热稳定无机焦磷酸酶(PPase)品牌

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产销*(代"售")热稳定无机焦磷酸酶(PPase)品牌，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：热稳定无机焦磷酸酶(PPase)品牌
英文名：Inorganic Pyrophosphatase，Thermostable
品牌：百奥莱博
规格：250U
编号：BTN130657
产地：国产|进口
无机焦磷酸酶催化无机焦磷酸盐水解生成正磷*(代"酸")盐，其反应示意图如下：


产品特点：
1．增强DNA复制。
2．100℃加热4小时，该酶仍具有100%活性。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

活性定义：1单位指标准反应条件下[0.5mL反应体系，50mM Tricine(pH8.5)，1mM MgCl2和0.32mM PPi，75℃反应,10分钟]，每分钟催化无机焦磷酸盐生成1μmol磷酸盐的酶量。

来源：重组E.coli菌株，携带从极度耐热的Thermococus litoralis中克隆的无机焦磷酸酶基因。

我公司的热稳定无机焦磷酸酶(PPase)品牌，性价比高，货期短，送货上门，欢迎您来电咨询购买，另外，我公司还生产供应销*(代"售")下列产品：

·超快非醇核酸沉淀剂
编号：BTN60402
英文名称：Magic Solution DNArc
规格：30次
本产品是我司独创的一管式非醇DNA/RNA沉淀剂，其主要特点超快速度,是只需要离心2分钟即可快速沉淀回收溶液中的单双链DNA或RNA(包括探针)，可广泛用于DNA/RNA的去盐，去蛋白,反应纯化，浓缩等。

产品特点：
1. 明显提高DNA或RNA沉淀的得率和DNA或RNA提取的产率。
2. 本产品无核酸污染也无DNA酶和RNA酶活性。
3. 痕量DNA和RNA(20pg)回收率达95～98%。
4. 不影响酶切、连接、转录、PCR、转化、转染等实验。
5. 不影响电泳和DNA-蛋白相互作用。

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。溶液A呈红色，如果颜色发生变化，则表示pH已经改变，请弃之不用。溶液B为无色液体，会在瓶底产生少量晶体状产生沉淀，用前无需溶化，直接取上清液使用)。

使用方法：
1.将1/10体积的溶液A加入到DNA溶液中(包括PCR，酶切反应液等)，振荡混匀。如果回收20 Kb以上的DNA片段，混匀时需要温和；对20Kb以下的DNA片段，可以剧烈震荡。
2.室温静置至少2分钟。此步十分关键，不能省略而直接离心。
3.13000 g室温离心5分钟后，小心吸弃上清。
4.加入0.8mL溶液B，充分震荡混匀。
5.13000 g室温离心2分钟，小心吸弃上清。
6.再用0.2mL溶液Ｂ重复第4-5步一次。
7.小心吸弃上清后即得纯化的DNA沉淀，加入少量TE或水，充分吹打溶解。如果最后还会有少量白色不溶沉淀，属于正常现象。

疑难解答：
Q：电泳为何不能检测到回收的DNA？
A：最可能原因是各步加入溶液后没有充分震荡混匀，其次是沉淀在各步吸弃上清时候不小心吸走而丢失，三是溶液A的pH发生改变,四是DNA溶液的盐离子浓度或pH值太高。
Q：电泳时为何有残留荧光物在加样孔中？
A：可能是琼脂糖凝胶中的杂质吸附的DNA，吸取 DNA样品时最好先短暂离心，只取上清液。这些不溶杂质一般不影响后续反应。使用高纯度的琼脂糖可以减少杂杂质的污染。百奥莱博一般使用 OXOID的琼脂糖，得到的DNA可以用于常见的分子生物学后续反应。
Q：本产品与贵公司的Magic Gel DNArc是否相同。
A： Magic Gel DNArc 有离心管和特殊的融胶液，专门用于从胶中回收DNA；本产品用于从反应液中纯化回收DNA，不需要另外提供离心管和融胶液。Magic Gel DNArc的溶液B和溶液C 分别与本产品的溶液A和溶液B类似但浓度不完全相同，建议不要互用。


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·DNA非变性PAGE上样液
编号：BTN100875
英文名称：DNA Native PAGE Loading Buffer
规格：1.5mL
本品是2×的DNA PAGE非变性电泳上样液，含有盐、EDTA和染料等。

