aacgttaata ttttgttaaa attcgcgtta aatttttgtt aaatcagctc
61 attttttaac caataggccg aaatcggcaa aatcccttat aaatcaaaag aatagaccga
121 gatagggttg agtgttgttc cagtttggaa caagagtcca ctattaaaga acgtggactc
181 caacgtcaaa gggcgaaaaa ccgtctatca gggcgatggc ccactacgtg aaccatcacc
241 ctaatcaagt tttttggggt cgaggtgccg taaagcacta aatcggaacc ctaaagggag
301 cccccgattt agagcttgac ggggaaagcc ggcgaacgtg gcgagaaagg aagggaagaa
361 agcgaaagga gcgggcgcta gggcgctggc aagtgtagcg gtcacgctgc gcgtaaccac
421 cacacccgcc gcgcttaatg cgccgctaca gggcgcgtcg cgccattcgc cattcaggct
481 gcgcaactgt tgggaagggc gatcggtgcg ggcctcttcg ctattacgcc agctggcgaa
541 agggggatgt gctgcaaggc gattaagttg ggtaacgcca gggttttccc agtcacgacg
601 ttgtaaaacg acggccagtg aattgtaata cgactcacta tagggcgaat tgggtaccgg
661 gccccccctc gaggtcgacg gtatcgataa gcttcacgct gccgcaagca ctcagggcgc
721 aagggctgct aaaggaagcg gaacacgtag aaagccagtc cgcagaaacg gtgctgaccc
781 cggatgaatg tcagctactg ggctatctgg acaagggaaa acgcaagcgc aaagagaaag
841 caggtagctt gcagtgggct tacatggcga tagctagact gggcggtttt atggacagca
901 agcgaaccgg aattgccagc tggggcgccc tctggtaagg ttgggaagcc ctgcaaagta
961 aactggatgg ctttcttgcc gccaaggatc tgatggcgca ggggatcaag atctaaccag
1021 gagctattta atggcaacag ttaaccagct ggtacgcaaa ccacgtgctc gcaaagttgc
1081 gaaaagcaac gtgcctgcgc tggaagcatg cccgcaaaaa cgtggcgtat gtactcgtgt
1141 atatactacc actcctaaaa aaccgaactc cgcgctgcgt aaagtatgcc gtgttcgtct
1201 gactaacggt ttcgaagtga cttcctacat cggtggtgaa ggtcacaacc tgcaggagca
1261 ctccgtgatc ctgatccgtg gcggtcgtgt taaagacctc ccgggtgttc gttaccacac
1321 cgtacgtggt gcgcttgact gctccggcgt taaagaccgt aagcaggctc gttccaagta
1381 tggcgtgaag cgtcctaagg cttaatggta gatctgatca agagacagga tgacggtcgt
1441 ttcgcatgct tgaacaagat ggattgcacg caggttctcc ggccgcttgg gtggagaggc
1501 tattcggcta tgactgggca caacagacaa tcggctgctc tgatgccgcc gtgttccggc
1561 tgtcagcgca ggggcgcccg gttctttttg tcaagaccga cctgtccggt gccctgaatg
1621 aactgcagga cgaggcagcg cggctatcgt ggctggccac gacgggcgtt ccttgcgcag
1681 ctgtgctcga cgttgtcact gaagcgggaa gggactggct gctattgggc gaagtgccgg
1741 ggcaggatct cctgtcatct caccttgctc ctgccgagaa agtatccatc atggctgatg
1801 caatgcggcg gctgcatacg cttgatccgg ctacctgccc attcgaccac caagcgaaac
1861 atcgcatcga gcgagcacgt actcggatgg aagccggtct tgtcgatcag gatgatctgg
1921 acgaagagca tcaggggctc gcgccagccg aactgttcgc caggctcaag gcgcgcatgc
1981 ccgacggcga ggatctcgtc gtgacccatg gcgatgcctg cttgccgaat atcatggtgg
2041 aaaatggccg cttttctgga ttcatcgact gtggccggct gggtgtggcg gaccgctatc
2101 aggacatagc gttggctacc cgtgatattg ctgaagagct tggcggcgaa tgggctgacc
2161 gcttcctcgt gctttacggt atcgccgctc ccgattcgca gcgcatcgcc ttctatcgcc
