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- 详细信息
- 技术资料
- 保存条件:
-20℃
- 保质期:
长期
- 英文名:
Seamless Assembly and Cloning kit
- 库存:
657
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 规格:
10次
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域,致力于为客户提供包括北京现货无缝连接克隆试剂盒优惠在内的一系列分子生物学试剂产品,并提供一系列相关的技术服务。
名称:北京现货无缝连接克隆试剂盒优惠
产地:国产|进口
规格:10次
编号:ALH338
本试剂盒不依赖于T4连接酶,不受载体和目的片段的酶切位点限制,而直接用同源重组的方法,采用特殊的重组酶可以将任意方法线性化后的载体和与其两端具有 15-25bp 重叠区域的PCR片段定向重组,可以快速实现 1-5 个片段的高效无缝克隆。
试剂盒特点:
1.30分钟可以将一个或者多个长、短PCR扩增片段(平端、A端均可)插入载体。
2.不受载体和插入片段酶切位点的可用性和平端/粘性末端的限制,可以在任意位点进行克隆。
3.无缝克隆,插入点不会引入不需要的碱基序列。
4.高效、准确,阳性率>95% 。
储存条件:-20℃。
本品别名:无缝连接克隆试剂盒|通用型连接克隆试剂盒
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·酵母基因组DNA大量提取试剂盒
编号:ALH156
英文名称:Yeast DNA Massive Extraction Kit
规格:10次
本试剂盒用于快速的从酵母中大量提取基因组DNA。在针对酵母细胞特点配制的酵母裂解液作用下, 酵母细胞被裂解释放出基因组DNA,然后蛋白沉淀液选择性沉淀去除蛋白,最后纯净的基因组DNA通过异丙醇沉淀并重溶解于DNA溶解液。
试剂盒组份:
酵母裂解液——————100ml×2
蛋白沉淀液——————70ml
DNA溶解液 ——————30ml
产品特点:
1.不需要使用有毒的苯酚、氯*(代"仿")等试剂。
2.快速,简捷,整个过程可在1个小时内完成。
3.结果稳定,产量高(比离心柱型的产量高一倍以上),OD260/OD280典型的比值达1.7~1.9,长度可达50Kb-150kb,可直接用于PCR,Southern-blot和各种酶切反应以及文库构建。
操作步骤:
1. 吸取60ml-70ml 酵母培养物到一个100ml 离心管;2,500 x g 离心2 分钟,尽可能弃上清,必要时候可以用枪吸去。
2. 高速涡旋振荡,打散重悬酵母细胞团。
3. 加入20 ml 酵母裂解液,涡旋振荡混匀,或者用1 毫升的枪头反复吹打混匀。酵母细胞的重悬分散对下一步裂解非常重要,必须充分分散重悬。
4. 将裂解物放置在70℃水浴15-30 分钟。
如果产量低,可以适当提高水浴温度和延长水浴时间,中间可以涡旋振荡混匀几次帮助裂解。
5. 冰上至少5 分钟使回复到室温。
6. 在回复到室温的裂解物内加入6.8 ml 蛋白沉淀液后,在涡旋振荡器上高速连续振荡混匀25 秒。混匀后可能见到一些小的蛋白团块。冰浴5 分钟。
7. 2,500 x g(可根据需要调整加大离心力)离心5 分钟。这时应该可以见到管底蛋白沉淀,也可能见到一些蛋白沉淀漂浮在液体表面。
8. 小心缓慢吸取上清到一个新的100ml 离心管中,不要吸到沉淀。吸取上清时,注意不要吸到管底的和漂浮在液体表面的蛋白沉淀。如果不小心将蛋白沉淀转入新的离心管中,可再次离心2 分钟后取上清。
9. 加入等体积的室温异丙醇,颠倒30 次混匀或者直到出现絮状DNA 沉淀(或者白色浑浊沉淀)。
10. 2,500 x g 离心5 分钟(可根据需要调整加大离心力),在管底可以见到白色的DNA沉淀块,倒弃上清。
11. 加入20ml 70%乙醇,颠倒几次漂洗DNA 沉淀,2,500 x g 离心2 分钟, 倒去上清(注意不要把DNA 沉淀倒掉了),倒置后在吸水纸上轻敲几下以控干残留乙醇,还可以用枪头小心吸掉管底沉淀周围和管壁的残留乙醇,空气晾干沉淀几分钟。注意不要干燥过头,否则DNA极其难溶;也不能残留太多乙醇,否则乙醇可能抑制下游如酶切反应。
12. 加入1-3ml DNA 溶解液重新水化溶解DNA 沉淀,轻弹管壁混匀,可以放置在65℃温育30-60 分钟(不要超过一小时),也可以在室温或者4℃放置过夜来重新水化DNA。期间不时的轻弹管壁帮助重新水化DNA。
13. 加入0.5-1ml RNase A(10mg/ml),颠倒混匀,37℃温育30-60 分钟去除残留RNA。该步骤主要作用为去除残留的RNA,如果残留RNA多,可以适当延长时间或者增加RNase A 用量。如果残留RNA 不影响实验,可略去该步骤。如果残留的RNA酶可能影响实验,也可以用等体积酚/氯*(代"仿")抽提去除,然后用标准的乙醇沉淀回收DNA。
14. DNA 可以存放在2-8℃,如果要长时间存放,可以放置在-20℃。
储存条件:室温,有效期12个月。
北京现货无缝连接克隆试剂盒优惠关键词:无缝连接克隆试剂盒,通用型连接克隆试剂盒
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北京现货无缝连接克隆试剂盒优惠关键词:无缝连接克隆试剂盒,通用型连接克隆试剂盒
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