一站式TA克隆试剂盒(含感受态细胞)厂家

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产销*(代"售")一站式TA克隆试剂盒(含感受态细胞)厂家，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：一站式TA克隆试剂盒(含感受态细胞)厂家
编号：BTN90801B
品牌：百奥莱博
英文名：One-Stop TA Cloning Kit(B)
规格：20次
TA克隆就是利用T载体两个3´端各带有一个T突出，而PCR扩增产物两个3´端各带有一个A突出的特点，在DNA连接酶的作用下，将PCR产物克隆到T载体中的过程，它是克隆PCR扩增产物的主要手段。

产品特点：
1.一站式，用户只需要准备PCR产物即可进行TA克隆。
2. T载体由Xcm I酶切方法制备，两个5´端100%含T突出，自连率几乎为零。
3. 克隆效率高，一次TA克隆实验一般能得到上百个重组子。
4. 阳性率高，一般能到90%以上，大大缩短了筛选工作。
5. 提供供两次实验用的对照插入片段，方便分析实验数据。
6. 插入位点两侧有对称的常见酶切位点(如EcoR I)，便于对克隆的PCR片段进行近一步的分析。
7. 克隆位点两侧分别有T3和T7 RNA聚合酶启动子，便于用克隆的PCR片段制备RNA探针。
8.可以使用pUC/M13 Forward和Reverse测序引物测定插入片段的序列。
9. T克隆位点位于β-半乳糖苷酶的α-肽编码区内，可以进行蓝白斑筛选。
10.含有丝状噬菌体f1 复制起始子，可以制备单链DNA。

成分	规格
即用型蓝白T载体(50ng/μL)	20μl
对照插入片段(50ng/μL)	5μl
T4快速连接缓冲液，2×	100μl
T4 DNA连接酶(5U/μL)	30μl
超纯水	1ml
高效感受态细胞	100μL×10只(只B型有)
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。感受态细胞需要干冰运输，-70℃保存，有效期6个月。

自备试剂：插入片段。

使用方法：

一：PCR产物的纯化和定量注意事项
1. 由于PCR体系中有大量会抑制DNA连接反应的dATP、还有一些可能在电泳胶上不一定会显示出来的非特异性扩增产物和引物二聚体，所以PCR产物必须用胶回收方法制备才能用于本试剂盒的连接。可以分别使用本公司柱式DNArc(BTN60202)和PAGE DNArc(包括柱式PAGE DNArc)从琼脂糖胶和PAGE胶上纯化回收PCR片段。具体操作见相关产品使用手册。
2. 琼脂糖胶回收的电泳缓冲液最好不要使用TBE缓冲液，因为它会影响DNA的胶回收效率。
3. 为避免UV对DNA的伤害，切胶最好在日光下进行(使用百奥莱博的绿如蓝染料的话，可以直接在黑色背景下看见DNA条带，不需要紫外光)。如果使用EB或其他染料，必须在紫外下切胶时，最好选择长波(360nm)紫外灯并以最快速度切胶，文献报道短波UV(300nm和240nm)会使DNA连接效率降低400多倍。使用短波UV时，可以使用百奥莱博的DNA防护剂UV Scavenger(BTN60601)减少伤害。
4. PCR片段的体积越小越便于后续操作。洗脱PCR片段时，用最少量的洗脱液洗脱。
 本试剂盒要求PCR回收片段的浓度最好为50ng/μL。如果浓度不够，最好用醇沉淀法沉淀后直接在管内设置连接反应，也可以使用本公司的核酸浓缩剂(BTN110801)直接浓缩。
5. 为准确定量回收的PCR产物同时又节约样品，最好使用微量分光光度计(只需用1μL样品测量)。如果分光光度计需要大量样品，建议使用电泳法定量：将回收的PCR片段与浓度已知的DNA Marker在含EB或绿如蓝染料的琼脂糖凝胶中电泳，通过比较DNA条带的相对荧光强度而估测PCR产物的浓度。