2221 ttcttgacga gttcttctga gcgggactct ggggttcgaa atgaccgacc aagcgacgcc
2281 caacctgcca tcacgagatt tcgattccac cgccgccttc tatgaaaggt tgggcttcgg
2341 aatcgttttc cgggacgccg gctggatgat cctccagcgc ggggatctca tgctggagtt
2401 cttcgcccac cccgggctcg atcccctcgg ggggatccac tagttctaga gcggccgcca
2461 ccgcggtgga gctccagctt ttgttccctt tagtgagggt taattccgag cttggcgtaa
2521 tcatggtcat agctgtttcc tgtgtgaaat tgttatccgc tcacaattcc acacaacata
2581 cgagccggaa gcataaagtg taaagcctgg ggtgcctaat gagtgagcta actcacatta
2641 attgcgttgc gctcactgcc cgctttccag tcgggaaacc tgtcgtgcca gctgcattaa
2701 tgaatcggcc aacgcgcggg gagaggcggt ttgcgtattg ggcgctcttc cgcttcctcg
2761 ctcactgact cgctgcgctc ggtcgttcgg ctgcggcgag cggtatcagc tcactcaaag
2821 gcggtaatac ggttatccac agaatcaggg gataacgcag gaaagaacat gtgagcaaaa
2881 ggccagcaaa aggccaggaa ccgtaaaaag gccgcgttgc tggcgttttt ccataggctc
2941 cgcccccctg acgagcatca caaaaatcga cgctcaagtc agaggtggcg aaacccgaca
3001 ggactataaa gataccaggc gtttccccct ggaagctccc tcgtgcgctc tcctgttccg
3061 accctgccgc ttaccggata cctgtccgcc tttctccctt cgggaagcgt ggcgctttct
3121 catagctcac gctgtaggta tctcagttcg gtgtaggtcg ttcgctccaa gctgggctgt
3181 gtgcacgaac cccccgttca gcccgaccgc tgcgccttat ccggtaacta tcgtcttgag
3241 tccaacccgg taagacacga cttatcgcca ctggcagcag ccactggtaa caggattagc
3301 agagcgaggt atgtaggcgg tgctacagag ttcttgaagt ggtggcctaa ctacggctac
3361 actagaagga cagtatttgg tatctgcgct ctgctgaagc cagttacctt cggaaaaaga
3421 gttggtagct cttgatccgg caaacaaacc accgctggta gcggtggttt ttttgtttgc
3481 aagcagcaga ttacgcgcag aaaaaaagga tctcaagaag atcctttgat cttttctacg
3541 gggtctgacg ctcagtggaa cgaaaactca cgttaaggga ttttggtcat gagattatca
3601 aaaaggatct tcacctagat ccttttaaat taaaaatgaa gttttaaatc aatctaaagt
3661 atatatgagt aaacttggtc tgacagttac caatgcttaa tcagtgaggc acctatctca
3721 gcgatctgtc tatttcgttc atccatagtt gcctgactcc ccgtcgtgta gataactacg
3781 atacgggagg gcttaccatc tggccccagt gctgcaatga taccgcgaga cccacgctca
3841 ccggctccag atttatcagc aataaaccag ccagccggaa gggccgagcg cagaagtggt
3901 cctgcaactt tatccgcctc catccagtct attaattgtt gccgggaagc tagagtaagt
3961 agttcgccag ttaatagttt gcgcaacgtt gttgccattg ctacaggcat cgtggtgtca
4021 cgctcgtcgt ttggtatggc ttcattcagc tccggttccc aacgatcaag gcgagttaca
4081 tgatccccca tgttgtgcaa aaaagcggtt agctccttcg gtcctccgat cgttgtcaga
4141 agtaagttgg ccgcagtgtt atcactcatg gttatggcag cactgcataa ttctcttact
4201 gtcatgccat ccgtaagatg cttttctgtg actggtgagt actcaaccaa gtcattctga
4261 gaatagtgta tgcggcgacc gagttgctct tgcccggcgt caatacggga taataccgcg
4321 ccacatagca gaactttaaa agtgctcatc attggaaaac gttcttcggg gcgaaaactc
