SuperTOPO-Kan通用克隆试剂盒说明书

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产销*(代"售")SuperTOPO-Kan通用克隆试剂盒说明书，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：SuperTOPO-Kan通用克隆试剂盒说明书
品牌：百奥莱博
英文名：SuperTOPO Cloning Kit
规格：25次
产地：国产|进口

想要了解更多关于SuperTOPO-Kan通用克隆试剂盒说明书的价格、品牌、厂家、说明书、促销信息，请和我们联系。此外我公司还销*(代"售")下面的产品：
BTN90212 高载量PCR片段纯化试剂盒 Maxi PCR Clean-Up Kit
PY02-035B  平板计数琼脂(GB)  250克  
三磷酸脱氧核糖核苷酸 Z-L-Alanine
ARB10700 人肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)Elisa分析 Human creatine kinase mb isoenzyme,ck-mb ELISA KIT
BFD027 呋*(代"喃")妥因快速检测试剂盒
聚丙*(代"烯")酸树脂Ⅳ D-(?)-Lyxose 24938-16-7
ARB13608 兔子单核细胞趋化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)酶标法分析 protein 1/monocyte chemotactic and activating factor,mcp1/mcaf ELISA KIT
65455-52-9 Percoll  细胞分离液(1.131)
ARB13905 猪血管生成素2(ANG-2)Elisa定量检测 Porcine angiopoietin 2,ang-2 ELISA KIT
联*(代"*")甲酰 AMPS 134-81-6
BFD070 鸡禽流感抗原检测卡
毛地黄皂苷 4-Aminoacetophenone 11024-24-1
ARB11154 人肥大细胞类胰蛋白酶(MCT)血清中含量检测 Human mast cell tryptase,mct ELISA KIT
克拉维酸* L-NNA 61177-45-5
SuperTOPO-Kan通用克隆试剂盒说明书关键词：BTN160685-25K,SuperTOPO Cloning Kit ,SuperTOPO-Kan通用克隆试剂盒

ARB12668 大鼠碳酸酐酶(CA)酶联免疫定量检测 Rat carbonic anhydrase,ca ELISA KIT
ARB10137 人PL7抗体/抗苏*酰tRNA合成酶(PL7)免费代测 Human anti-pl7-antibody ELISA KIT
ARB11167 人单纯疱疹病毒I型抗体(HSVIAb)ELISA代测服务 Human herpes simplexvirusiantibody,hsviab ELISA KIT
1404-93-9 Vancomycin 盐*(代"酸")万古霉素
ECL化学发光法检测试剂盒"
睾酮 Kaolin 58-22-0
ARB12969 小鼠肌酐(Cr)血清中含量检测 Mouse creatinine,cr ELISA KIT
ARB12361 大鼠抵抗素(ResIstIn)酶标法分析 Rat resistin ELISA KIT
D-半胱*酸 Tetraheptylammonium bromide 921-01-7
ARB10693 人肌养蛋白(dystrophIn)Elisa定量检测 Human dystrophin ELISA KIT
CYB164045 兔抗生物素-HRP(1：500～1000)
ARB13972 猪胰岛素样生长因子结合蛋白-Ⅱ(IGFBP-Ⅱ)酶联免疫定量检测 Porcine insulin-like growth factors binding protein 2，igfbp-2 ELISA KIT
PY02-147  甘*酸培养基  250克  
ARB10429 人戊糖素(PentosIdIne)elisa检测说明书 Human pentosidine ELISA KIT
ARB12282 大鼠抑制素结合蛋白(INHBP)检测服务 Rat inhibin binding protein,inhbp ELISA KIT
甘油醛-3-磷酸脱*酶 Sepharose CL-2B 9001-50-7
ARB10017 人26S蛋白酶体(26S PSM)酶标法分析 Human 26s proteasome,26s psm ELISA KIT
BTN131128 动物种属鉴定PCR Mix Animal DNA Barcoding PCR Mix
间甲*(代"酚")紫 (2-Hydroxyethyl)-β-Cyclodextrin 2244-11-3
ARB10024 人5羟色胺(5-HT)酶免分析 Human 5-hydroxytryptamine,5ht ELISA KIT
对羟基*甲*(代"酸")正丁酯 TIBA 94-26-8
SuperTOPO-Kan通用克隆试剂盒说明书关键词：BTN160685-25K,SuperTOPO Cloning Kit ,SuperTOPO-Kan通用克隆试剂盒


·Tris盐*(代"酸")溶液(1M,pH6.5)(不含RNase)
编号：BTN60704
英文名称：RNase-Free Tris-HCl Solution
规格：250mL

