酵母电转感受态细胞制备液厂家价格

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产销*(代"售")酵母电转感受态细胞制备液厂家价格，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：酵母电转感受态细胞制备液厂家价格
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
英文名：Yeast Electro Competent Cell Preparation Kit
本酵母电感受态细胞制备试剂是一种通过化学处理酿酒酵母和裂殖酵母电感受态细胞，使之不但马上能用于电转化，还能长期放置后用于电转化。

产品特点：
1. 操作简单，单溶液制备，除酵母培养的时间外，整个操作只需要10余分钟。
2. 制备得到的感受态细胞可以-80℃保存一年，方便多次使用，免去每次转化都要新鲜制备感受态细胞。
3. 主要用于酿酒酵母S.cerevisia和S.pombe，但能否用于其他酵母(如C.albicans、Pichia pastoris等)不详。
4. 最高转化效率可达到0.2-1×106个转化子/ug质粒DNA。
5. 得到的感受态细胞可以用各种线性或环状酵母穿梭质粒DNA进行转化，例如YIp，YRp，YCp，YEp和YAC等。
6.可以用于酵母双杂交、定点突变、基因破坏、等位突变基因修复等实验。
7. 本试剂盒足够处理200mL酵母菌液，制备40管酵母感受态细胞。

储存条件：常温运输和保存，有效期一年。

自备试剂：
灭菌水，SD液体培养基(不含*基酸的0.67% Bacto Yeast Nitrogen Base，2%葡萄糖)，SD固体培养基(在SD液体培养基中再加2%琼脂)，YPD液体培养基(1% Bacto Yeast Extract，2% Bacto Peptone，2%葡萄糖)，YPD固体培养基(在YPD液体培养基中再加2%琼脂)

使用方法：

一：电感受态细胞的制备
 说明：按本方法制备1 管酵母电感受态细胞就需要OD600达到1.0的新鲜酵母培养液5mL，用户需根据制备的酵母感受态细胞数量决定培养细胞的体积。下面操作只是以10mL酵母为例说明。
1.培养S.pombe细胞：挑取新鲜单菌落(4℃放置不超过3周的也可以)，接种到10mL SD液体培养基中。30℃摇晃培养，摇床速度250rpm/分钟，直到OD600达到1.0左右(相当于1×107细胞/mL)。
2.培养S.cerevisiae细胞：挑取新鲜单菌落(4℃放置不超过3周的也可以)，接种到装在10mL YPD液体培养基中。30℃摇晃培养，摇床速度250rpm/分钟，直到OD600达到1.0左右(相当于1×107细胞/mL)。
3. 冰上放置15分钟。
4.室温1600rpm离心5 min，弃上清。
5. 用冰浴的灭菌水洗涤3次。
6. 用0.2mL冰浴的本产品重悬细胞。
7. 按每管0.1mL分装到1.5-2mL的冷冻管中，直接放入-80℃冰箱待用。
 注意：不能放在液氮中，否则将丧失电转化能力。

二：电转化酵母感受态细胞
1. 将装有0.1mL感受态细胞的冷冻管从冰箱取出的、放置在30℃水浴中快速化冻(快速化冻的效果好于缓慢化冻)。
2. 用1mL冰浴的本产品洗涤一次。
3. 加入50μL冰浴的本产品重悬细胞。
4. 加入1-30 ng质粒DNA 并轻柔混匀。
5.转移到预冷的、距离为0.2cm的电击杯中。
6. 按电击仪的手册设置电击参数并进行电击处理，参考条件为：10kV/cm(对0.2 cm的电击杯，则为2kV)，5ms(25F，200)(各厂家仪器的使用略有不同，请严格按电击仪厂家提供的手册进行操作)。
7.电击后将细胞转移到1mL预冷的本产品中，轻柔混匀。
8. 取0.2mL转化细胞涂盘(S.pombe细胞需涂盘在SD 固体培养基上，S.cerevisiae细胞需涂盘在YPD固体培养基上)，30℃培养4-6天。

