pBApo-EF1α-pur

pBApo-EF1α-pur

载体基本信息

出品公司:	Ybscience
载体名称:	pBApo-EF1α-pur
质粒类型:	哺乳动物细胞表达载体
高拷贝/低拷贝:	低拷贝
克隆方法:	限制性内切酶，多克隆位点
启动子:	EF1α
载体大小:	4972 bp
5' 测序引物及序列:	--
3' 测序引物及序列:	--
载体标签:	无标签
载体抗性:	氨苄青霉素
筛选标记:	嘌呤霉素（Puromycin）
克隆菌株:	TOP10, DH5α, JM109
宿主细胞（系）:	常规细胞系，293、CV-1、CHO等
备注:	pBApo-EF1α-pur载体可用来表达microRNA和其它转录产物； 很容易将{promoter+ORF+PolyA signal}框转移到腺病毒 载体上，用于构建腺病毒载体。
稳定性:	瞬表达 或 稳表达
组成型/诱导型:	组成型
病毒/非病毒:	非病毒

 

载体质粒图谱和多克隆位点信息

 

载体简介

 

pBApo-EF1α-pur DNA是一种简单的应用于哺乳动物细胞的基因表达载体。该载体具有人多肽链延伸因子基因来源的启动子 (EF1α promoter)、单纯疱疹

病毒胸苷激酶来源的polyA信号、新霉素抗性基因。通过在MCS区域插入目的基因的开放阅读框 (ORF)，构建目的基因表达载体。除了通常的基因以外该载

体可以用于pri-microRNA的转录。此外，还可以很容易地将 (promoter＋ORF＋PolyA signal) 从这个载体上转移到腺病毒载体上，尤其是转移到

Adenovirus Dual Expression Kit 的组分pAxcwit上。腺病毒载体感染效率高，范围广，可以用于体外和体内的基因转导。

使用方法
1. 插入基因
在质粒载体的克隆位点处插入目的基因的开放阅读框（ORF）。因为载体上有氨苄青霉素抗性基因，可以从大肠杆菌中筛选重组体。
2. 转染
使用 TransIT 系列、Xfect 系列（Clontech）等转染试剂将质粒导入细胞内。转染条件请参考转染试剂的实验流程。
3. 转染细胞的筛选
pBApo-EF1αNeo DNA 具有新霉素抗性基因、pBApo-EF1αPur DNA 具有嘌呤霉素抗性基因，可以利用抗生素筛选转染细胞。
在质粒转染后培养 24 小时以上，开始使用抗生素筛选。在细胞密度较高的情况下，可以适当地稀释细胞后重新培养。每 3～4 天更换含抗生素的培养基

。通常 1～2 周可以获得转染细胞的克隆。由于不同细胞对抗生素的耐药性不同，需要研讨适合的抗生素浓度。通常 NeoR（新霉素）浓度为 500～1,000 

μg/ml，PurR（嘌呤霉素）浓度为 1～3 μg/ml。
4. 置换表达框（unit）
pBApo-EF1α系列载体经过 Cla I 或 EcoR V 酶切，将表达框（unit）（EF1a promoter+插入基因+PolyA signal）从质粒中切出，可以轻易地转移至其

他载体上。特别是 Adenovirus Dual Expression Kit，该载体多克隆位点上有 Cla I 和 Smi I 酶切位点，可以很轻易地将表达框转移至腺病毒载
体上。（EcoR V 和 Smi I 都产生是平滑末端，适合片段与腺病毒载体连接