北京现货T7 RNA聚合酶折扣价

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名称：T7 RNA聚合酶
产地：国产|进口
英文名：T7 RNA Polymerase
编号：BTN120310
规格：1000U
T7 RNA聚合酶是一种高度特异识别T7启动子序列的DNA依赖的5´→3´RNA聚合酶，它可以催化单链或双链DNA T7启动子下游NTP的掺入，合成与T7启动子下游的模板DNA互补的RNA。

产品特点：
1．对于T7启动子有高度的特异性，用于体外RNA(含小RNA)的合成。
2．能识别修饰的NTP(生物素标记、地高*(代"辛")标记、荧光素标记的NTP)，可用于标记探针。
3．所得RNA可用于下列后续实验：核酸杂交、基因组DNA序列分析、核糖核酸酶保护测定、反义RNA合成，体外翻译，RNA剪接、RNA二级结构分析、RNA-蛋白质相互作用、核酸扩增、siRNA、miRNA等小RNA。

产品组成：

 

成分	规格
T7 RNA聚合酶(20U/μL)	50μl
5×反应缓冲液	250μl
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

一、制备DNA模板(本试剂盒不含所需试剂，此处信息仅供参考)
PCR片段和质粒DNA都可以用作体外转录的模板，但是必须注意以下几点。
⑴必须使用线性化的DNA。如果是质粒DNA，则必须先用适当的限制性内切酶切成线状。
⑵ 需要转录的DNA序列的上游必须有T7启动子。如果模板是PCR产物，则可以在设计引物时将T7启动子序列(5´TAA TAC GAC TCA CTA TAG GG 3´)加上。如果是将DNA片段克隆到载体上，则需要选择有T7启动子的载体，并且克隆位点必须位于T7启动子下游。
⑶ 需要转录的DNA序列的下游端最好不要是3´突出。如果是3´突出(比如选择了Pst I来线性化质粒)，则最好用T4 DNA聚合酶修平。
⑷必须保证DNA模板中没有RNase。由于提取质粒DNA的过程中一般要使用大量的RNase A，因此质粒DNA一般都有严重的RNase A污染，所以在用作模板前，最好采取胶回收得方法回收质粒DNA。并且加入少量总RNA一起保温，然后电泳检测RNA是否被降解，以此来判断纯化的DNA模板是否有残留RNase A。

二、体外转录反应(本试剂盒不含除酶和反应液之外的相关试剂)
1．在一个RNase-free的塑料离心管中，在室温下(不是在4℃下)按次序加入下列成分：

成分	加入量	备注
DNA模板		如果使用质粒DNA,必须反复酚-*仿抽提去除残留的RNase,然后再乙醇沉淀质粒DNA
PCR片段	50ng左右
质粒DNA	1μg左右
RNase抑制剂
5×反应缓冲液	4μl	需室温时使用
NTP(2.5mM each)	4μl
T7 RNA聚合酶	0.5-1μL
RNase-free水	补水到20μL

注：此为20μL反应体系的用量，对其他反应体系，各成分的用量可以按比例增减。如果需要标记RNA探针，则需要订购NTP分开的试剂盒。如果需要得到加帽RNA，则需要加入自备的加帽修饰核苷酸。
2．37℃保温1-2小时。
 注意：延长保温时间并不能提高产量。
3．70℃加热10分钟灭活T7 RNA聚合酶。
4．取1-3μL电泳检测转录效果。一般1μg DNA可以合成5-10μg的RNA。
5．得到的RNA可以放-80℃保存。

三、如果需要去除DNA模板(仅产品不提供所需试剂)
1．在体外转录体系中加入1μL自备的RNase-free DNase(3-5U/μL)。
2．37℃保温15-30分钟。
3．补水到100μL。
4．用自备的等体积(100μL)的Tris饱和酚-*仿抽提一次去除残留的DNase和RNA聚合酶。
5．加200μL微量核酸沉淀剂(用前需要摇晃混匀)，振荡后15000rpm离心3～5分钟，弃上清。
6．加入1mL 75%乙醇，震荡10秒后15000rpm离心3～5分钟，弃上清。
7．短暂离心数秒，用枪头吸弃上清。晾干，所得沉淀即体外转录所得的RNA。可溶于RNase-free水中后立即使用或放-80℃长期保存。
关键词：T7 RNA聚合酶,BTN120310,T7 RNA Polymerase


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编号	名称
BTN70804	一步法单菌落质粒DNA提取试剂盒
BTN70102C	蛋白marker(43～200kD)
BTN130813	DNA磷酸化试剂盒
BTN131190	糖原溶液(10mg/mL)(分子生物学级)
BTN60304	真菌DNA提取试剂盒
BTN120683	羧苄青霉素*溶液
BTN51208C	dNTP溶液(100mM)
BTN100602	LB培养基
BTN80915A	超级杂交液(不含甲酰胺)
BTN90503	电泳级甘油
BTN70302	一步离心式石蜡清除剂
BTN120690	红霉素溶液
BTN131180	通用酶缓冲液
BTN131208	DNA探针变性液
BTN130430	大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ
BTN140387	酿酒酵母EGY48化学感受态细胞
BTN131087	AP标记亲和素
BTN100905	8M盐*(代"酸")胍溶液(RNase-Free)
BTN100937	phi29 DNA聚合酶
BTN130875	葡激酶
BTN70401	软骨RNA提取试剂盒
BTN121002	绿如蓝核酸染料(可见光型)
BTN120420	核酸外切酶III
BTN130902	酵母产孢培养基
BTN90602D	DNA marker(λDNA/EcoR I)
BTN91102	柱式骨骼DNA提取试剂盒
BTN100102B	His标记蛋白质微量纯化套装(含核酸酶和溶菌酶)
BTN101106	沉淀型TMB显色试剂盒
BTN131196	Therminator II DNA聚合酶
BTN60906	cDNA第一链合成试剂盒(逆转录试剂盒)(RT试剂盒)
BTN80101	一管式病毒DNA-RNA提取试剂盒
BTN120520	大肠杆菌OrigamiB(DE3)化学感受态细胞
BTN131036	5´末端同位素标记试剂盒
BTN130803	单细胞裂解液(DNA提取)
BTN140645	大肠杆菌TB1感受态细胞
BTN100307C	酸洗玻璃珠(400μm)
BTN131141	dNTP和引物清除剂
BTN120601	革兰氏阳性菌质粒DNA提取试剂盒