产品特点：
1. 即开即用，不需要单独配制各种溶液。
2. 使用简单，电泳的DNA样品与本上样液1：1混合后即可直接上样。
3.染料分子小，染色时不会干扰DNA条带的观察。
4.可用于Gel-Shift等相关实验。
5.跟本公司DNA PAGE非变性电泳套装兼容。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

·10×TBE电泳液
编号：BTN90313
英文名称：DNA Native PAGE Loading Buffer
规格：250mL
本品是2×的DNA PAGE非变性电泳上样液，含有盐、EDTA和染料等。

产品特点：
1. 即开即用，不需要单独配制各种溶液。
2. 使用简单，电泳的DNA样品与本上样液1：1混合后即可直接上样。
3.染料分子小，染色时不会干扰DNA条带的观察。
4.可用于Gel-Shift等相关实验。
5.跟本公司DNA PAGE非变性电泳套装兼容。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

·5´末端同位素标记试剂盒
编号：BTN131036
英文名称：DNA 5´End-Labeling Kit
规格：20次
本产品为DNA 5´末端标记系统，利用T4 Polynucleotide Kinase(T4多聚核苷酸激酶)和［γ-32P］ATP 对粘性末端或平末端的DNA或RNA的5´末端进行高效标记反应。原理如下：


产品特点：
1. 使用本试剂盒之前，不需要对 5´末端的磷酸基团进行去磷酸化处理，因为使用的kinase 能使5´末端的磷酸与[γ-32P]ATP的γ-磷酸进行交换。
2. 合成的单链或双寡核苷酸的5´末端游离的OH基团都能通过Kinase反应被标记(或者只是简单的磷酸化)。
3. 提供的两种反应液使交换反应和磷酸化反应都能高效进行，均能得到大于106 cpm/pmol(5´-end)的比活性。

试剂盒组份：

 

成分	规格
T4 多聚核苷酸激酶(10U/μL)	20μl
5×交换反应缓冲液	100μl
10×磷酸缓冲液	50μl
Control DNA	20μl
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

一、交换反应
1. 实验前需自备的试剂：7 M 醋酸铵、100%乙醇、70%乙醇等
2.在微量离心管中制备下列反应液：

成分	加入的体积
自备的5´磷酸化DNA片段	14μL(≤5 pmoles的5´末端)
5×交换反应缓冲液	5μL
[γ-32P]ATP	5μL
T4 多聚核苷酸激酶(10U/μL)	1μL
灭菌的超纯水	补足到25μL

注：5 pmoles的5´末端约等于0.17μg的长100bp的双链DNA。
3. 37℃反应30分钟。
4. 70℃加热5～10分钟使酶失活。
5. 加入10μl的7 M CH3COONH4(pH4.5)。如使用CH3COONa做乙醇沉淀时使其终浓度达300mM。
6. 加入87.5μl(2.5倍)的冷无水乙醇，-20℃放置30～60分钟。
7.离心回收沉淀，用 70%的冷乙醇清洗沉淀，真空干燥。
8. 用适当 Buffer 溶解沉淀。
注：通过第5～8 步操作几乎可以除去大部分未反应的[γ-32P] ATP，如要完全将其除去时，乙醇沉淀后用凝胶过滤等方法精制即可。如需用*酚抽提除去蛋白质时，请在第8 步之后进行。

二、磷酸化反应标记

A. 去磷酸化反应
1. 实验前需自备的试剂：TE 饱和酚/*仿、3 M NaCl 、100%乙醇、70%乙醇、牛小肠碱性磷酸酶(CIAP)等
2.在微量离心管中制备下列反应液：

成分	加入的体积
自备的DNA片段	133μL(≤10μg)
1M Tris-HCl，pH8.0	15μL
牛小肠碱性磷酸酶(CIAP，10～20U/μL)	2μl
灭菌的超纯水	补足到150μL

3. 50℃反应30分钟。
4. 加入150μl的TE 饱和酚/*仿/异戊醇(25：24：1)，充分混匀。
5.离心，取上层(水层)移到另一个微量离心管中。
6. 重复操作 4～5。
7. 加入7.5μl的3 M NaCl(最终浓度150mM)。
8. 加入375μl(2.5倍量)的冷无水乙醇，-20℃放置30～60分钟。
9.离心回收沉淀，用 1mL 70%的冷乙醇清洗后，沉淀真空干燥。
10. 使用 20μl的TE Buffer 溶解沉淀。