·终点显色法内毒素定量试剂盒
编号：BTN120415
英文名称：Chromogenic End-point TAL Kit
规格：32次
鲎试剂为鲎科动物东方鲎(TAL)的血液变形细胞溶解物的冷冻干燥品，鲎试剂中含有Ｃ因子等跟凝血有关成分，当细菌内毒素激活C因子时会，起一系列酶促反应，激活凝固酶原形成凝固酶，凝固酶分解人工合成的显色基质，使其分解为多肽和黄色的对硝基*(代"*")胺(pNA，λmax=405nm)。在一定时间内，pNA的生成量与细菌内毒素浓度成正相关，据此，可以通过测定样品405nm的光吸收来用外标准法定量样品的内毒素浓度。其原理图如下(TAL和图中LAL相同)：

本试剂盒就是基于上述原理开发而成，并进行了重大改进，增加了偶氮化试剂染色硝基*(代"*")胺(pNA)的步骤，此步使得反应的最终颜色变成玫瑰红色(λmax = 545nm)，避免了深颜色样品本身的颜色对405nm处吸收峰的干扰，结果更加准确可靠。

产品特点：
1.一站式，提供所需的试剂、内毒素对照和无热源的耗材，为用户省去繁琐的准备工作。
2. 灵敏度高，可以对浓度在0.1EU/mL-1EU/mL和在0.01EU/mL -0.1EU/mL两个浓度范围的内毒素样品进行定量。
3. 比经典的pNA法多一步偶氮化染色的步骤，处理样品的范围更广，结果更加稳定可靠。
4.样品中如含有β－葡聚糖，则需选用特异性显色基质鲎试剂盒，因为β－葡聚糖会产生G因子旁路反应，干扰内毒素检测。
5. 若样品含头孢类抗菌素或磺胺制剂，则需要选用不含偶氮化试剂的鲎试剂盒，因为上述成分也能跟本试剂盒中的偶氮染色剂发生偶联反应而干扰偶氮化显色。

试剂盒组成：

 

成分	规格
细菌内毒素标准品 15EU	2支
鲎试剂	2支×1.7mL
显色基质	2支×1.7mL
偶氮化试剂1	2支×10mL
偶氮化试剂2	2支×10mL
偶氮化试剂3	2支×10mL
HCl(反应终止剂)	50ml
细菌内毒素检查用水	50ml×2瓶
除热原试管，10×75mm	10×5支
除热原吸头，1ml	10×4支
除热原吸头，0.2ml	10×5支
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃避光保存，有效期两年。

使用方法：

一、样品的预处理
1.若样品的本底在545nm的吸光度值大于0.5，必须对样品进行稀释后再检测。
2.若样品颜色较深(例如溶血)，或在酸性条件下颜色加深(例如一些组织培养介质),必须设置样品空白管以扣除样品自身的颜色本底。样品空白管不加入鲎试剂，以等体积的细菌内毒素检查用水代替。其余操作同样品管。
3.本检测方法高度灵敏，故接触试剂及样品的所有器皿必须是除热原的。除热原指内毒素浓度小于0.005 EU/ml。玻璃器皿可经250℃干烤至少60分钟去除热原。实验过程应防止细菌的污染(内毒素即细菌的LPS)。
4.待测样品的pH值应在6.0–8.0之间，若超出此范围，需用自备的除热原的缓冲液、0.1M*氧化*或0.1M盐*(代"酸")调节。

二、试剂准备
5.细菌内毒素标准溶液配制(制备标准曲线用)：取细菌内毒素标准品1支，按细菌内毒素标准品使用说明(见附2)稀释为10EU/mL的内毒素溶液，再稀释为1.0EU/mL的内毒素溶液，最后按下表以1.0EU/mL的内毒素溶液为母液，在A-D四个离心管中稀释成0.1、0.25、0.5、1.0 EU/mL的浓度梯度。配制好的内毒素标准溶液应在4小时内用完。注意：也可以选择0.01、0.025、0.05、0.1EU/mL的浓度梯度。注意：标准品浓度范围不同，后续显色实验的保温时间也不同。

成份	A管	B管	C管	D管
细菌内毒素检查用水(mL)	0	0.5	0.75	0.9
1EU/ml内毒素溶液(mL)	1	0.5	0.25	0.1
内毒素浓度(EU/mL)	1	0.5	0.25	0.1

