T4 RNA连接酶2(截短型K227Q)品牌

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产供应T4 RNA连接酶2(截短型K227Q)品牌，我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂，价格优惠，欢迎广大科研工作者垂询订购。

名称：T4 RNA连接酶2(截短型K227Q)品牌
编号：BTN130857
品牌：百奥莱博
英文名：T4 RNA Ligase 2(truncated K227Q)
产地：国产|进口
T4 RNA连接酶2(截短型K227Q)，又称T4 Rnl2tr K227Q，可特异地将5´末端预腺苷化的DNA或RNA连接到RNA 3´OH末端。该酶连接时不需要ATP，但需要预腺苷化的接头。T4 Rnl2tr K227Q是T4 RNA连接酶2截短型的点突变体，K227的突变减少了酶、赖*酰及腺苷复合物的形成，也降低了非特异性的连接产物(多连体和环状体)，后者可能是通过降低该酶从接头向RNA5´磷酸基转运腺苷基团的微量活性而实现的。该酶在连接反应中，无需ATP，利用预腺苷化的接头和降低的酶-赖*酰腺苷化活性能将连接背景降为最低。此酶已被用于microRNA克隆中接头的优化连接。

产品用途：
1．将预腺苷化的DNA或RNA序列标签连接到任何RNA 3´末端；
2．将单链腺苷化引物连接至小RNA上，用于cDNA克隆文库构建；
3．将单链腺苷化引物连接至RNA上，用于链特异 cDNA文库构建；
4．无单链和双链DNA核酸外切酶、核酸内切酶、RNase以及磷酸酶的污染。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

我公司的T4 RNA连接酶2(截短型K227Q)品牌，性价比高，货期短，送货上门，欢迎您来电咨询购买，另外，我公司还生产供应销*(代"售")下列产品：

·橙黄G溶液(电泳级)
编号：BTN100948
英文名称：Orange G Solution,electrophoresis grade
规格：10mL
橙黄G分子式是C16H10N2Na2O7S2，分子量为452.36，CAS号为1936-15-8。 黄红色粉末或片状结晶，水溶液为橙黄色，溶于醇为橙色，不溶于酚和*仿，盐*(代"酸")对水溶液无变化，遇*氧化*呈黄红色，遇*氧化*生成结晶性*盐。有刺激性。本产是甲基橙的1%水溶液，用作制备电泳上样液和生物染色剂的母液。其泳动率在0.5-1.4%琼脂糖中相当于50bp dsDNA。

储存条件：常温运输及避光干燥保存，有效期一年。

·一站式MBP标签蛋白纯化套装
编号：BTN130871
英文名称：One-Stop MBP-Tagged Protein Miniprep Pack
规格：2mL
MBP(麦芽糖结合蛋白，Maltose Binding Protein)标签蛋白大小为40 kDa，由大肠杆菌K12的malE基因编码。MBP可增加在细菌中过量表达的融合蛋白的溶解性，尤其是真核蛋白。如果蛋白在细菌中表达，MBP可以融合在蛋白的N端或C端。MBP融合蛋白可通过交联淀粉亲和层析一步纯化，结合的融合蛋白可用10mM麦芽糖在生理缓冲液中进行洗脱。如果要去除MBP融合部分，可用位点特异性蛋白酶切除。可用MBP抗体或表达的目的蛋白特异性抗体检测MBP标签标记的重组蛋白。由于MBP融合蛋白原核表达载体具有表达效率高，易于纯化等优点。在现代分子克隆中MBP常作为融合蛋白被广泛应用。本产品就是专门用于分离纯化MBP融合蛋白的试剂盒，其原理如下：


产品特点：
1．一站式套装，含所需的直链淀粉和琼脂糖介质、溶液和层析柱，操作非常方便。
2．提供 2mL直链淀粉-琼脂糖介质，其最大载量为10mg MBP蛋白/mL介质。
3．采用麦芽糖温和洗脱，无去污剂和变性剂对蛋白活性的影响。
4．本介质可以反复使用多次。

试剂盒组成：

 

