虾碱性磷酸酶

碱性磷酸酶，牛小肠产品及特点：

Shrimp Alkaline Phosphatase（SAP）虾碱性磷酸酶与大肠杆菌由来的酶同样，催化所有磷酸单酯的水解，不能催化磷酸二酯以及磷酸三酯的水解，也能催化 ATP 等焦磷酸键水解。 但该酶与大肠杆菌由来的 BAP以及小牛肠由来的CIAP不同，通过65℃，15分钟的热处理，可使酶完全不可逆失活。其作用原理图如下：

它具有下列特点：

1. 去除DN**段的 5’-末端的磷酸基。防止线状DNA的自身环化（Self-Ligation）。

2. 除去PCR反应后残存的dNTP。PCR产物进行测序时，在反应体系中如果有多余的 Primer 和dNTP，将影响测序反应的正常进行。使用 Exonuclease I 分解残存的 Primer；用 SAP 处理可降解多余的 dNTP，之后不需要对 PCR 产物进行精制，立即可以进行测序反应。

碱性磷酸酶，牛小肠活性单位定义

在 37℃、pH9.8 的条件下，1 分钟内水解对**苯磷酸盐（ p-nitrophenolphosphate ） 生成 1 μ mol 的对**苯酚（p-nitrophenol）所需要的酶量定义为 1个活性单位（U）。

纯度

1. 5 U的本酶和1 μg的λDNA-Hind III片段在37℃、pH7.5的条件下反应1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。

2. 5 U的本酶和1 μg的16S，23S rRNA在37℃、pH7.5的条件下反应1小时，RNA的电泳谱带不发生变化。

使用及效果

碱性磷酸酶（虾）的去磷酸反应 ，在微量离心管中配制下列反应液，全量定容至50 μl。