4381 tcaaggatct taccgctgtt gagatccagt tcgatgtaac ccactcgtgc acccaactga
4441 tcttcagcat cttttacttt caccagcgtt tctgggtgag caaaaacagg aaggcaaaat
4501 gccgcaaaaa agggaataag ggcgacacgg aaatgttgaa tactcatact cttccttttt
4561 caatattatt gaagcattta tcagggttat tgtctcatga gcggatacat atttgaatgt
4621 atttagaaaa ataaacaaat aggggttccg cgcacatttc cccgaaaagt gccacctg
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pSK+KanaRpsL抗性基因质粒
别称: Plasmid#20871
启动子：RpsL
复制子: pUC
质粒分类: 基因文库质粒；其它基因质粒；其它种源质粒
质粒大小：4678bp
质粒标签：Kana-RpsL
原核抗性: Amp,Kan
筛选标记：G418
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
| 表达宿主: | 293T等哺乳细胞 |
|---|---|
| 培养条件: | 37℃，5%CO2 |
| 诱导方式: | 无需诱导 |
质粒属性
载体宿主：大肠杆菌
载体用途：蛋白表达
基因种属：
基因类型：ORF
原核抗性：Amp,Kan
真核抗性：
荧光蛋白：
质粒简介
pSK+KanaRpsL质粒了一个完整的KanaRpsL的基因模板。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 4678 bp ds-DNA circular SYN 14-AUG-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
KEYWORDS pSK+KanaRpsL.dna
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 4678)
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Aug 14, 2017 from MiaoLingPlasmid
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..4678
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
rep_origin complement(3..458)
/direction=LEFT
/label=f1 ori
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 626..644
/label=T7 promoter
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
CDS 1031..1405
/codon_start=1
/label=RpsL
/translation="MATVNQLVRKPRARKVAKSNVPALEACPQKRGVCTRVYTTTPKKP
NSALRKVCRVRLTNGFEVTSYIGGEGHNLQEHSVILIRGGRVKDLPGVRYHTVRGALDC
SGVKDRKQARSKYGVKRPKA"
CDS 1446..2240
/codon_start=1
/gene="aph(3')-II (or nptII)"
/product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
/label=KanR
/note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418
(Geneticin(R))"
/translation="MLEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPATC-PFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
GLAPAELFARLKARMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
promoter complement(2487..2505)
/label=T3 promoter
/note="promoter for bacteriophage T3 RNA polymerase"
rep_origin complement(2928..3516)
/direction=LEFT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(3687..4547)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/label=AmpR
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(4548..4652)
/gene="bla"
/label=AmpR promoter
ORIGIN
1 ggaaattgta aacgttaata ttttgttaaa attcgcgtta aatttttgtt aaatcagctc
61 attttttaac caataggccg aaatcggcaa aatcccttat aaatcaaaag aatagaccga
121 gatagggttg agtgttgttc cagtttggaa caagagtcca ctattaaaga acgtggactc
181 caacgtcaaa gggcgaaaaa ccgtctatca gggcgatggc ccactacgtg aaccatcacc
