动植物膜蛋白微量制备试剂盒促销

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产供应动植物膜蛋白微量制备试剂盒促销，我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂，价格优惠，欢迎广大科研工作者垂询订购。

名称：动植物膜蛋白微量制备试剂盒促销
英文名：Animal-Plant Membrane Protein Miniprep Kit
产地：国产|进口
规格：50次
编号：BTN91204
品牌：百奥莱博
细胞膜蛋白质参与了很多重要的细胞活动，根据它们与膜结合的位置一般分为两种，一种是附着在细胞膜上，另一类是嵌入到细胞膜中间。附着型膜蛋白疏水性较弱，比较容易提取和纯化；而嵌入型膜蛋白疏水型很强，所以在水溶液里面很难溶解，非常难以提取和纯化。百奥莱博根据上述特点，经过精心优化的、开发出本产品，专门用于分离纯化这两种膜蛋白。

产品特点：
1. 两步法提取，先纯化含膜组分，再分离附着型膜蛋白和嵌合型膜蛋白。
2. 膜蛋白(附着型+嵌入型)产量高，对肝脏组织而言，其线粒体膜蛋白产率为10μg/mg左右，过氧化物酶体为1μg/mg左右，内质网为25-30μg/mg。
3. 所得的膜蛋白大部分具有生物活性，可用于活性研究。
4.可用动物、植物培养细胞和实体细胞为材料，也可用预先纯化的含膜组分或细胞器(如线粒体、叶绿体、内质网、过氧化物酶体)为材料(本试剂盒不含纯化细胞器的试剂)。
5. 本方法重复性好。
6. 本试剂盒足够50次微量提取，分A型和B型两种。A型用于附着型膜蛋白，B型用于嵌合型膜蛋白和附着型膜蛋白。

试剂盒组成：

 

成分	A型	B型
溶液A	100ml	100ml
溶液B	10ml	10ml
溶液C	50ml	100ml
说明书	1份	1份

储存条件：常温运输及保存，有效期一年。

使用方法：
1. 对培养细胞：收集1×107个培养细胞(动物细胞、植物细胞)，用20mL自备的冰浴的PBS 洗涤三次，每次洗涤后需要4℃下1000 g离心2分钟，然后小心弃上清。对实体组织：由于各种动植物的各种实体组织的属性差别太大，故本手册的纯化膜组分的操作步骤(第1-7 步)不一定完全适合，用户需要自行优化以纯化含膜组分或含膜的细胞器(如细胞质膜、内质网、线粒体、叶绿体等)，再将含膜组分或细胞器沉淀直接用于第8 步的膜蛋白提取。
2. 将洗涤后的细胞沉淀重悬在2mL溶液A中，冰上静置10分钟。注意：膜蛋白有膜的保护，在纯化过程中对蛋白酶的降解没有胞浆蛋白敏感，一般可以不加蛋白酶抑制剂。但如果纯化的膜蛋白的确有降解的话，可以在溶液A中加入自备的蛋白酶抑制剂混合物。
3.转移到容积为2mL的Dounce 玻璃匀浆器上下匀浆20-50次(具体次数取决于细胞种类，293T细胞一般需要20次左右，而MEF细胞一般需要50次左右。最好用样品先进行预实验以摸索最佳匀浆次数，最佳匀浆次数时在显微镜下能看见细胞破裂但细胞核完整)。
4. 将匀浆液转移到15或50mL塑料管中，加入相当于匀浆液体积1/10的溶液B，其间可以轻柔颠倒混匀3-5次，留少量样品作为对照1(匀浆液)。
5. 4℃ 2500rpm离心20分钟，沉淀为细胞核，上清为胞浆和膜成分，留少量样品作为对照2(胞浆和膜成分)。
6. 将上清液用Beckman Optima 台式超速离心机100,000 g 4℃离心60分钟。也可以使用其他冷冻超速离心机，但离心力应该为100,000g，否则有可能得不到膜成分沉淀。
7.小心转移上清(胞浆部分)并留少量样品作为对照3(胞浆)。
8. 将沉淀(含膜组分)重悬于1mL 冰浴的溶液C中后，冰上静置30分钟，留少量样品作为对照4(膜成分)。本成分电泳前，需要先用自备的TCA沉淀(TCA 终浓度为10%)，再用冰冷的丙*(代"酮")洗涤两次后再溶解在1×上样液中待用。对照1-3 号不需要这样的预处理。
9. 用Beckman Optima 台式超速离心机100,000g 4℃离心60分钟。也可以使用其他冷冻超速离心机，但离心力应该一致，否则有可能得不到沉淀。
10. 如果需要附着型膜蛋白，则取上清(含附着型膜蛋白)弃沉淀(含膜和其中的嵌合型膜蛋白)。上清可以放-20℃长期保存，如果需要电泳，需要先用自备的TCA沉淀(TCA 终浓度为10%)，再用冰冷的丙*(代"酮")洗涤两次后再溶解在1×上样液中与对照1-4 号一起上样电泳。
11. 如果需要嵌合型膜蛋白，则取出上清(含附着型膜蛋白)并留少量样品作为附着型膜蛋白样品，然后再用1mL 冰浴的溶液C重悬沉淀，然后100,000g 4℃离心60分钟，去掉上清(上清含残留的附着型膜蛋白，可以留样作为洗涤后的附着型膜蛋白样品)。沉淀含膜和其中的嵌合型膜蛋白。如果需要测定膜蛋白的浓度，则将其溶解在自备的0.5 M NaOH溶液。

