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- 百奥莱博
- 北京
- BTN140645-PCY
- 2025年07月06日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
干冰运输、-80℃保存
- 保质期：
长期
- 英文名：
E.coli TB1 Rosetta Competent Cell
- 库存：
709
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
大肠杆菌TB1感受态细胞厂商由专业试剂供应商北京百奥莱博提供，用于生化科研试验，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多大肠杆菌TB1感受态细胞等克隆与表达产品请联系我司咨询订购。
名称：大肠杆菌TB1感受态细胞厂商
品牌：百奥莱博
编号：BTN140645
产地：国产|进口
规格：10*100μl
本感受态细胞来源于JM 83，是JM 83 hsdR型，只含有大肠杆菌RNA polymerase，缺少BL21(DE3)菌株的T7 RNA polymerase，适合NEB公司的pMAL 系列质粒原核蛋白表达(The pMAL vectors use the E. coli RNA polymerase)，不能用于pET 系列质粒的表达，具有链霉素抗性。TB1感受态细胞由特殊工艺制作，经pUC19质粒检测转化效率高达108cfu/μg。
菌株基因型：F– ara Δ(lac-proAB)rpsL(Strr)[φ80 dlacΔ(lacZ)M15] thi hsdR。
储存条件：干冰运输、-80℃保存，有效期半年。
自备试剂：目的DNA、SOC或LB培养基等。
使用方法：
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μL，根据实际情况分装使用。
以下实验以50μL感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA，通常100μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA 所饱和)，用移液器轻轻吹打混匀，冰浴25分钟。
3. 42℃热击45秒，迅速将离心管转移到冰浴中并静置2-3分钟，晃动会降低转化效率。
4. 每个离心管中加入700μl 无菌的2YT或LB培养基(不含抗生素)，混匀后置于37℃摇床，200rpm 振荡培养60分钟使菌体复苏。
5. 5000rpm离心一分钟收菌，留取100μL左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
6. 将平板倒置于37℃培养箱中培养12-16小时。
注意事项：
1. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA 总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA 总量较少，可取200-300μL转化产物涂布平板。
2. 混入质粒时应轻柔操作。
3. 诱导时，IPTG浓度可选(0.1-2mM 均可)。
4. 为获得需要量的蛋白，最佳诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。
想要了解更多关于大肠杆菌TB1感受态细胞厂商的价格、品牌、厂家、说明书、促销信息，请和我们联系。此外我公司还销*(代"售")下面的产品：
·Taq DNA聚合酶
编号：BTN51206
英文名称：Taq DNA Polymerase
规格：500U
本产品是Thermus aquaticus(水生栖热菌)的DNA聚合酶基因在E. coli中表达而得,具有以双链DNA为模板的5´→3´聚合酶活性和5´→3´外切酶活性。Taq DNA聚合酶长为832个*基酸，分子量为94 Kd。该酶可以广泛用于PCR，RT-PCR，加尾反应等。
产品特点：
1．耐热DNA聚合活性，该酶在90℃以上几乎无DNA合成，在75～80℃时延伸率约150个核苷酸，70℃时为60个核苷酸/秒，55℃时为24个核苷酸/秒。在65～68℃并有Mn2+存在时还具有逆转录活性。
2．热稳定，在PCR混合物中95℃保温40分钟仍可保持50%的活性。
3．Mg2+离子依赖性，MgCl₂浓度在2.0mM时该酶催化活性最高。
4．本酶无3´→5´外切活性，不具3´→5´校对功能，碱基错配机率为2.1×10⁻⁴。