成分	规格
直链淀粉-琼脂糖介质	2ml
1 M Tris-HCl(pH7.4)	25ml
0.1 M EDTA溶液	25ml
2 M NaCl溶液	50ml
蔗糖	20g
PMSF(10mg/mL)	1ml
0.1mM MgCl2溶液	50ml
0.1 M麦芽糖溶液	25ml
层析柱(6mL)	1支
说明书	1份

储存条件：常温运输和保存，但介质需4℃保存，PMSF需要-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
1．将直链淀粉-琼脂糖介质充分混匀后，取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中(介质用量需要根据MBP蛋白产量决定，其最大载量为10mg MBP蛋白/mL介质，请根据实验需要取适量的介质加入层析柱中)。
2．用5倍柱体积(柱体积指的是填料介质的体积，下同)自备去离子水洗柱，共3次。
3．用5倍柱体积的新配的结合缓冲液洗柱，进行平衡，使填料介质处于与目的蛋白相同的缓冲体系下，起到保护蛋白的作用。结合缓冲液的配方如下(以10mL为例)：

成分	用量	在结合缓冲液中的浓度
1M Tris-HCl(pH7.4)	0.2mL	20mM
0.1M EDTA溶液	0.1mL	1mM
2M NaCl溶液	1mL	200mM
自备去离子水	8.7mL	-

4．4℃ 5000g离心10分钟收集20mL表达菌液，弃上清，将细胞沉淀(约100mg)悬于2mL冰冷的现配的细胞洗涤液中，4℃ 5000g离心15分钟收集细胞沉淀后，再次悬于2mL冰冷的细胞洗涤液中。(最好用不加诱导物的菌液做对照样。)细胞洗涤液的配方如下(以10mL为例)：

成分	用量	在细胞洗涤液中的浓度
1M Tris-HCl(pH7.4)	0.1mL	10mM
2M NaCl溶液	0.15mL	30mM
自备去离子水	9.75mL	-

5．制备细胞裂解物：
1)如果所用载体不带MBP信号肽序列(如pMAL-c2)
a)超声破碎细胞，功率30 W，保持细胞低温(0℃)，直到在显微镜下看见绝大多数细胞破裂。(超声参数需根据仪器型号自行摸索，但裂解物必须不粘稠，否则会堵塞层析柱。)
b)为使溶液澄清，向上述细胞洗涤液中加入35μl PMSF(10mg/mL)。
c)4℃下13000-15000g离心30分钟，以去除残留细胞和细胞碎片以防堵柱，收集上清样品，留样做 SDS-PAGE电泳对照，其余样品用于纯化MBP融合蛋白，直接进入第6步。
2)如果所用载体带MBP信号肽序列(如pMAL-p2)
a)4℃ 5000g离心15分钟收集细胞，沉淀悬于1mL冰冷的现配的细胞裂解液中。细胞裂解液的配方如下(以10mL为例)：

成分	用量	在细胞裂解液中的浓度
1M Tris-HCl(pH7.4)	0.3mL	30mM
0.1M EDTA溶液	0.01mL	0.1mM
蔗糖	2g	20%(m/V)
自备去离子水	加水到10mL	-

b)加入25μl PMSF(10mg/mL)，室温搅动15分钟，于4℃ 13000-15000g离心10分钟收集细胞。
c)旋动细胞沉淀，加入2mL冰冷的0.1mM MgCl2溶液，4℃搅动10分钟。
d)休克细胞4℃ 13000-15000g离心10分钟，在上清中加入10mM Tris-HCl(pH7.4)(可将1 M Tris-HCl，pH7.4稀释100倍配制而成)至pH为7.4。
e)上清用0.22μm或0.45μm滤膜过滤，滤液用100倍体积的10mM Tris-HCl(pH7.4)(配方如上)4℃透析。
f)收集透析后样品，留样做 SDS-PAGE电泳对照，其余样品用于纯化MBP融合蛋白，直接进入第6步。
6．将样品加到平衡好的直链淀粉-琼脂糖介质中(保证目的蛋白与介质充分接触，以提高目的蛋白的回收率)，收集流出液。
7．用10-15倍柱体积的结合缓冲液(配方见上表)进行清洗，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液。
8．使用5-10倍柱体积的现配的麦芽糖洗脱液洗脱结合的融合蛋白，收集洗脱液(即目的蛋白组分)。麦芽糖洗脱液的配方如下(以10mL为例)：