除酵母电转感受态细胞制备液厂家价格外，我公司正在打折促销以下产品：
3-[N-(1,1-二甲基-2-羟yi基)]*基-2-羟丙*(代"烷")磺酸*盐 2-Aminopyrimidine 102029-60-7
3-吲哚基-β-D-吡喃葡萄糖苷酸环己*(代"胺")盐 D-Ribose 35804-66-1
β-N-乙酰*基葡萄糖苷酶 Sodium lignosulfonate 9012-33-3
ARB12873 小鼠可溶性血管内皮细胞蛋白C受体(sEPCR)酶联免疫定量检测 Mouse soluble endothelial protein c receptor,sepcr ELISA KIT
ARB11798 人碳酸酐酶2(CA-2)尿液中含量检测 Human carbonic anhydrase 2,ca-2 ELISA KIT
PY02-028  胰蛋白胨水培养基  250克  
ARB10180 人α1微球蛋白/bIkunIn前体(AMBP)Elisa定量检测 Human alpha-1-microglobulin/bikunin precursor,ambp ELISA KIT
F040105 牛血清白蛋白偶联沙丁胺醇 BSA-SAL
ARB12681 大鼠瘦素(LEP)酶标法分析 Rat leptin,lep ELISA KIT
BTN120708 凝血酶 Thrombin
ARB11687 人葡萄糖依赖性胰岛素释放多肽(GIP)检测服务 Human glucose dependent insulin releasing polyPeptide,gip ELISA KIT
F030306 胶体金标记兔抗牛酪蛋白抗体 Rabbit Anti-casein*GOLD
琼脂糖凝胶6FF X-GalNAc
ARB12383 大鼠肺表面活性物质相关蛋白c(SP-c)尿液中含量检测 Rat associated protein c,sp-c ELISA KIT
ARB10178 人α1抗胰糜蛋白酶(AACT)elisa测定使用说明书 Human alpha1 antichymotrypsin,aact ELISA KIT
ARB13139 小鼠前列腺酸性磷酸酶(PAP)免费代测 Mouse prostatic acid phosphatase,pap ELISA KIT
ARB13503 鸡碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)elisa检测 Chicken basic fibroblast growth factor,bfgf ELISA KIT
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·一站式DNA非变性PAGE电泳套装
编号：BTN100205
英文名称：One-Stop DNA Native PAGE Pack
规格：30次
本品就是专门用于非变性PAGE的试剂。非变性PAGE电泳是研究SSCP-PCR(single-strand conformation polymorphism-PCR、单链PCR片段构象多态性)和凝胶滞阻(Gel Shift)的重要研究手段，因为在非变性PAGE中，DNA的迁移率除跟长短相关外，还跟其构象和结合的蛋白质相关。

产品特点：
1.一站式，用户只需要准备水和样品，十分方便。
2. 安全，免去了实验人员接触粉末状的剧毒物品丙*(代"烯")酰胺。
3. 灵活，高浓度的丙*(代"烯")酰胺溶液可用于配制各种浓度的PAGE胶，分开提供的丙*(代"烯")酰胺和甲叉双丙*(代"烯")酰胺可用于配制各种交联度的PAGE胶。
4. PAGE电泳后可直接用于银染等后续试验。

产品组成：

 

成分	规格	保存
丙*(代"烯")酰胺	60g	室温
甲叉双丙*(代"烯")酰胺	2g	室温
TEMED	1.5ml	4℃，避光
过硫*(代"酸")铵(干粉)	1g	室温
非变性PAGE上样液，2×	1ml	4℃
10×TBE(BTN90313)	250ml	室温
说明书	1份

储存条件：常温运输，保存条件见上表，有效期一年。

使用方法：
用于SSCP-PCR分析的非变性PAGE电泳(其他应用请相应修改参数)

一、PAGE浓度的选择：最好使用浓度为5-12%的丙*(代"烯")酰胺胶，因为SSCP-PCR的扩增长度一般在150-200bp之间，而5%的PAGE的有效分辨范围为80-500bp、8%的PAGE的有效分辨范围为60-400bp、12%的PAGE的有效分辨范围为40-200bp。

二、PAGE交联度的选择：交联度越低，孔径越大，对DNA分子构象的变化越灵敏，SSCP分辨率越高，但过低则胶太软，不好进行电泳后的后续操作，所以一般选择1-2%的交联度(即丙*(代"烯")酰胺：甲叉双丙*(代"烯")酰胺在49:1到48:2之间)。

三、体积的选择：SSCP-PCR检测需要长约30-40cm的测序胶板，可以结合梳子的厚度，计算胶的体积。
操作：
1. 配制PAGE胶(这是配制100mL胶的用量，配制更大体积的胶则需以此用量为基础按比例增加)
A：新鲜配制10%的APS(过硫*(代"酸")铵)：按每0.1克过硫*(代"酸")铵干粉加1mL超纯水的比例将水加到装有硫*(代"酸")铵干粉的1.5mL EP管中，摇晃到粉末全部溶解。配制好的10%的APS溶液可以在4℃存放一周。
B：新鲜配制适当交联度29:1的30%的丙*(代"烯")酰胺-甲叉双丙*(代"烯")酰胺溶液(AB溶液，下同)：在本产品提供的装有60 g丙*(代"烯")酰胺干粉的塑料瓶中加入146mL自备的去离子水和全部的甲叉双丙*(代"烯")酰胺，充分摇晃直到溶解(约需10-20分钟)，即得到30%的AB(29:1)溶液。此溶液最好在一个月内用完，必须4℃避光保存。
C：配SSCP PAGE胶：在一个250mL的三角瓶中，先按下表的用量加入去离子水、30% AB溶液溶液和10×TBE缓冲液。丙*(代"烯")酰胺单体溶液具有神经毒性，一定要戴手套操作。

