T4 RNA连接酶2(截短型K227Q)厂家

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名称：T4 RNA连接酶2(截短型K227Q)厂家
规格：2000U
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
英文名：T4 RNA Ligase 2(truncated K227Q)
编号：BTN130857
T4 RNA连接酶2(截短型K227Q)，又称T4 Rnl2tr K227Q，可特异地将5´末端预腺苷化的DNA或RNA连接到RNA 3´OH末端。该酶连接时不需要ATP，但需要预腺苷化的接头。T4 Rnl2tr K227Q是T4 RNA连接酶2截短型的点突变体，K227的突变减少了酶、赖*酰及腺苷复合物的形成，也降低了非特异性的连接产物(多连体和环状体)，后者可能是通过降低该酶从接头向RNA5´磷酸基转运腺苷基团的微量活性而实现的。该酶在连接反应中，无需ATP，利用预腺苷化的接头和降低的酶-赖*酰腺苷化活性能将连接背景降为最低。此酶已被用于microRNA克隆中接头的优化连接。

产品用途：
1．将预腺苷化的DNA或RNA序列标签连接到任何RNA 3´末端；
2．将单链腺苷化引物连接至小RNA上，用于cDNA克隆文库构建；
3．将单链腺苷化引物连接至RNA上，用于链特异 cDNA文库构建；
4．无单链和双链DNA核酸外切酶、核酸内切酶、RNase以及磷酸酶的污染。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

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·UTP溶液(100mM)
编号：BTN120626
英文名称：UTP Solution，100mM
规格：0.25mL
本产品纯度在98%以上(HPLC检测)，不含DNA内切酶、DNA外切酶、RNA酶和磷酸酶的污染，可以直接用于体外RNA转录合成。

UTP分子式为C9H12N2O15P3Na3，分子量是550.1，消光系数为10.0×103 M-1×cm-1(pH7.0)，λmax为262nm。

储存条件：低温运输和-20℃保存、有效期一年。

·大肠杆菌BL21-CondonPlus(DE3)-RIPL化学感受态细胞
编号：BTN140378
英文名称：E.coli BL21-CondonPlus(DE3)-RIPL Chemical Competent Cell
规格：10*100μl
本产品来源于Stratagene公司的BL21-Gold菌株，缺少Lon蛋白酶和OmpT蛋白酶，从而减少对重组蛋白的降解，补充大肠杆菌缺乏的4 种稀有密码子(AGA、AUA、CCC、CUA)对应的tRNA(argU、ileY、proL、leuW)，提高外源基因，尤其是富含AT-或GC-的真核基因在原核系统中的表达水平。该菌株染色体整合了λ噬菌体DE3 区(DE3 区含有T7 噬菌体RNA聚合酶)，可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶，可用于pET系列，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达，同时具有四环素，*霉素，链霉素，壮观霉素抗性。本产品由特殊工艺制作，经pUC19质粒检测转化效率高达108cfu/μg。
菌株基因型为：F- ompT hsdS(rB-mB-)dcm+ Tetr galλ(DE3)endA Hte [argU proLCamr] [argU ileY leuW Strep/Specr]。

储存条件：干冰运输、-80℃保存，有效期半年。

自备试剂：目的DNA、SOC或LB培养基等

使用方法：
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl，可以根据实际情况分装使用。
以下实验以100μl感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA，通常100μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA 所饱和)，用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。
3. 42℃热击90秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。
4. 每个离心管中加入450μl 无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素)，混匀后置于37℃摇床，150rpm 振荡培养45分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含有相应抗生素的LB 固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16小时。

注意事项：
1、涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA 总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA 总量较少，可取200-300μl转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少，可通过离心(4,000rpm ，2分钟)后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2、新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
3、涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。
4. 诱导时，IPTG浓度可选(0.1-2mM 均可)。
5. 为获得需要量的蛋白，最佳诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。


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31282-04-9 Hyaromycin B   潮霉素B
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DTT-PBS溶液(10mmol/L)   100ml
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*甲*(代"酚")绿-甲基红指示剂   100ml
四丙基*化铵 Cerium(III) chloride heptahydrate 1941-30-6

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