6.阴性对照用细菌内毒素检查用水。
7.配制鲎试剂、显色基质、偶氮化试剂等试剂的工作液。
(1)鲎试剂：按标签标示量加细菌内毒素检查用水于鲎试剂中，轻轻振摇使鲎试剂完全溶解，得鲎试剂工作液。注意不要用旋涡混匀剧烈振摇。鲎试剂工作液应在10分钟内用完。
(2)显色基质：按标签标示量加细菌内毒素检查用水于显色基质中，轻轻振摇使显色基质完全溶解，得显色基质工作液。显色基质工作液可在无污染的条件下于4℃贮存8小时以内。
(3)偶氮化试剂1：按标签标示量加反应终止剂(注意：不是细菌内毒素检查用水)于偶氮化试剂1瓶中，得偶氮化试剂1工作液。
(4)偶氮化试剂2：按标签标示量加细菌内毒素检查用水于偶氮化试剂2瓶中，得偶氮化试剂2工作液。
(5)偶氮化试剂3：按标签标示量加细菌内毒素检查用水于偶氮化试剂3瓶中，得偶氮化试剂3工作液。偶氮化试剂工作液可于4℃贮存1周。

三、实验操作
8.取本试剂盒提供的无热原试管6管，按下表操作(每加一个试剂均需要充分混匀，或用移液器轻柔吹打混匀):NC为阴性对照，PC为阳性对照。

成份	NC 1管	PC 4管	样品 1管
细菌内毒素检查用水(μL)	100	-	-
内毒素标准溶液(μL)(4种)	-	每种分别100	-
待测样品(μL)	-	-	100
鲎试剂工作液(μL)	100	100	100
混匀，37ºC温育T1分钟
显色基质溶液(μL)	100	100	100
混匀，37ºC温育T2分钟
偶氮化试剂1工作液(μL)	500	500	500
偶氮化试剂2工作液(μL)	500	500	500
偶氮化试剂3工作液(μL)	500	500	500
混匀,静置5分钟，于λ545nm测OD值

特别注意：每个批次的T1和T2不同。对本批次。

四、数据处理
9.建标准曲线：Y=bX + a，其中Y为545nm处吸光值，X为内毒素浓度，b为直线斜率，a为Y轴截距。
10.当实验数据同时满足如下三个条件时实验才有效：
(1)标准曲线的相关系数r≥0.980，
(2)标准曲线最低点的Y值大于阴性对照的Y值，
(3)待测样品平行管的平均值在标准曲线的区间内。

附1：待测样品的干扰实验
当样品中可能存在鲎实验的干扰物质时，须进行干扰实验。待测样品的干扰实验详见《中华人民共和国药典》2010细菌内毒素检查法》的“光度测定法干扰实验”。当鲎试剂、待测样品的来源、配方、生产工艺改变或实验环境中发生了任何有可能影响实验结果的变化时，须进行干扰实验，步骤如下:
1.选择标准曲线中点或一个靠近中点的内毒素浓度(设为λm)，作为待测样品干扰实验中添加的内毒素浓度，配制含λm内毒素的待测样品阳性对照，测量出该溶液的内毒素浓度,称为Cs；
2.测量出未添加外源内毒素的待测样品溶液内毒素浓度,称为Ct；
3.计算该实验条件下的回收率R＝(Cs–Ct)/λm×100%
4.当R在50%～200%之间，则认为在此实验条件下待测样品溶液不存在干扰作用。
5.当R在50%～200%之外，需对待测样品进行系列稀释(稀释倍数不得超过最大有效 稀释倍数MVD)或进行其它处理消除干扰,每一稀释溶液都重复步骤1-3,直到内毒素的回收率R在50%～200%之间。选择回收率R最接近100%的稀释倍数进行内毒素检测。

附2：细菌内毒素标准品使用说明
本品为白色疏松海绵状固体，系参照中国药品生物制品检定所的细菌内毒素工作标准品标定的大肠杆菌内毒素冻干品，供鲎实验中的鲎试剂灵敏度复核、干扰实验和各种阳性对照。其用法如下：
6.溶解：加入适量的细菌内毒素检查用水(BET水，最大加入量不得超过1mL),复溶后置涡旋混匀器上混匀15 min。
7.稀释：将上述内毒素溶液进一步用细菌内毒素检查用水稀释成各个不同浓度。每次稀释后必须在涡旋混匀器上混匀至少一分钟。每一步的稀释倍数均不得超过10倍。
8.本品为一次性使用。仅供体外鲎实验检测，禁止用于注射、口服等。
9.实验所用的器皿需经过处理，以除去可能存在的外源性内毒素，可以经250℃干烤至少60分钟处理，也可以采用其他确保不干扰细菌内毒素检测的适宜方法处理。实验操作过程中应该防止微生物的污染。
10.稀释的内毒素溶液静置时间超过10分钟，用前需要在涡旋混匀器上剧烈混匀1分钟，放置4小时以上的内毒素溶液应丢弃。

我公司生产供应销*(代"售")的克隆与表达正全品类优惠促销，十分期待您的咨询选购SuperTOPO-Kan通用克隆试剂盒说明书。