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- Ybscience
- 中国/美国
- YB-0377
- 2026年01月23日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃
- 保质期：
6个月
- 英文名：
pBApo-EF1α-pur
- 库存：
大量
- 供应商：
钰博生物
- 规格：
1ug/5ug
载体基本信息
| 出品公司: | Ybscience |
|---|---|
| 载体名称: | pBApo-EF1α-pur |
| 质粒类型: | 哺乳动物细胞表达载体 |
| 高拷贝/低拷贝: | 低拷贝 |
| 克隆方法: | 限制性内切酶，多克隆位点 |
| 启动子: | EF1α |
| 载体大小: | 4972 bp |
| 5' 测序引物及序列: | -- |
| 3' 测序引物及序列: | -- |
| 载体标签: | 无标签 |
| 载体抗性: | 氨苄青霉素 |
| 筛选标记: | 嘌呤霉素（Puromycin） |
| 克隆菌株: | TOP10, DH5α, JM109 |
| 宿主细胞（系）: | 常规细胞系，293、CV-1、CHO等 |
| 备注: | pBApo-EF1α-pur载体可用来表达microRNA和其它转录产物； 很容易将{promoter+ORF+PolyA signal}框转移到腺病毒 载体上，用于构建腺病毒载体。 |
| 稳定性: | 瞬表达 或 稳表达 |
| 组成型/诱导型: | 组成型 |
| 病毒/非病毒: | 非病毒 |
载体质粒图谱和多克隆位点信息
载体简介
pBApo-EF1α-pur DNA是一种简单的应用于哺乳动物细胞的基因表达载体。该载体具有人多肽链延伸因子基因来源的启动子 (EF1α promoter)、单纯疱疹 病毒胸苷激酶来源的polyA信号、新霉素抗性基因。通过在MCS区域插入目的基因的开放阅读框 (ORF)，构建目的基因表达载体。除了通常的基因以外该载 体可以用于pri-microRNA的转录。此外，还可以很容易地将 (promoter＋ORF＋PolyA signal) 从这个载体上转移到腺病毒载体上，尤其是转移到 Adenovirus Dual Expression Kit 的组分pAxcwit上。腺病毒载体感染效率高，范围广，可以用于体外和体内的基因转导。 使用方法 1. 插入基因 在质粒载体的克隆位点处插入目的基因的开放阅读框（ORF）。因为载体上有氨苄青霉素抗性基因，可以从大肠杆菌中筛选重组体。 2. 转染 使用 TransIT 系列、Xfect 系列（Clontech）等转染试剂将质粒导入细胞内。转染条件请参考转染试剂的实验流程。 3. 转染细胞的筛选 pBApo-EF1αNeo DNA 具有新霉素抗性基因、pBApo-EF1αPur DNA 具有嘌呤霉素抗性基因，可以利用抗生素筛选转染细胞。 在质粒转染后培养 24 小时以上，开始使用抗生素筛选。在细胞密度较高的情况下，可以适当地稀释细胞后重新培养。每 3～4 天更换含抗生素的培养基 。通常 1～2 周可以获得转染细胞的克隆。由于不同细胞对抗生素的耐药性不同，需要研讨适合的抗生素浓度。通常 NeoR（新霉素）浓度为 500～1,000 μg/ml，PurR（嘌呤霉素）浓度为 1～3 μg/ml。 4. 置换表达框（unit） pBApo-EF1α系列载体经过 Cla I 或 EcoR V 酶切，将表达框（unit）（EF1a promoter+插入基因+PolyA signal）从质粒中切出，可以轻易地转移至其 他载体上。特别是 Adenovirus Dual Expression Kit，该载体多克隆位点上有 Cla I 和 Smi I 酶切位点，可以很轻易地将表达框转移至腺病毒载 体上。（EcoR V 和 Smi I 都产生是平滑末端，适合片段与腺病毒载体连接
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文献和实验细胞仪等检测设备 酶标仪读值 荧光显微镜读值 热门货号 货号 名称 规格/定位 用途 MN511A-1 pMC.CMV-MCS-EF1-GFP-SV40PolyA 10 µg 双独立启动子：CMV 驱目的基因，EF1α 单独驱 GFP；表达互不干扰 MN512A-1 pMC.CMV-MCS-EF1-RFP-SV40PolyA 10 µg 双独立启动子：CMV 驱目的基因，EF1α 单独驱
（如某些原代细胞）。 无标记：适合短期池化实验，但无法富集。 2. 启动子 gRNA 一般用 U6 启动子（Pol III）。要注意 U6 对连续 T 敏感（poly-T 会导致转录提前终止），这也是 gRNA 设计时的禁忌之一。 Cas9 常用 EF1α、CMV、CAG 等。CMV 在某些细胞系（尤其是小鼠细胞和一些原代细胞）中容易沉默，长期实验建议选 EF1α 或 CAG。 3. 滴度：物理滴度 ≠ 功能滴度 这是最重要的一个坑。 物理滴度：p24 ELISA 或 qPCR 测基因组拷贝
会怎样"用 CRISPRa。 --- 一、机制差异决定了两者能回答的问题不同 过表达质粒（cDNA / ORF） 外源启动子（CMV、EF1α 等）驱动，表达量与内源调控完全脱钩； 通常只包含单一 CDS，不含内含子和 UTR； 表达量可达到内源的几十到几百倍； 可携带标签（FLAG、HA、GFP）方便检测。 CRISPRa（dCas9-VP64 / VPR / SAM / SunTag） 失活 Cas9（dCas9）融合转录激活域，被 gRNA 引导至靶基因启动子区； 激活的是内源位点，转录本包含完整的内含
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