PAGE胶浓度	各成分用量(单位：ml)			总体积(ml)
	去离子水	30%AB溶液	10×TBE缓冲液
5%	73.4	16.6	10.0	100
6%	70.0	20.0	10.0	100
7%	66.7	23.3	10.0	100
8%	63.3	26.7	10.0	100
9%	60.0	30.0	10.0	100
10%	56.7	33.3	10.0	100
11%	53.3	36.7	10.0	100
12%	50.0	40.0	10.0	100

注：有大量文献报道PAGE胶中加入5%-10%的甘油能提高某些位点的分辨率。如果选择加入10%的甘油，则减少去离子水的用量10mL，同时加入10mL甘油。
D：摇晃混匀。最好能抽真空10-15分钟以去除溶液中的氧气(氧气能抑制丙*(代"烯")酰胺聚合反应)，无条件也可以不脱氧。
E：加入500μL 10%APS和100μL TEMED，迅速摇匀后倒胶。
F:在胶的液面距离达到顶部时停止灌胶，插入梳子。
G:室温聚合30-60分钟(低温抑制聚合反应)。
H: 拔出梳子，用1×TEB液冲洗加样孔。
I: 放4℃冰箱预冷30分钟-12小时。为了防止胶收缩，最好顶部加少量1×TBE缓冲液。预冷的胶有利于保持单链DNA的构型。
2. 将预冷的凝胶板固定在电泳装置上，往上槽和下槽中加入足够1×TEB电泳液。
3. 取3-5μl SSCP-PCR样品，加入等体积2×非变性PAGE上样液，85℃处理5分钟后冰浴。用前短暂离心后取2μl上样。
4.连接电源线，打开电源开关。如果PAGE中不含甘油，则使用25W的功率，电泳5-7小时(对3—40cm长的PAGE胶而言)。如果使用含甘油的PAGE，则使用8W的功率，电泳16-18小时。由于温度变化过大会改变DNA构型，所以电泳时最好能保持恒温。对不含甘油的PAGE，最好恒温在4℃、对含甘油的PAGE，最好恒温在25℃。
5. 终止电泳，取出凝胶进行后续的处理(如银染)。

疑难解答：
一、为何SSCP-PCR带型有复合条带？
原因之一：可能是残留的PCR引物跟单链的DNA结合形成迁移率不同的条带。解决方法是稀释PCR或电泳前将PCR产物进行纯化。
原因之二：可能是PCR产物用量过高，彼此复性。解决办法是将PCR产物稀释后4-8倍后使用。
二、如何提高电泳分辨率？
可以在配胶时加入甘油(终浓度为5%-10%)，因为甘油是弱变性剂，能部分展开DNA折叠结构，增加表面积，增加电泳时位移差异。但加入甘油后粘性变大，电泳速度变慢，因此只适合室温电泳使用，不要4℃电泳。如果条件允许，最好同时做加甘油和不加甘油的电泳实验。


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·一站式miRNA尿素-PAGE电泳套装
编号：BTN70606
英文名称：One-Stop miRNA Urea-PAGE Pack
规格：30次
尿素-聚丙*(代"烯")酰胺凝胶电泳(Urea PAGE)是目前分离200nt以下的小片段RNA，尤其是20nt左右的microRNA(miRNA)分子的主要方法，但是单独配制各种溶液十分繁琐，为此我们公司开发了本产品。

产品特点：
1.一站式，含有电泳所需要的所有试剂，即开即用，十分方便，免去了实验人员称取有毒物品。
2. 灵活，可以根据需要配制各种浓度的Urea-PAGE，以便对长度各异的RNA进行电泳。
3.电泳后可直接用于UV观察、银染、胶回收、Northern杂交和放射自显影等。
4. 使用新型缓冲液，可以防止甘油的干扰。

产品组成：

成分	规格
尿素	210g
丙*(代"烯")酰胺	60g
甲叉双丙*(代"烯")酰胺	3g
TBE电泳液，10×	250ml
TEMED	1.5ml
过硫*(代"酸")铵(干粉)	1g
miRNAload	10ml
miRNA Marker	30次
固相RNase清除剂	100ml
说明书	1份

