北京现货SuperTOPO-Kan平末端克隆试剂盒优惠

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百奥莱博专业生产销*(代"售")北京现货SuperTOPO-Kan平末端克隆试剂盒优惠，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：北京现货SuperTOPO-Kan平末端克隆试剂盒优惠
产地：国产|进口
英文名：SuperTOPO Blunt Cloning Kit
编号：BTN160684-25K
品牌：百奥莱博
本试剂盒是基于Topoisomerase能够在几秒钟之内高速连接DNA片段的原理开发的无背景克隆试剂盒，它使用了本公司通过定点突变改良的TOPO酶，连接效率比野生型更高。

产品特点：
1.高效快速，连接反应几乎在几秒钟内完成，连接率几乎达到100%。
2.适用于pfu、KOD等高保真聚合酶扩增的平末端片段的克隆。
3. 无杂带或引物二聚体的PCR扩增产物可以不经过纯化直接用于连接反应。
4. 零背景，无需IPTG-X-Gal蓝白斑筛选，故不需要IPTG-X-Gal培养基。
5. 本试剂盒按10μL标准反应体系，有25次和50次两种规格包装供选择。
6. 提供含Amp和Kan两种抗性的载体供选择(BTN160684-25A是含Amp抗性TOPO载体，BTN160684-25K是含Kan抗性TOPO载体)。

试剂盒组成：

 

成分	规格
SuperTOPO-Amp Blunt载体	25μl(BTN160684-25A)
SuperTOPO-Kan Blunt载体	25μl(BTN160684-25K)
连接缓冲液	25μl
M13F引物	50μl
M13R引物	50μl
超纯水	1ml
说明书	1份

注意：BTN160684-25A提供SuperTOPO-Amp Blunt载体，BTN160684-25K提供SuperTOPO-Kan Blunt载体。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

1. 如果是PCR 制备插入片段，所用引物不能磷酸化，使用pfu、KOD等产生平末端片段的高保真DNA聚合酶。为保证扩增产物的完整性，PCR循环结束后，再延伸5-10分钟，确保片段延伸完全。
2.电泳检测并相对定量PCR片段(跟DNA marker 比较)。根据插入片段长度和下表确定每次连接反应需要的最佳用量：

插入片段长度	最佳用量
100-1000bp	20-50 ng
1000-2000bp	50-100 ng
2000-5000bp	100-200 ng

3.在一个干净的塑料离心管中，室温下(不要放在冰上)设置如下连接反应体系：

成分	用量
纯化后的PCR产物	不超过8μl(详见注意事项)
SuperTOPO-Amp Blunt载体或 SuperTOPO-Kan Blunt载体	1μl
连接缓冲液	1μl
超纯水	补到10μL

注意：如果使用未经纯化的PCR产物，则需要加入量不能超过1μL，否则PCR 体系会干扰连接体系。
4. 轻柔吹打混匀后，短暂离心，常温(20-30℃)放置0-5分钟。如果在冬天室温低于20℃，建议使用25℃水浴或金属浴。注意：连接时间超过5分钟的话连接效率会降低。
5. 如果当天不转化，可以将离心管放-20℃保存。如果转化，则取5μL连接液加到50-100μL 刚刚融化的感受态细胞中，轻柔混匀。注意：本产品要求感受态细胞的转化效率不得低于5×10E7cfu/ug。
6. 如果片段长度小于2Kb，则不需要冰浴和热激，直接在离心管中加入500μL 不含抗菌素的SOC或LB培养基，然后取200μL涂盘。也可以先3000g离心2分钟后，弃掉大部分上清，只留约100μl左右，然后重悬细菌后全部涂盘在含Amp(对SuperTOPO-Amp)或Kan(对SuperTOPO-Kan)的培养皿上，37℃过夜培养。
7. 如果片段长度长于2Kb，则按常规转化方式，先冰浴2-30分钟，然后42℃热激30秒，冰上防放置2分钟，再在离心管中加入500μl 不含抗菌素的SOC或LB培养基，37℃ 250rpm培养60分钟，然后取200μL 涂盘。也可以先3000g离心2分钟后，弃掉大部分上清，只留约100μL左右，然后重悬细菌后全部涂盘在含Amp(对SuperTOPO-AmpBlunt载体)或Kan(对SuperTOPO-Kan Blunt载体)的培养皿上，37℃过夜培养。
8. 用M13F/M13R通用引物进行菌落PCR或直接测序来鉴定重组子。

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·Tris缓冲盐溶液(TBS)
编号：BTN131109
英文名称：Tris-Buffered Saline
规格：10包
本产品为免疫印迹绝佳的洗膜缓冲液。

产品特点：
1. 1×TBS含25mM Tris，0.15M的*化*，pH7.2-7.5。
2. 每个干粉混合包装的BupHPack可溶于水中形成500ml 1×TBS。
3. 20×规格提供含有或不含Tween*-20去垢剂的两种包装。

储存条件：常温运输和保存，有效期一年。

·大肠杆菌T1化学感受态细胞
编号：BTN140391
英文名称：E.coli T1 Chemical Competent Cell
规格：0.1mL*10
 本产品是采用大肠杆菌Mach1-T1 Phage Resistant菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的化学转化。

产品特点：
1. 本感受态细胞是目前生长速度最快的感受态细胞，在*苄青霉素平板上，8-9h可见克隆；用于蓝、白斑筛选，12 h可见蓝斑；将过夜培养的单克隆在2ml的LB培养基中培养4-5h即可进行小量质粒提取。
2.适用于高效的DNA克隆和质粒扩增，减少克隆DNA同源重组的发生，提高质粒DNA的产量和质量。
3. 本产品具有T1，T5噬菌体抗性。
4. 使用pUC19质粒检测，转化效率可达109cfu/μg。

菌株基因型：F- φ80(lac Z)ΔM15 ΔlacX74 hsdR(rkmk+)ΔrecA1398 endA1 tonA

储存条件：干冰运输、-80℃保存，有效期半年。

自备试剂：目的DNA、SOC或LB培养基等。

使用方法：
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μL，可以根据实际情况分装使用。
以下实验以50μl感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA，通常100μL感受态细胞能够被1ng超螺旋质粒DNA 所饱和)，用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。
3. 42℃热击45秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。
4. 每个离心管中加入450μl无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素)，混匀后置于37℃摇床，150rpm 振荡培养45分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16小时。

注意事项：
1. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA 总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA 总量较少，可取200-300μl转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少，可通过离心(4,000rpm，2分钟)后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2. 新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
3. 涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。


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