我公司的动植物膜蛋白微量制备试剂盒促销，性价比高，货期短，送货上门，欢迎您来电咨询购买，另外，我公司还生产供应销*(代"售")下列产品：

·DNA marker(50-400bp)
编号：BTN111107
英文名称：DNA ladder(50-400bp)
规格：50次
本品由8条单一的、浓度已知的DNA片段组成，其大小分别是50、100、150、200、250、300、350、400bp，除250bp浓度为100ng/5μL外，其余片段的浓度均为为50ng/5μL，可用于琼脂糖电泳。由于含上样液，所以即开即用。由于每次上样总DNA含量已知，每条带的含量可根据其摩尔数的比值计算出来。本产品电泳得到的电泳条带长度准确，明亮清晰，背景较低，稳定性很好。每次加样量为5μl，可用于相对定量。本系列产品与各种琼脂糖和各种电泳缓冲液兼容。

储存条件：低温运输、-20℃保存,有效期一年。

使用方法：直接上样电泳，每次加样量为5uL。

使用效果：


疑难解答：
a)如对带型要求较高，建议使用2%琼脂糖凝胶(对SuperBuffer-2缓冲液，电压为250-400V)或2.0%琼脂糖凝胶(对TAE或TBE缓冲液，电压为80V)，同时适当延长电泳时间。
b)电泳图象的质量与琼脂糖、电泳缓冲液有关。请采用高质量的琼脂糖，同时要经常更换电泳缓冲液。


动植物膜蛋白微量制备试剂盒促销关键词：BTN91204,Animal-Plant Membrane Protein Miniprep Kit,动植物膜蛋白微量制备试剂盒


·高pH缓冲液套装
编号：BTN100828
英文名称：High pH Buffer Set
规格：30次
本产品用于Native-PAGE(非变性聚丙*(代"烯")酰胺凝胶电泳)分离大多数蛋白质，这些蛋白在此条件下一般都向阳极移动。本产品的特点是即开即用，省去用户单独配置每种溶液的麻烦。

产品组成：

成份	规格(30次*)
4×浓缩胶配胶液(pH6.7)	100ml
4×分离胶配胶液(pH8.9)	200ml
高pH电泳液(pH8.3)	10L(干粉)
5×高pH上样液	1ml
使用手册	1份

*注：1次是指的一次mini-Gel电泳

储存条件：常温运输及保存(5×高pH上样液需要-20℃保存)，有效期为一年。

·1M Tris-HCl(pH9.0)(DNA级)
编号：BTN101208
英文名称：High pH Buffer Set
规格：250mL
本产品用于Native-PAGE(非变性聚丙*(代"烯")酰胺凝胶电泳)分离大多数蛋白质，这些蛋白在此条件下一般都向阳极移动。本产品的特点是即开即用，省去用户单独配置每种溶液的麻烦。

产品组成：

成份	规格(30次*)
4×浓缩胶配胶液(pH6.7)	100ml
4×分离胶配胶液(pH8.9)	200ml
高pH电泳液(pH8.3)	10L(干粉)
5×高pH上样液	1ml
使用手册	1份

*注：1次是指的一次mini-Gel电泳

储存条件：常温运输及保存(5×高pH上样液需要-20℃保存)，有效期为一年。

·植物叶绿体纯化试剂盒
编号：BTN120308
英文名称：Plant Chloroplast Purification Kit
规格：15次
叶绿体是重要的，负责植物光合作用的细胞器，很多重要的特性(如雄性不育)也跟叶绿体相关，所以叶绿体是研究植物生理和母系遗传的重要材料。对植物叶绿体进行生化，遗传和分子生物学研究都需要进行叶绿体纯化。本产品就是基于密度梯度离心的，专门用于从植物叶片中纯化完整叶绿体的试剂盒。