241 ctaatcaagt tttttggggt cgaggtgccg taaagcacta aatcggaacc ctaaagggag
301 cccccgattt agagcttgac ggggaaagcc ggcgaacgtg gcgagaaagg aagggaagaa
361 agcgaaagga gcgggcgcta gggcgctggc aagtgtagcg gtcacgctgc gcgtaaccac
421 cacacccgcc gcgcttaatg cgccgctaca gggcgcgtcg cgccattcgc cattcaggct
481 gcgcaactgt tgggaagggc gatcggtgcg ggcctcttcg ctattacgcc agctggcgaa
541 agggggatgt gctgcaaggc gattaagttg ggtaacgcca gggttttccc agtcacgacg
601 ttgtaaaacg acggccagtg aattgtaata cgactcacta tagggcgaat tgggtaccgg
661 gccccccctc gaggtcgacg gtatcgataa gcttcacgct gccgcaagca ctcagggcgc
721 aagggctgct aaaggaagcg gaacacgtag aaagccagtc cgcagaaacg gtgctgaccc
781 cggatgaatg tcagctactg ggctatctgg acaagggaaa acgcaagcgc aaagagaaag
841 caggtagctt gcagtgggct tacatggcga tagctagact gggcggtttt atggacagca
901 agcgaaccgg aattgccagc tggggcgccc tctggtaagg ttgggaagcc ctgcaaagta
961 aactggatgg ctttcttgcc gccaaggatc tgatggcgca ggggatcaag atctaaccag
1021 gagctattta atggcaacag ttaaccagct ggtacgcaaa ccacgtgctc gcaaagttgc
1081 gaaaagcaac gtgcctgcgc tggaagcatg cccgcaaaaa cgtggcgtat gtactcgtgt
1141 atatactacc actcctaaaa aaccgaactc cgcgctgcgt aaagtatgcc gtgttcgtct
1201 gactaacggt ttcgaagtga cttcctacat cggtggtgaa ggtcacaacc tgcaggagca
1261 ctccgtgatc ctgatccgtg gcggtcgtgt taaagacctc ccgggtgttc gttaccacac
1321 cgtacgtggt gcgcttgact gctccggcgt taaagaccgt aagcaggctc gttccaagta
1381 tggcgtgaag cgtcctaagg cttaatggta gatctgatca agagacagga tgacggtcgt
1441 ttcgcatgct tgaacaagat ggattgcacg caggttctcc ggccgcttgg gtggagaggc
1501 tattcggcta tgactgggca caacagacaa tcggctgctc tgatgccgcc gtgttccggc
1561 tgtcagcgca ggggcgcccg gttctttttg tcaagaccga cctgtccggt gccctgaatg
1621 aactgcagga cgaggcagcg cggctatcgt ggctggccac gacgggcgtt ccttgcgcag
1681 ctgtgctcga cgttgtcact gaagcgggaa gggactggct gctattgggc gaagtgccgg
1741 ggcaggatct cctgtcatct caccttgctc ctgccgagaa agtatccatc atggctgatg
1801 caatgcggcg gctgcatacg cttgatccgg ctacctgccc attcgaccac caagcgaaac
1861 atcgcatcga gcgagcacgt actcggatgg aagccggtct tgtcgatcag gatgatctgg
1921 acgaagagca tcaggggctc gcgccagccg aactgttcgc caggctcaag gcgcgcatgc
1981 ccgacggcga ggatctcgtc gtgacccatg gcgatgcctg cttgccgaat atcatggtgg
2041 aaaatggccg cttttctgga ttcatcgact gtggccggct gggtgtggcg gaccgctatc
2101 aggacatagc gttggctacc cgtgatattg ctgaagagct tggcggcgaa tgggctgacc
2161 gcttcctcgt gctttacggt atcgccgctc ccgattcgca gcgcatcgcc ttctatcgcc
2221 ttcttgacga gttcttctga gcgggactct ggggttcgaa atgaccgacc aagcgacgcc
2281 caacctgcca tcacgagatt tcgattccac cgccgccttc tatgaaaggt tgggcttcgg
2341 aatcgttttc cgggacgccg gctggatgat cctccagcgc ggggatctca tgctggagtt
