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文献和实验假阳性反应。 3.色素形成法 在酶作用下使无色化学物质在局部形成色素沉着。以下主要介绍三种类型: (1)四唑盐法(tetrazolium method):此法主要显示各种脱氢酶。在脱氢酶作用下,组织切片在含有四唑盐或双四唑盐的底物混合液中,使底物分离出的氢原子与五色四唑盐或双四唑盐结合形成红色或蓝色甲腊(formazane)或二甲腊(difomazane)色素。这种色素沉着于酶所在部位。四唑盐法原理 (2)靛酚蓝法(indophenol blue method):该法主要显示
的PAGlonm室温孵育1h,或37℃孵育30min.(9)0.05mol/L(pH7.4)TBS洗10min.(10)1%戊二醛洗10min.(11)双蒸水洗5min.(12)1%明胶洗5min.(13)银避光显影8~15min.(14)双蒸水洗15min.(15)固定:用显影定影液(1:4或1:10)固定5min,也可以用15%硫酸钠-20%硫代硫酸钠混合液固定1~3min,或用1%戊二醛固定5min,50℃温水洗3~6min. (16)衬染,核固红衬染3min或甲基绿衬染3min. (17)常规
pH值至7.4,加水至1L,在1.034?105 Pa高压下蒸气灭菌20min,室温保存。 (2) 封闭液(见表3-3)。 (3) 1%BSA/PBS (4) 一抗试剂和碱性磷酸酶或辣根过氧化物酶标记的二抗试剂(通常是用辣根过氧化物酶标记的抗免疫球蛋白抗体)。 (5) 碱性磷酸酶底物溶液: ① NBT(氮蓝四唑)溶液:在10ml 70%的二甲基甲酰胺中溶解0.5g NTB; ② BCIP(5-溴-4-氮-3-吲哚磷酸)溶液
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