二：连接反应
1. 短暂离心装有蓝白T载体、连接缓冲液和T4连接酶的离心管。
2.在三个离心管中加入下列成分(注意，对照可以不做，在出现问题时再做)：

成份	样品管	阳性对照管	自连对照管
T4快速连接缓冲液，2×	5μl	5μl	5μl
蓝白T载体(50 ng/μL)(=0.03 pmol/μL)	1μl	1μl	1μl
自备PCR 纯化产物(0.03-0.1 pmol/μL)	Xμl(见注)	不加	不加
对照插入片段(50ng/μL)(=0.06 pmol/μL)	不加	1.5μl	不加
T4 DNA连接酶(5U/μL)	1-1.5μL	1-1.5μL	1-1.5μL
超纯水	补到10μL	补到10μL	补到10μL

注: 如何根据T载体的用量计算PCR纯化片段的最佳用量？
第一：确定插入片段与载体的最佳摩尔比，在本产品的T载体的长度固定(3Kb)时，最佳摩尔比跟插入片段的长度关系如下：

插入片段长度	与载体的摩尔比
1Kb以下	2:1或3:1
跟T载体接近(±1Kb)	1:1
比T载体长1Kb或更多	1:2或1:3

第二：根据选定的最佳摩尔比按下面方程式计算用量：

本产品提供的T载体长度为3 Kb，推荐用量为50ng，如果PCR片段长度为0.5 Kb，最佳摩尔比设定为3:1，则其用量为:

3. 用移液器吹打连接反应液使之混匀，然后放置在16℃孵育30分钟-过夜。
4. 65℃5分钟灭活连接酶后直接用于转化或-20℃保存。

三：细菌转化及筛选(仅供参考，本产品不提供相关试剂)
1. 将100μl转化效率在1×108 cfu/μg以上的感受态细胞于冰上解冻。
2. 取5-10μl连接产物加入到感受态细胞中，轻轻旋转几次以混匀内容物。
3.在冰上放置30分钟。
4. 将离心管放42℃热休克90秒，然后快速将其转移到冰浴中放置1～2分钟。
5. 每管中加900μl LB培养基，37℃振荡培养1小时复苏细胞。
6. 将100μL复苏涂布到含Amp的LB琼脂平板上(也可加上X-gal和IPTG)。
7.室温4,000rpm离心剩余的900μl复苏细胞5分钟，弃去800μl上清，用剩余100μL培养基重悬细胞并涂布到含Amp的LB琼脂平板上(可加X-gal、IPTG)。
8. 将平板置于室温直至液体被吸收。此步非常重要，否则培养板将在37℃排除水分，细菌将随水在培养基上到处游动，不能形成单个菌落。
9. 倒置平皿，于37℃培养，12～16小时后可出现菌落。一般情况下阳性对照组总共会有上千个菌落(100μl转化液产生的菌落数×10)，自联对照只有少数几个菌落，样品组的菌落数取决于PCR回收片段的质量。
10. 按常规方法筛选重组子。

MCS位点：


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·Karnovsky固定液
编号：BTN131226
英文名称：Karvovsky Fixative Solution
规格：250mL
Karnovsky固定液是组织化学中最常用的混合型固定液之一，主要成分含能快速渗透的多聚甲醛和缓慢渗透的戊二醛。它能很好保存组织的抗原性和精细结构，故尤其适用于电镜免疫化学样品的固定。本产品是在Karnovsky原始配方的基础上修改而得。

产品特点：
1．既可用于灌注法固定，也可用于浸泡法固定。
2．渗透能力强，固定均匀，组织收缩小，染色效果好。
3．适用范围广，可以用于固定从细菌、真菌，植物到动物的各种生物材料。
4．对原始配方进行了改良，不使用有毒的含砷化合物，减少了对操作者的毒害。
5．固定的组织经过包埋切片等处理用既可用于光学显微镜检测，也可用于电子显微镜检测。

储存条件：低温运输、4℃保存，保存期为1年。

使用方法：
1．对动物，最好先灌注固定，然后再浸泡固定10-30分钟。对植物、真菌、细菌、病毒、原虫等材料，直接采用浸泡法固定。浸泡在Karnovsky 固定液中的材料可以在4℃放置5年。
2．固定后的组织洗涤后即可用于包埋、切片、染色、检测等后续操作。


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·一步式细菌DNA提取试剂盒
编号：BTN60806
英文名称：One-step Bacteria DNA extraction kit
规格：50次
本试剂盒是在一步裂解式超快细菌基因组DNA提取试剂，其最大特点是快速，可以用于绝大多数革氏阳性和阴性细菌基因组DNA的快速提取。