产品组成：
| 成分 | 规格 |
| Taq DNA聚合酶(5U/μL) | 20μl |
| 10×PCR Buffer(含Mg2+) | 1ml |
| MgCl2，25mM | 1ml |
| 说明书 | 1份 |
储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。
使用方法：(以λDNA为模板进行PCR扩增反应为例)
1．按下列组份配制PCR反应液。
| Taq DNA聚合酶(5U/μl) | 0.25μl |
| 10×PCR Buffer(含Mg2+) | 5μl |
| MgCl₂(25mM) | 根据需要补加 |
| 自备dNTP(各2.5mM) | 4μl |
| 模板DNA | 见下 |
| 引物1(20μM) | 1μl |
| 引物2(20μM) | 1μl |
| 灭菌蒸馏水 | Up to 50μl |
注：10×PCR Buffer含15mM MgCl2(在PCR体系中的终浓度为1.5mM)，是否需要补加MgCl2根据实验决定。但一般不需要补加。
推荐50μL PCR反应体系中模板DNA推荐使用量
| 哺乳动物基因组DNA | 0.5-1μg |
| 酵母基因组DNA | 5-500ng |
| 细菌基因组DNA | 0.5-50ng |
| 质粒DNA | 5-500pg |
| PCR回收片段 | 1-100pg |
2．PCR反应条件
以λDNA为模板，扩增1kbp的DNA片段的PCR反应条件如下：
注：PCR反应条件视模板、引物等的结构条件不同而各异。在实际操作中需根据模板、目的片段的大小、碱基序列和引物的长短等具体情况，设定最佳的反应条件(温度、时间等)。
注意事项：
PCR的反应液请在冰中配制，然后置于PCR反应仪上进行PCR反应。这种冷启动法可增强PCR扩增的特异性，减少PCR过程中的非特异性反应，能得到良好的PCR结果。
大肠杆菌TB1感受态细胞厂商关键词：BTN140645,大肠杆菌TB1感受态细胞,E.coli TB1 Rosetta Competent Cell
·X-gal干粉
编号：BTN100885
英文名称：X-Gal Powder
规格：0.5g
X-Gal的学名为5-*-4-*-3-吲哚基-β-D-半乳糖苷，分子式为C14H15BrClNO6，分子量为408.63。CAS号为7240-90-6。溶于甲醇、DMSO和二甲基甲酰胺，溶解度可达20mg/mL。
储存条件：低温运输、-20℃避光保存、有效期一年。
·一步式复杂样品DNA提取试剂盒
编号：BTN61202
英文名称：One-step DNA extraction kit
规格：10mL
本试剂盒是专用于从各种常见的样品中快速提取用于PCR扩增的DNA。
试剂盒特点：
1.操作简单，只用一步(约5-10分钟)即可以得到用于PCR扩增的DNA 模板，不需要任何离心、抽提等操作步骤，比常用的Chelex100提取方法和*酚/*仿方法快。
2.兼容性广，可以用于几乎所有的分子生物学样品，包括细菌、昆虫、真菌、各种植物、各种动物、法医样品(包括全血液、血痕、精斑、唾液、毛发、组织样品、口腔细胞和FTA卡)、石蜡组织切片等。
3.环保健康，不使用任何有毒有害的试剂。
4.尤其适用于大规模育种筛选和临床筛选。
试剂盒组成：
| 成分 | 规格 |
| 一步式广谱DNA提取试剂 | 10ml |
| 说明书 | 1份 |
储存条件：常温运输及保存，有效期一年。
使用方法：
1. 将约2μl液体样品(如全血、细胞培养液)或2mg的固体样品(如动物组织，约半粒芝麻大小)加入到50μl 本产品中。
注意：样品加入量可能需要根据其DNA的含量稍做调节，如果样品DNA含量少，则用量要增加，但总液体样品用量最好不要超过本产品用量的1/10；固体样品用量最好不要超过1mg/10μl的比例。下面是部分常见生物样品的DNA含量：
| 材料 | DNA含量 |
| 精液 | 150-300μg/mL |
| 血液 | 20-40μg/mL |
| 精斑 | 20-30μg/cm2 |
| 唾液 | 1-10μg/mL |
| 血斑 | 250-500 ng/cm2 |
| 口腔拭子 | 100-1500 ng/拭子 |
| 组织 | 50-500 ng/mg |
| 阴道拭子 | 10-3000 ng/拭子 |
| 骨头 | 3-10 ng/mg |
| 拔出的带发根头发 | 1-750 ng/发根 |
| 尿液 | 1-20 ng/mL |
| 自然脱落的带发根头发 | 1-10 ng/发根 |