成分	用量	在麦芽糖洗脱液中的浓度
1M Tris-HCl(pH7.4)	0.2mL	20mM
0.1M EDTA溶液	0.1mL	1mM
0.1M麦芽糖溶液	1mL	10mM
自备去离子水	8.7mL	-

9．将纯化得到的样品(包括流出液、洗杂液和洗脱液)以及原始样品使用SDS-PAGE检测纯化效果。
10．填料介质清洗：依次使用3倍柱体积的结合缓冲液和5倍柱体积的去离子水平衡介质，最后再用5倍柱体积的20%的乙醇平衡，然后保存在等体积的20%的乙醇中，置于4℃保存，防止填料被细菌污染。本介质可重复使用。
蛋白酶切割释放靶蛋白(可选步骤，所用试剂需自备)
11．用适当的蛋白酶切割融合蛋白释放靶蛋白。
1)加入自备的凝血酶、肠激酶或Xa因子(根据融合蛋白中的位点选择)。每毫升介质中加入50单位的溶于1mL PBS溶液的蛋白酶。颠倒离心管数次混匀，室温下振荡2-16小时。
2)4℃以500 g离心5分钟，上清小心转移到新离心管中。
3)用传统的层析方法或SDS-PAGE电泳分离靶蛋白和蛋白酶。


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·粪便RNA柱式提取试剂盒
编号：BTN101109
英文名称：Fecal RNA column Extraction Kit
规格：50次
由于粪便中有机质含量丰富，对RT-PCR等后续反应有极大的抑制作用，所以从粪便中提取高纯度的RNA一直是十分棘手的问题。本产品是在粪便RNA提取试剂盒基础上开发的柱式粪便RNA提取产品。

试剂盒特点：
1. 操作比非柱式法更加简单快速，处理一个样品只需要约十几分钟。
2. 去污染效果好，RNA 纯度更高，平均OD260/280一般都在2.0左右。
3. 得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern杂交、cDNA 合成等实验。
4. 性价比高于进口的柱式粪便RNA提取产品。
5. 试剂无毒无害，环保。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	50ml
酸洗玻璃珠，400μm	25g
溶液B	15ml
溶液C	50ml
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
RNA洗脱液	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输和保存，有效期两年。

使用方法：
1.在自备的3-5mL离心管中称取0.5-1 g 粪便，加入0.5g 玻璃珠和1mL溶液A，盖紧离心盖后震荡器上剧烈震荡5-10分钟。注意：如果放置在低温，溶液A可能会产生沉淀，使用前必须放在65℃水浴使沉淀彻底溶解并充分摇匀后再取用。
2. 稍微静置后将上清液(一般呈棕色)转移至一个干净的1.5mL塑料离心管中。所取上清液不要超过1mL，否则后续操作没有足够空间。
3.在离心管中加入0.3mL的溶液B和0.2mL自备*仿，在振荡器上振荡30秒混匀。振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
4.室温12000rpm离心3～5分钟。
5. 将上清液(约0.6mL)转移到另一干净的1.5mL塑料离心管中，下层有机相和中间层含有DNA、蛋白质和其他杂质，避免触及或吸取。最好留下100μl上清液不取。
6.在上清液中加入等体积的溶液C，用手上下颠倒或振荡器振荡30秒混匀，此时溶液呈均匀的乳浊状。
7.室温12000rpm离心3分钟，两相间将有白色膜状物(蛋白质)形成。
8. 将一半的溶液转移到离心吸附柱中，套入收集管中厚12000rpm室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。
9. 将剩下的一半溶液转移到同一离心吸附柱中，套入收集管中后12000rpm室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。
10. 加0.7mL 通用洗柱液，套入收集管中后室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。
11. 加0.3mL 通用洗柱液，套入收集管中后室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。此步可以省略。
12. 将离心吸附柱套入收集管中后室温离心半分钟，弃含穿透液的收集管。此步干甩十分重要，否则残留的乙醇会影响RNA的使用。
13. 将离心吸附柱套入到一个自备的RNase-free 收集管中，加入30-100μL RNA洗脱液，室温放置1-2分钟。
14. 12000rpm室温离心半分钟，离心管中溶液即为RNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
15. RNA 完整性的电泳检测：如果需要做Northern杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子(BioTechniques，28：414，2000)。
16. RNA产量产率测定：将5-10μl RNA 溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2 之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度(1OD260的RNA=40μg/mL)，进而计算出RNA的产量(浓度X 体积)和产率(RNA产量/组织用量)。
17. RNA 纯度测定：无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响RT-PCR等反应。