试剂盒特点：
1. 操作简单，整个过程不到10分钟(对一个样品而言)。
2.产率一般在3-10μg/mL过液培养细菌。
3. OD260/280一般在1.8以上。
4. DNA片段长度一般在40-50 Kb左右。
5.适用范围广，可以使用于绝大多数细菌。
6. 也可以使用过夜培养细菌和菌落。
7. 得到的DNA可以直接用于PCR，酶切或其他分子生物学实验。

试剂盒组成：

成分	规格
溶菌酶	600mg
一步式细菌裂解液	25ml
专用上柱液	50ml
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
DNA洗脱液	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输及保存(溶菌酶需要冰袋运输，-20℃保存)，有效期一年。

使用方法：

一: 对革氏阴性细菌
1. 如果一步式裂解液产生沉淀，需要65℃预热直到沉淀溶解，摇匀待用。
2. 将0.1-1.5mL过夜培养的菌液转移到1.5mL塑料离心中，室温12000rpm离心1分钟沉淀细菌，弃上清。
3. 加入0.5mL一步式细菌裂解液到离心管中，吹打混匀。
4. 加入0.5mL专用上柱液到裂解液中，颠倒混匀后全部转移到离心吸附柱中，室温放置至少2分钟。
5. 12000rpm室温离心1分钟，DNA将吸附在离心吸附柱的膜上，倒弃收集管中的穿透液。
6. 将0.5mL通用洗柱液加入离心柱中，12000rpm室温离心1分钟，弃穿透液。
7. 重复第6步操作一次。
8. 空甩半分钟，将离心吸附柱转移到新的离心管中。
9. 加50-100μL DNA洗脱液，室温放置3～5分钟。
10. 12000rpm室温离心1分钟即得DNA溶液。

二: 对革氏阳性细菌
1. 将0.1-1.5mL过夜培养的细菌离心1分钟后，重悬于0.6mL溶菌液中(60mL自备超纯水+600mg溶菌酶)，颠倒混匀5-10次后37℃保温30分钟(有的菌种可能需更长时间，需要自己根据细菌不同而决定)。
2. 12000rpm离心10分钟，小心弃上清。
3.后续处理接革氏阳性细菌处理的第3步。


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·蛋白酶K溶液
编号：BTN80911
英文名称：Proteinase K Solution
规格：5mL
本产品是浓度为10mg/mL的蛋白酶K溶液，可以直接加入到各种溶液中降解其中的蛋白质。可以用于核酸纯化、原位杂交、DNA脉冲电泳和蛋白指纹图谱分析等实验。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

·镍柱介质(镍-琼脂糖凝胶)
编号：BTN100101
英文名称：Ni-Agarose Resin
规格：2mL
本产品就是专门用于纯化带有His标记的蛋白质实验。基于His-Ni亲和层析的蛋白质纯化方法是目前分离纯化重组表达蛋白质的重要方法，其原理是用基因重组的方法使待纯化蛋白的N 端或C 端携带一段His序列(一般是6个His)，然后利用偶联了Ni离子的琼脂糖与His的亲和作用而将His-标记蛋白与其他蛋白质分开，与Ni-琼脂糖结合的蛋白最后用咪唑溶液洗脱即可。Ni-琼脂糖中的Ni与蛋白质中His 结合示意图如下：


产品特点：
1．即开即用，非常方便。
2．介质为交联的琼脂糖，可以反复使用。
3．Ni偶联牢固，含有5个Ni 螯合位点，Ni密度达到20-40μmol/mL。
4．结合量大，每mL介质可以结合20-30mg的蛋白质。
5．专一性强，一次过柱即可获得纯度高达95%的His-标记蛋白。
6．有效pH范围广，在pH3-10之间均可使用。

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

相关参数：

特点	基团密度高,载量大,分辨率高,使用方便
基质	6%的交联琼脂糖凝胶
配体	Ni2+
配体密度	20-40 umol/ml
吸附载量	20-30mg蛋白/ml
介质颗粒大小	45～165um
最大流速	300cm/h
PH范围	3～10，在位清洗时pH范围可到2～11
保存温度	2～8℃
保存液体	20%乙醇

北京百莱博科技有限公司专业生产供应销*(代"售")生物试剂、化学试剂、抗原抗体、血清血浆、Elisa试剂盒，更多试剂产品需求，欢迎来电咨询选购一站式TA克隆试剂盒(含感受态细胞)厂家。