2. 80℃加热5分钟后。
注意：此步的条件可以根据样品的质地稍做调节。如果是液体样品，室温处理1-3分钟即可。如果是难以破裂的细胞和材料(如酵母、石蜡组织切片、血斑)，则保温时间可以延长到10-30分钟。
3. 简短振荡混匀后取裂解物直接进行PCR(裂解物体积最好不要超过PCR 体积的1/10)。
4.其余同常规操作。
疑难解答：
Q： 本产品与美国BioVenture的GeneReleaser 有何区别？
A： 本产品处理简单，只需要80℃加热5分钟即可；而GeneReleaser 加热处理复杂而繁琐，共需要9 步处理，累计时间需要10 余分钟量(具体是65℃ 30s，8℃ 30s，65℃ 90s，97℃ 180s，8℃ 60s，65℃ 180s，97℃ 60s，65℃ 60s，80℃放置)，手工操作时十分难以控制。
Q： 用本产品提取的DNA 能否用电泳方法检测？
A： 由于DNA含量太少，不能用电泳方法检测。
大肠杆菌TB1感受态细胞厂商关键词：BTN140645,大肠杆菌TB1感受态细胞,E.coli TB1 Rosetta Competent Cell
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A0401 标准新生牛血清(无菌采制)
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5-氮胞苷 DL-Lysine monohydrochloride 320-67-2
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磷酸*** Alizarin yellow GG 13011-54-6
F030826 BIOTIN标记兔抗大鼠IgG抗体 Rabbit Anti-Rat IgG*BIOTIN
PY01-070 木瓜蛋白酶(1:900000) 25克
ARB12211 大鼠成纤维细胞生长因子10(FGF-10)定量分析 Rat fibroblast growth factor-10,fgf-10 ELISA KIT
ARB13641 兔子基质金属蛋白酶3(MMP-3)代做ELISA实验 Rabbit matrix metalloproteinase 3,mmp-3 ELISA KIT
5′-胞苷单磷酸 Methyl 4-aminobenzoate 63-37-6
ARB13438 鸡甲状腺素(T4)Elisa方法检测 Chicken thyroxine,t4 ELISA KIT
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文献和实验实验目的1.了解转化的概念及其在分子生物学研究中的意义。2.学习氯化钙法制备大肠杆菌感受态细胞的方法。3.学习将外源质粒 DNA 转入受体菌细胞并筛选转化体的方法。实验原理转化( Transformation )是将异源 DNA 分子引入另一细胞品系，使受体细胞获得新的遗传性状的一种手段，它是微生物遗传、分子遗传、基因工程等研究的基本实验技术。转化中的受体细胞： 转化过程所用的受体细胞一般是限制性修饰系统缺陷的变异株，即不含限制性内切酶和甲基化酶的突变株，常用 RM 符号表示。转化方法：电击
4．操作步骤 1）大肠杆菌感受态细胞的制备(CaCl2法) (1) 从新活化的E.coli DH5α菌平板上挑取一单菌落，接种于3～5ml LB液体培养中，37℃振荡培养12h左右，直至对数生长期。将该菌悬液以1:100～1:50转接于100ml LB液体培养基中，37℃振荡扩大培养，当培养液开始出现混浊后，每隔20～30min测一次OD600nm，至OD600nm≤0.5时停止培养；(2) 每组取培养液3个2ml转入2ml离心管中，在冰上冷却20-30min，于4℃，4000r／
酶和甲基化酶的突变体（Rˉ，Mˉ），它可以容忍外源DNA分子进入体内并稳定地遗传给后代。受体细胞经过一些特殊方法（如电击法，CaCl2，RbCl（KCl）等化学试剂法）的处理后，细胞膜的通透性发生了暂时性的改变，成为能允许外源DNA分子进入的感受态细胞（Compenent cells）。进入受体细胞的DNA分子通过复制，表达实现遗传信息的转移，使受体细胞出现新的遗传性状。将经过转化后的细胞在筛选培养基中培养，即可筛选出转化子（Transformant，即带有异源DNA分子的受体细胞）。目前常用的感受态细胞
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