PinPoint Xa-1

PinPoint Xa-1

载体基本信息

出品公司:	Ybscience
载体名称:	PinPoint Xa-1
质粒类型:	大肠杆菌表达载体；蛋白纯化
表达水平:	高
启动子:	Tac
克隆方法:	多克隆位点，限制性内切酶
载体大小:	3331 bp
5' 测序引物及序列:	PinPoint-F: cgtgacgcggtgcagggcg
3' 测序引物及序列:	SP6: ATTTAGGTGACACTATAG
载体标签:	N-Biotin，N-Factor Xa
载体抗性:	氨苄
备注:	主要用于生物素标记蛋白生产和纯化。
稳定性:	瞬表达
组成型:	组成型
病毒/非病毒:	非病毒

 

载体质粒图谱和多克隆位点信息

载体简介

PinPoint Xa 蛋白纯化系统用来生产和纯化在体内连接了生物素的融合蛋白质。在一个载体上，将编码需要纯化蛋白质的DNA序列克隆在载体上的一个编码体内添加生物素的短肽序列的下游。连接生物素的融合蛋白在大肠杆菌内生成，然后用SoftLink软释放抗生物素蛋白树脂亲和纯化。这个树脂是专利技术，可将蛋白质以非变性形式洗脱出来。PinPoint载体的特点是含有编码内源蛋白酶因子Xa(发音为Ten a)的蛋白水解位点，使得纯化标签可从天然蛋白上分离。载体还带有方便得多克隆区域，便于构建融合蛋白。

系统的几个载体含有所有可能的有义读码框，还含有连接着生物素的树脂、一个纯化柱以及生物素，PinPoint Xa对照载体含有氯素酶转乙酰基酶（CAT）基因，作为监控蛋白表达、纯化和加工条件的手段。在这个系统中，每升培养物一般产生1-5 mg蛋白。

特点
● 胞内添加生物素标签：用于纯化融合蛋白；得到的许多蛋白质是可溶的。
● 易于使用：可以通过柱子，也可以批量用SoftLink树脂纯化生物素标签蛋白质。
● 便于检测：链霉亲和素碱性磷酸酶可用于检测生物素标签的融合蛋白质，以假-Western方式，监控纯化过程。
● 灵活：所有读码框都有相应的PinPoint载体。
● 温和释放条件：SoftLink树脂允许在非变性条件下释放融合蛋白质。
● tac启动子：可以严格调控表达。