产品特点：
1．即用型试剂盒，用户不需要单独配制各种溶液。
2．提供AB两种选择，A型用于叶绿体粗提，所得叶绿体含少量其他细胞器污染，可用于后续的SDS-PAGE，Western，ELSIA和蛋白组分析。B型用于叶绿体精提，所得叶绿体完整，可用于后续的光合作用，电子链和磷酸化，跨膜转运，体外叶绿体蛋白合成，蛋白定位等研究。还可用于的叶绿体膜，基质，类囊体，叶绿体DNA和叶绿体RNA纯化。
3．本产品足够15次提取，每次可处理30g叶片，能得到5mg左右叶绿体。
4．已经成功用于菠菜，大豆，莴笋，白菜，烟草和甜菜等植物，还可用于更多植物(可能需要优化条件)。


试剂盒组成：

成分	规格
溶液A成分一	250ml×2
溶液A成分二(干粉)	3g
溶液B	60ml
带柄尼龙滤膜	1个
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存，保存期限一年。

使用方法：
注意：叶绿体对温度高度敏感，所以整个操作必须在冰上或者在冷室进行，所用器皿和溶液均需要在4℃预冷。离心时一定要在4℃进行，离心力以g而不是rpm计算。如果需要研究叶绿体的功能，提取过程还需要在昏暗的光线条件下进行。

1．实验前1-2天将植物放在暗室培养以减少叶绿体中淀粉颗粒的形成，否则离心时这些颗粒很容易使叶绿体破裂。叶片在实验前需先用自来水洗净，再用蒸馏水淋洗，去掉多余水分。如果叶片采集后不能立即处理，则保存时需要保持叶片湿润，即使如此，叶片的放置时间也不能超过一天。
2．新鲜(实验当天)制备溶液A：将自备的去离子水与溶液A成分一按4：1的比例混合，然后在混合液中加入溶液A成分二干粉到终浓度0.1%(每100mL中加入0.1g干粉)，摇晃溶解后所得溶液即为溶液A，冰上预冷待用。一次实验(从30 g叶片提取叶绿体)所需要的溶液A体积跟材料不同而不同。
3．新鲜采集植物叶片，快速去除叶脉并将叶片剪成1-3cm2大小的碎片并浸泡在适量的预冷的溶液A中(每克叶片加4mL溶液A，但对烟草和大豆，每克叶片需要加6mL溶液A)。
4．将浸泡了叶片的溶液A转移到Waring匀浆机(即家用制备果汁的匀浆机)中，低速匀浆10秒，避免起泡沫。用玻璃棒把液面的碎片按入匀浆机底部后，再低速匀浆10秒。注意：除Waring匀浆机外，还可以选择Dounce玻璃匀浆器，Polytron匀浆机和研磨(加玻璃珠)等裂解细胞的方法，但这些方法的单次处理量都比较小，需要将样品分成很多小份单独匀浆，然后再汇集。
5．用带柄尼龙滤膜过滤匀浆液，可先将滤液收集到预冷的200mL量筒中，再等分到4个预冷的50mL的塑料离心管中(每个管中的滤液不要超过35mL)。带柄尼龙滤膜后可反复使用。
6．在水平转子离心机上4℃ 200g离心3分钟(对菠菜，白菜和莴笋材料)或400g离心1分钟(对甜菜材料)，白色沉淀为未破裂的细胞或细胞核。
7．将上清液(含叶绿体)转移到一个新的、预冷的50mL塑料离心管中。
8．在水平转子离心机上4℃ 1000g离心7分钟，小心弃上清，沉淀含叶绿体，呈浅绿色。
9．在沉淀中加入1.5mL预冷的溶液A，手弹离心管底部使叶绿体重悬。注意：重悬时最好避免溶液起泡，也不要用枪头吹打，否则叶绿体容易破裂。沉淀下有白色淀粉属于正常现象，但重悬叶绿体时避免将白色淀粉重悬。
10．将4管叶绿体重悬液汇集(共约6mL)。此溶液为叶绿体粗提产物，可直接用于后续的SDS-PAGE，Western，ELISA和蛋白组分析。如果需要以之为材料精提叶绿体，就需要将破裂的叶绿体和完整的叶绿体分开，根据植物的不同，可选用下述两种密度梯度离心法之一进行分离。
11．单浓度分离法(适合菠菜，白菜和莴笋等材料)：
a)在50mL塑料离心管中先加入6mL溶液A成分一和4mL溶液B，充分混合均匀。
b)在其液面上小心铺上第11步汇集得到的约6mL叶绿体重悬液。
c)在水平转子离心机上4℃ 1000g离心8分钟，最上层的绿色带含破碎的叶绿体，线粒体和核糖体等，管底的绿色沉淀为完整的叶绿体。
d)小心将上清倒出后，在叶绿体沉淀中加入预冷的0.5mL溶液A成分一，手指轻弹管底使之重悬。
e)将叶绿体重悬液转移到1.5mL离心管中并避光保存。可在相差显微镜下检查叶绿体完整性。叶绿体必须尽快使用，否则非常容易失去活性。
12．双浓度分离法(适合烟草，甜菜和大豆等材料)：
a)在14mL塑料离心管中先加入0.5mL溶液A和2mL溶液B，充分混合均匀，得密度梯度重液。
b)在另一试管中将3mL溶液A和2mL溶液B充分混合均匀，得密度梯度轻液。
c)将密度梯度轻液小心铺在密度梯度重液之上，然后将第10步汇集得到的叶绿体重悬液中的4mL(还剩下2mL)小心铺在密度梯度轻液之上。
d)在水平转子离心机上4℃ 3200g离心15分钟，最上层绿色带含破碎的叶绿体、线粒体和核糖体等，重液和轻液间的绿色带为完整叶绿体。
e)用广口吸管小心将重液和轻液之间的绿色带(叶绿体)转移到新的离心管中，加入三倍体积的预冷的溶液A成分一，轻柔混匀。
f)在水平转子离心机上4℃ 1700g离心1分钟，小心将上清倒出后，在绿色的叶绿体沉淀中加入预冷的0.5mL溶液A成分一，手指轻弹管底使之叶绿体重悬。
g)将叶绿体重悬液转移到1.5mL离心管中并避光保存，也可在相差显微镜下检查叶绿体完整性。叶绿体必须尽快使用，否则非常容易失去活性。所得精提叶绿体可用于后续的光合作用，电子链和磷酸化，跨膜转运，体外叶绿体蛋白合成，蛋白定位等研究。还可用于的叶绿体膜，基质，类囊体，叶绿体DNA和叶绿体RNA纯化。