B. 磷酸化反应(前反应)
1.在微量离心管中制备下列反应液：

成分	加入的体积
自备的DNA片段	20.5μL(≤5 pmoles的5´末端)
10×磷酸缓冲液	2.5μL
[γ-32P]ATP	1μL
T4 多聚核苷酸激酶(10U/μL)	1μL
灭菌的超纯水	补足到25μL

2. 37℃反应30分钟。
3.下面的操作与交换反应的第4-8 步操作相同。

三、合成DNA 寡核苷酸的标记
1.在微量离心管中制备下列反应液：

成分	加入的体积
Oligonucleotide DNA with free 5´-OH(5～10 pmoles)	≤3μL
10×磷酸缓冲液	2.5μL
[γ-32P]ATP	1μL
T4 多聚核苷酸激酶(10U/μL)	1μL
灭菌的超纯水	补足到25μL

2. 37℃反应30分钟。
3.下面的操作与交换反应的第4-8 步操作相同。

四、合成DNA 寡核苷酸的标记
当掺入水平很低的时候，需要使用本步骤，即通过体积排阻色谱或过滤试剂盒除去未反应的标记。Sephadex G-50 层析柱(需另购)对于去除未掺入的dNTPs效果很好，它还能大幅减少小于20个碱基的DNA 寡核苷酸和小于20bp的双链DNA的量。使用之前需要在70℃加热5～10分钟以使T4 多聚核苷酸激酶失活。Sephadex G-25 层析柱可以用来纯化长度不小于10个碱基的寡核苷酸。

注意事项：
1.缓冲液可在室温融解。融解后立即置于冰中，使用前充分混匀。
2. 5×交换反应缓冲液于-20℃冻结保存时会有白色浑浊出现，但不影响反应效果。
3.酶切得到的DNA片段需经乙醇沉淀等方法纯化。
4. 当用于交换反应的DNA在5 pmoles以上(约1,000bp以上)时，标记效率有时会低于106 cpm/pmol。
5. 如果交换反应所用 DNA低于500bp时，标记效率有时会有所降低。
6. 若不进行放射线标记，仅使用本试剂盒做5´末端磷酸化反应时，反应体系中的［γ-32P］ATP可用5μl的10mM ATP 代替。
7. 磷酸化反应时的［γ-32P］ATP可用［γ-35S］ATP 替代。

使用举例：
按照使用方法中交换反应和合成DNA 寡核苷酸的标记的实验操作，取λ-BstP I，λ-Hpa I，λ-EcoT22 I 各3 pmols，用［γ-32 P］ATP 通过正向磷酸化反应或交换反应标记。各DNA片段的放射自显影结果如下所示：



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·LB培养基
编号：BTN100602
英文名称：Lysogeny Broth Medium，Powder
规格：250g
LB培养基是由美国科学家Giuseppe Bertani在1951年独立开发。但现在常用的LB配方是由Miller修改而成，主要是去掉Glucose并把NaCl浓度从0.5 g/L增加到10 g/L。本产品就是根据Miller配方制备的干粉型培养基。

储存条件：常温运输及保存，有效期两年。

使用方法：称取本产品25.0 g于1 L蒸馏水或去离子水中，加热溶解，分装，121℃高压灭菌15分钟，备用。

·*苄青霉素溶液
编号：BTN60206
英文名称：Ampicillin Solution
规格：10mL
本产品是浓度为50mg/mL的*苄青霉素溶液，用于分子生物学和组织培养(防止微生物污染和抗性筛选)。

作用原理：能使细菌细胞膜内层的transpeptidase(转肽酶)失活从而抑制细菌细胞壁的合成。

抗性机制：抗性基因bla能特异性表达外周质酶β-lactamase(β-内酰胺酶)，该酶可切割*苄青霉素的β-内酰胺环从而使之失活。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期6个月。

我公司正在打折促销工具酶全系列产品，恭候您的咨询选购热稳定无机焦磷酸酶(PPase)品牌。