应用
● 纯化毫克数量的表达蛋白。
● 生产新颖的生物试剂。
● 与TetraLink 树脂同用可以制造亲和柱。

载体序列

LOCUS       PinPoint\Xa-1     3331 bp    DNA   circular  SYN       26-FEB-1996
DEFINITION  Cloning vector PinPoint Xa-1, protein expression vector,
            complete sequence.
ACCESSION   U47626
NID         g1200490
KEYWORDS    .
SOURCE      Cloning vector PinPoint Xa-1.
  ORGANISM  Cloning vector PinPoint Xa-1
            artificial sequence; cloning vectors.
REFERENCE   1  (bases 1 to 3331)
  AUTHORS   Brady,M.
  TITLE     Direct Submission
  JOURNAL   Submitted (30-JAN-1996) Melinda Brady, R&D, Promega Corporation,
            5445 East Cheryl Parkway, Madison, WI 53711, USA
COMMENT
            NCBI gi: 1200490
FEATURES               Location/Qualifiers
     source          1..3331
                     /organism="Cloning vector PinPoint Xa-1"
     CDS             1..>386
                     /label="Biotin purification tag;  NCBI gi: 1200491"
                     /codon_start=1
                     /transl_table=11
                     /db_xref="PID:g1200491"
     misc_feature    262..264
                     /label="biotinylated lysine codon;  Biotin purification
                     tag"
     primer_bind     325..343
                     /label="PinPoint(TM) sequencing primer binding site"
     misc_feature    379..390
                     /label="Factor Xa protease recognition site"
     misc_feature    387..441
                     /label="multiple cloning site"
     promoter        446..468
                     /label="SP6 RNA polymerase promoter"
     primer_bind     451..469
                     /label="SP6 sequencing primer binding site"
     CDS             919..1779
                     /gene="ampR"
                     /label="NCBI gi: 1200492"
                     /codon_start=1
                     /function="ampicillin resistance"
                     /transl_table=11
                     /product="beta-lactamase"
                     /db_xref="PID:g1200492"
     promoter        2796..2818
                     /label="T7 RNA polymerase promoter"
     promoter        3202..3282
                     /label="tac promoter"
BASE COUNT      811 a    854 c    885 g    781 t
ORIGIN      
        1 atgaaactga aggtaacagt caacggcact gcgtatgacg ttgacgttga cgtcgacaag
       61 tcacacgaaa acccgatggg caccatcctg ttcggcggcg gcaccggcgg cgcgccggca
      121 ccggcagcag gtggcgcagg cgccggtaag gccggagagg gcgagattcc cgctccgctg
      181 gccggcaccg tctccaagat cctcgtgaag gagggtgaca cggtcaaggc tggtcagacc
      241 gtgctcgttc tcgaggccat gaagatggag accgagatca acgctcccac cgacggcaag
      301 gtcgagaagg tcctggtcaa ggagcgtgac gcggtgcagg gcggtcaggg tctcatcaag
      361 atcggggatc tcgagctcat cgaaggtcgc gaagcttcag ctgggatccg gtaccgatat
      421 cagatctccc ggggcggccg cgatctggtt ctatagtgtc acctaaatcg tatgtgtatg
      481 atacataagg ttatgtatta attgtagccg cgttctaacg acaatatgtc catatggtgc
      541 actctcagta caatctgctc tgatgccgca tagttaagcc agccccgaca cccgccaaca
      601 cccgctgacg cgccctgacg ggcttgtctg ctcccggcat ccgcttacag acaagctgtg
      661 accgtctccg ggagctgcat gtgtcagagg ttttcaccgt catcaccgaa acgcgcgaga
      721 cgaaagggcc tcgtgatacg cctattttta taggttaatg tcatgataat aatggtttct
      781 tagacgtcag gtggcacttt tcggggaaat gtgcgcggaa cccctatttg tttatttttc
      841 taaatacatt caaatatgta tccgctcatg agacaataac cctgataaat gcttcaataa
      901 tattgaaaaa ggaagagtat gagtattcaa catttccgtg tcgcccttat tccctttttt
      961 gcggcatttt gccttcctgt ttttgctcac ccagaaacgc tggtgaaagt aaaagatgct
     1021 gaagatcagt tgggtgcacg agtgggttac atcgaactgg atctcaacag cggtaagatc
     1081 cttgagagtt ttcgccccga agaacgtttt ccaatgatga gcacttttaa agttctgcta
     1141 tgtggcgcgg tattatcccg tattgacgcc gggcaagagc aactcggtcg ccgcatacac
     1201 tattctcaga atgacttggt tgagtactca ccagtcacag aaaagcatct tacggatggc
     1261 atgacagtaa gagaattatg cagtgctgcc ataaccatga gtgataacac tgcggccaac
     1321 ttacttctga caacgatcgg aggaccgaag gagctaaccg cttttttgca caacatgggg
     1381 gatcatgtaa ctcgccttga tcgttgggaa ccggagctga atgaagccat accaaacgac
     1441 gagcgtgaca ccacgatgcc tgtagcaatg gcaacaacgt tgcgcaaact attaactggc
     1501 gaactactta ctctagcttc ccggcaacaa ttaatagact ggatggaggc ggataaagtt
     1561 gcaggaccac ttctgcgctc ggcccttccg gctggctggt ttattgctga taaatctgga
     1621 gccggtgagc gtgggtctcg cggtatcatt gcagcactgg ggccagatgg taagccctcc
     1681 cgtatcgtag ttatctacac gacggggagt caggcaacta tggatgaacg aaatagacag
     1741 atcgctgaga taggtgcctc actgattaag cattggtaac tgtcagacca agtttactca
     1801 tatatacttt agattgattt aaaacttcat ttttaattta aaaggatcta ggtgaagatc
     1861 ctttttgata atctcatgac caaaatccct taacgtgagt tttcgttcca ctgagcgtca
     1921 gaccccgtag aaaagatcaa aggatcttct tgagatcctt tttttctgcg cgtaatctgc
     1981 tgcttgcaaa caaaaaaacc accgctacca gcggtggttt gtttgccgga tcaagagcta
     2041 ccaactcttt ttccgaaggt aactggcttc agcagagcgc agataccaaa tactgtcctt
     2101 ctagtgtagc cgtagttagg ccaccacttc aagaactctg tagcaccgcc tacatacctc
     2161 gctctgctaa tcctgttacc agtggctgct gccagtggcg ataagtcgtg tcttaccggg
     2221 ttggactcaa gacgatagtt accggataag gcgcagcggt cgggctgaac ggggggttcg
     2281 tgcacacagc ccagcttgga gcgaacgacc tacaccgaac tgagatacct acagcgtgag
     2341 cattgagaaa gcgccacgct tcccgaaggg agaaaggcgg acaggtatcc ggtaagcggc
     2401 agggtcggaa caggagagcg cacgagggag cttccagggg gaaacgcctg gtatctttat
     2461 agtcctgtcg ggtttcgcca cctctgactt gagcgtcgat ttttgtgatg ctcgtcaggg
     2521 gggcggagcc tatggaaaaa cgccagcaac gcggcctttt tacggttcct ggccttttgc
     2581 tggccttttg ctcacatgtt ctttcctgcg ttatcccctg attctgtgga taaccgtatt
     2641 accgcctttg agtgagctga taccgctcgc cgcagccgaa cgaccgagcg cagcgagtca
     2701 gtgagcgagg aagcggaaga gcgcccaata cgcaaaccgc ctctccccgc gcgttggccg
     2761 attcattaat gcaggttaac ctggcttatc gaaattaata cgactcacta tagggagacc
     2821 ggcctcgagc agcaaggaga tggcgcccaa cagtcccccg gccacggggc ctgccaccat
     2881 acccacgccg aaacaagcgc tcatgagccc gaagtggcga gcccgatctt ccccatcggt
     2941 gatgtcggcg atataggcgc cagcaaccgc acctgtggcg ccggtgatgc cggccacgat
     3001 gcgtccggcg tagaggatcg atccgggctt atcgactgca cggtgcacca atgcttctgg
     3061 cgtcaggcag ccatcggaag ctgtggtatg gctgtgcagg tcgtaaatca ctgcataatt
     3121 cgtgtcgctc aaggcgcact cccgttctgg ataatgtttt ttgcgccgac atcataacgg
     3181 ttctggcaaa tattctgaaa tgagctgttg acaattaatc atcggctcgt ataatgtgtg
     3241 gaattgtgag cggataacaa tttcacacag gaaacagaat tcccagcttg gctgcagaac
     3301 cattccattc gttgatccgg gagtaactca c