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·Oligo快速复性液
编号：BTN130204
英文名称：Oligo Rapid Renaturing Solution
规格：1mL
本产品是精心优化的、专门用于Oligo快速复性的试剂，广泛用于以单链Oligo为材料制备Adaptor、Linker和其他双链Oligo分子，跟各种后续的分子生物学实验兼容，包括文库构建、抑制性差减杂交、AFLP等。本产品即可用于DNA-DNA Oligo复性，也适用于RNA-RNA Oligo和DNA-RNAOligo复性。还适用于带修饰碱基的Oligo的复性。

储存条件：低温运输、-20℃避光保存、有效期一年。

·超快核酸银染试剂盒
编号：BTN81104
英文名称：Rapid Silver Stain for Nucleic Acid
规格：1000mL
核酸银染的原理是银离子(Ag+)可与核酸形成稳定的复合物，然后用还原剂如甲醛在碱性环境下使Ag+还原成银颗粒，可把核酸电泳带染成黑褐色。它主要用于聚丙*(代"烯")酰胺凝胶电泳染色，也用于琼脂糖凝胶染色，其灵敏度比EB高200倍，常用于检测SSR标记、SNP标记。但常规的银染方法由固定、氧化、染色、显影、终止等步骤组成，操作十分繁琐，尤其不适用于大批量实验。为解决此问题，本公司推出本产品。

产品特点：
1.超快，整个过程只需要20分钟。
2. 操作简单，只有染色和显影两步。
3. 灵敏度跟常规方法相当，EB高200倍，能检测到10ng的DNA 条带。
4. 两个成分都是现用现配，可重复性好。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A组分一(干粉)	2g
溶液A组分二，10×	100ml
溶液A组分三，10×	100ml
溶液B组分一，10×	100ml
溶液B组分二	5ml
说明书	1份

注：1000mL规格指可配制的溶液A(染色液)的体积，实际使用次数根据PAGE胶大小不同而不同。

储存条件：常温运输和保存，有效期一年。

使用方法：

一：配制溶液A100mL
需要配制的溶液A(染色液)的体积完全跟PAGE胶的大小相关，一般的mini-PAGE胶需要20-30mL。下面的用量是针对配制100mL溶液A。如果配制的溶液A的体积不是100mL，则需按比例改变各成分用量。在一干净烧杯中加入下列成分搅拌混匀即可。
溶液A需要新鲜配制。

成分	用量
去离子水	80ml
溶液A成分一	0.2g
溶液A成分二	10ml
溶液A组分三	10ml

二：配制溶液B100mL
需要配制的溶液B(显色液)的体积完全跟PAGE胶的大小相关，一般的mini-PAGE胶需要20-30mL。下面的用量是针对配制100mL溶液B。如果配制的溶液B的体积不是100mL，则需按比例改变各成分用量。在一干净烧杯中加入下列成分搅拌混匀即可。
溶液B需要新鲜配制。

成分	用量
去离子水	89.5ml
溶液B成分一	10ml
溶液B组分二	0.5ml

三：染色
1. PAGE电泳结束后，将PAGE胶转移到装有去离子水的瓷盘中，漂洗2次，每次2分钟。
2. 将PAGE胶转移到适当体积的溶液A，使溶液A在轻柔摇晃过程中能够淹没PAGE胶。室温染色时间10分钟。
3. 倒掉溶液A，用去离子水快速漂洗2次，每次半分钟。
4. 将PAGE胶转移到适当体积的溶液B，使溶液B在轻柔摇晃过程中能够淹没PAGE胶。室温摇晃直到颜色显现，一般需要10分钟左右。
5. 将PAGE胶置于适当背景下照相。

北京百莱博科技有限公司是工具酶产品的专业生产供应销*(代"售")商，恭候您的咨询选购T4 RNA连接酶2(截短型K227Q)品牌。