动植物膜蛋白微量制备试剂盒促销关键词：BTN91204,Animal-Plant Membrane Protein Miniprep Kit,动植物膜蛋白微量制备试剂盒


·Western印迹膜抗体清除剂
编号：BTN80813
英文名称：Western Blot Antibody Scavenger
规格：200mL
在Western膜上完成了一抗二抗结合和后续化学发光检测后，往往还需要检测Actin和Tubulin等表达相对稳定的内参蛋白质或其他蛋白。本产品可以使膜上的、与靶蛋白质结合的一抗二抗从膜上脱落，这样同一张膜可以用于不同的检测反应，比重新跑一块SDS-PAGE更省时省力，同时数据间可比性更强。

产品特点：
1．简单快速，整个过程只需要20分钟。
2．不破坏膜上的蛋白抗原，不导致蛋白信号的减弱。
3．无DTT和b-巯基乙醇等成分，无异味。
4．可以反复使用2-4次。

储存条件：常温运输和保存，有效期一年。

使用方法：
1．将印迹膜浸入Western 印迹膜洗膜液(BTN81211)中，然后放入杂交袋中。如果本产品中提供的杂交带赠品大小不合，则需要自备大小合适的杂交袋。
2．加入30-50mL本产品(具体加入的量根据杂交袋大小决定)，然后热封口。
3．在 50℃水浴中保温30分钟，每10-15分钟手动摇晃杂交袋一次。
4．保温结束后小心取出杂交袋，剪掉一角，将本产品倒入塑料瓶中，4℃密封保存(本产品可以反复使用3-5次)。
5．将印迹膜放入干净托盘中，加入足够Western印迹膜洗膜液(以覆盖住膜表面为准)，在摇床上轻柔摇晃3～5分钟。如此重复三次。如果洗涤三次后印迹膜上还有残留的巯基乙醇味道，则应该继续清洗直到没有味道为止。
6．将印迹膜浸入甲醇原液中30秒。
7．取出后在滤纸上放置15分钟。
8．立即用于后续的Western杂交或包在保鲜膜中在4℃长期保存。

我公司强烈推荐蛋白质研究系列产品，热情期待您的咨询选购动植物膜蛋白微量制备试剂盒促销。