2401 cttcgcccac cccgggctcg atcccctcgg ggggatccac tagttctaga gcggccgcca
2461 ccgcggtgga gctccagctt ttgttccctt tagtgagggt taattccgag cttggcgtaa
2521 tcatggtcat agctgtttcc tgtgtgaaat tgttatccgc tcacaattcc acacaacata
2581 cgagccggaa gcataaagtg taaagcctgg ggtgcctaat gagtgagcta actcacatta
2641 attgcgttgc gctcactgcc cgctttccag tcgggaaacc tgtcgtgcca gctgcattaa
2701 tgaatcggcc aacgcgcggg gagaggcggt ttgcgtattg ggcgctcttc cgcttcctcg
2761 ctcactgact cgctgcgctc ggtcgttcgg ctgcggcgag cggtatcagc tcactcaaag
2821 gcggtaatac ggttatccac agaatcaggg gataacgcag gaaagaacat gtgagcaaaa
2881 ggccagcaaa aggccaggaa ccgtaaaaag gccgcgttgc tggcgttttt ccataggctc
2941 cgcccccctg acgagcatca caaaaatcga cgctcaagtc agaggtggcg aaacccgaca
3001 ggactataaa gataccaggc gtttccccct ggaagctccc tcgtgcgctc tcctgttccg
3061 accctgccgc ttaccggata cctgtccgcc tttctccctt cgggaagcgt ggcgctttct
3121 catagctcac gctgtaggta tctcagttcg gtgtaggtcg ttcgctccaa gctgggctgt
3181 gtgcacgaac cccccgttca gcccgaccgc tgcgccttat ccggtaacta tcgtcttgag
3241 tccaacccgg taagacacga cttatcgcca ctggcagcag ccactggtaa caggattagc
3301 agagcgaggt atgtaggcgg tgctacagag ttcttgaagt ggtggcctaa ctacggctac
3361 actagaagga cagtatttgg tatctgcgct ctgctgaagc cagttacctt cggaaaaaga
3421 gttggtagct cttgatccgg caaacaaacc accgctggta gcggtggttt ttttgtttgc
3481 aagcagcaga ttacgcgcag aaaaaaagga tctcaagaag atcctttgat cttttctacg
3541 gggtctgacg ctcagtggaa cgaaaactca cgttaaggga ttttggtcat gagattatca
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P0610/pT7-His-Survium人源基因质粒 |
| P1191/pT7-His-Nrf2人源基因质粒 |
| P1192/pT7-His-Smad3人源基因质粒 |
| P1193/pT7-His-FNDC5人源基因质粒 |
| P1194/pT7-His-VEGFA人源基因质粒 |
| P1239/pT7-His-DRD2人源基因质粒 |
| P1240/pT7-His-DRD3人源基因质粒 |
| P1241/pT7-His-pCSK9人源基因质粒 |
| P1242/pT7-His-CD20人源基因质粒 |
| P1243/pT7-His-SGLT1人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
【求助】将报告基因质粒转染到癌细胞中，是否都要共转染一个带有抗性基因的质粒来筛选阳性克隆？
lsdcfhyj 将报告基因质粒转染到癌细胞中，是否都要共转染一个带有抗性基因的质粒来筛选阳性克隆？ 很多文献是这样做的，可是我认为报告基因质粒本身就带有抗生素标记基因，为什么还要共转染另一个抗性质粒？一直对着个问题很困惑，请懂这方面知识的前辈指点指点？还有就是质粒使用量的问题，我不清楚到底质粒用量与转染细胞之间到底是个什么样的比例合适，看了很多操作步骤，有的一个六孔板一孔就要用1到2微克，可是商家产品就有1微克包装的，这样的话，那用量未免
1、质粒的概念 质粒（Plasmid）是一种存在于细菌、酵母等微生物细胞中的小型环状双链 DNA 分子，能够独立于宿主染色体进行自我复制，并通常携带对宿主生存非必需但具有特定功能的基因（如抗生素抗性基因）。质粒是分子生物学和基因工程中最重要的工具之一。 质粒根据其用途可以分为多种不同的类型，如用于保存序列信息的克隆质粒（如：pUC 系列质粒），用于表达蛋白的质粒（如哺乳动物细胞表达所用的 pcDNA3.1 系列质粒），用于基因编辑的质粒（如哺乳动物细胞基因编辑所用的 espCas9-2A
体长4362 bp，它有一个来自大肠杆菌中高拷贝天然质粒的复制起点(ori)，这个复制起点可使pBR322在大肠杆菌中的拷贝数达到20个，因而pBR322载体的DNA很容易从大肠杆菌中提取出来。这是pBR322中的第一个结构特征。 图1 大肠杆菌克隆载体pBR322的物理图谱 此载体中有两个标记基因，一个是氨苄青霉素抗性基因（Apr），另一个是四环素抗性基因（Tcr）。氨苄青霉素和四环素都是人类治疗疾病的抗生素药物。当把pBR322 DNA转化大肠杆菌细胞，其中部分细胞就被该载体
pSK+KanaRpsL抗性基因质粒
￥100 - 1000