储存条件：常温运输、4℃保存(miRNAload、miRNA Marker需要-20℃保存)。保存期为一年。

使用方法：

一、准备工作
1. 用固相RNase清除剂清洁工作的台面和器皿(详见该产品的使用手册)。
2. 配制1 X电泳缓冲液：将适量的10X电泳缓冲液用RNase-free水稀释10倍，得到1X电泳缓冲液待用。
3. 配制10%过硫*(代"酸")铵溶液：精确称取约100mg过硫*(代"酸")铵到一干净的1.5mL离心管中，按每1mg过硫*(代"酸")铵加10μl RNase-free水的比例加入RNase-free水，摇晃致溶，立即使用。注意：放置时间不要超过一周。

二、配制凝胶
1. 估计所需要的凝胶溶液的体积，一般配制一块13cm×15cm×0.8mm的胶需要15mL凝胶溶液，配制一块36cm×45cm×0.8 mm的胶需要120mL凝胶溶液。
2. 根据所需要的凝胶溶液的体积，在一的干净的三角瓶中按下表加入各成分(此处以配制100mL浓度为15%的凝胶为例):

成分	终浓度	用量
尿素	7M	42g
40% Acrylamide/Bis溶液	15%	37.5mL
10×电泳缓冲液	1×	10ml
补RNase-free水到100mL

注：Acrylamide/Bis的终浓度需要根据待分离RNA长度选择(见下表)。
 

需分离的RNA长度范围	Acrylamide/Bis工作浓度
6-100nt	20%
25-150nt	15%
40-200nt	12%
60-400nt	8%
80-500nt	5%
1000-2000nt	3.5%

3. 搅拌并加热到40-50℃左右，直到尿素完全溶解。
4. 冷却到室温后，将三角瓶接上真空系统抽真空处理10-15分钟以充分去除溶液中的氧气(氧气会降低聚合反应效率)。但如果实验条件有限，此步也可以省略。
5. 边摇晃溶液变加入50μl TEMED和500μl 10%过硫*(代"酸")铵。注意：即使选择其他工作浓度的Acrylamide/Bis，TEMED和10%过硫*(代"酸")铵的用量也不需要随之改变。但如果配置的凝胶溶液的体积变化，TEMED和10%过硫*(代"酸")铵的用量也要按比例改变。
6. 再充分摇晃约30秒后迅速灌胶，然后插入样品梳。
7.室温放置30-60分钟使胶凝固。
8. 将凝胶板放置在电泳装置上后，在上下层分别加入适当量的1×电泳缓冲液。如果不马上使用，需要有湿纸将上样孔端盖住以防凝胶过度干燥。
9. 拔出梳子后用加样枪吸取电泳缓冲液，充分将每个加样空中未聚合的Acrylamide/Bis、尿素和气泡吹打出来。

三、电泳
1.在上样前，预电泳 20-30分钟以使多余的过硫*(代"酸")铵跑出加样空，同时还可以使凝胶的温度升高(到 50℃左右)，有利于RNA电泳时维持在变性状态。预电泳电流见下面第 5 条。
2. 将miRNA样品与等体积的miRNAload 混合，70℃保温 2-3分钟后迅速放置在冰上冷却，快速离心半分钟，放冰上待用。
3. 关电泳仪后开始上样。注意：每次上样后如果不更换枪头，则需要充分吹打洗净枪头以防样品的交叉污染。
4. 同时上样 miRNA Marker。
5. 重开电泳仪，对 13cm×15 cm的胶，以20-30mA的电流电泳，直到红色染料移动到凝胶边缘为止；对 36cm×45cm的胶，则以50-60mA的电流电泳，直到红色染料移动到凝胶边缘为止。

四、后续处理
1.染色观察：将凝胶一面的玻璃板揭开，直接用仍然附着在另一玻璃板上的凝胶进行各种染色，包括银染(固定、漂洗、显影和定影等步骤)、EB(每100mL 1×TBE中加 20μL 10mg/mL的EB溶液)、我们公司低毒核酸染料 DNAgreen(每100mL 1×TBE中加10μL DNAgreen 原液)。UV下观察并拍照。
2. miRNA回收：按上法用EB等染料染色后，UV下确定所需要的miRNA条带的位置，切胶后进行胶回收处理。
3. Northern杂交：按上法用EB等染料染色后，UV下确定所需要的miRNA条带的位置，切胶后电转移到带正电的尼龙膜上，然后进行杂交处理。
4. 放射自显影：如果miRNA样品电泳前经过同位素标记，则将凝胶一面的玻璃板揭开，用滤纸将附着在另一玻璃板上的凝胶吸附过来，然后包上保鲜膜，真空抽干，然后使胶跟X光片向对置进行放射自显影。

北京百莱博科技有限公司专业生产供应销*(代"售")生物试剂、化学试剂、抗原抗体、血清血浆、Elisa试剂盒，更多试剂产品需求，欢迎来电咨询选购酵母电转感受态细胞制备液厂家价格。