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- 百奥莱博
- 北京
- BTN90801A-WNG
- 2025年07月15日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
低温运输
- 保质期：
长期
- 英文名：
One-Stop TA Cloning Kit(A)
- 库存：
753
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
百奥莱博专业生产销*(代"售")一站式TA克隆试剂盒哪里卖，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。
北京百奥莱博科技有限公司专业生产供应一站式TA克隆试剂盒哪里卖，产品信息：
类别：克隆与表达
英文名：One-Stop TA Cloning Kit(A)
| 产品名 | 产品编号 | 包装规格 |
| 一站式TA克隆试剂盒 | BTN90801A | 20次 |
编号：BTN90801A
产地：国产|进口
规格：20次
品牌：百奥莱博
英文名：One-Stop TA Cloning Kit(A)
TA克隆就是利用T载体两个3´端各带有一个T突出，而PCR扩增产物两个3´端各带有一个A突出的特点，在DNA连接酶的作用下，将PCR产物克隆到T载体中的过程，它是克隆PCR扩增产物的主要手段。
产品特点：
1.一站式，用户只需要准备PCR产物即可进行TA克隆。
2. T载体由Xcm I酶切方法制备，两个5´端100%含T突出，自连率几乎为零。
3. 克隆效率高，一次TA克隆实验一般能得到上百个重组子。
4. 阳性率高，一般能到90%以上，大大缩短了筛选工作。
5. 提供供两次实验用的对照插入片段，方便分析实验数据。
6. 插入位点两侧有对称的常见酶切位点(如EcoR I)，便于对克隆的PCR片段进行近一步的分析。
7. 克隆位点两侧分别有T3和T7 RNA聚合酶启动子，便于用克隆的PCR片段制备RNA探针。
8.可以使用pUC/M13 Forward和Reverse测序引物测定插入片段的序列。
9. T克隆位点位于β-半乳糖苷酶的α-肽编码区内，可以进行蓝白斑筛选。
10.含有丝状噬菌体f1 复制起始子，可以制备单链DNA。
| 成分 | 规格 |
| 即用型蓝白T载体(50ng/μL) | 20μl |
| 对照插入片段(50ng/μL) | 5μl |
| T4快速连接缓冲液，2× | 100μl |
| T4 DNA连接酶(5U/μL) | 30μl |
| 超纯水 | 1ml |
| 高效感受态细胞 | 100μL×10只(只B型有) |
| 说明书 | 1份 |
储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。感受态细胞需要干冰运输，-70℃保存，有效期6个月。
自备试剂：插入片段。
使用方法：
一：PCR产物的纯化和定量注意事项
1. 由于PCR体系中有大量会抑制DNA连接反应的dATP、还有一些可能在电泳胶上不一定会显示出来的非特异性扩增产物和引物二聚体，所以PCR产物必须用胶回收方法制备才能用于本试剂盒的连接。可以分别使用本公司柱式DNArc(BTN60202)和PAGE DNArc(包括柱式PAGE DNArc)从琼脂糖胶和PAGE胶上纯化回收PCR片段。具体操作见相关产品使用手册。
2. 琼脂糖胶回收的电泳缓冲液最好不要使用TBE缓冲液，因为它会影响DNA的胶回收效率。
3. 为避免UV对DNA的伤害，切胶最好在日光下进行(使用百奥莱博的绿如蓝染料的话，可以直接在黑色背景下看见DNA条带，不需要紫外光)。如果使用EB或其他染料，必须在紫外下切胶时，最好选择长波(360nm)紫外灯并以最快速度切胶，文献报道短波UV(300nm和240nm)会使DNA连接效率降低400多倍。使用短波UV时，可以使用百奥莱博的DNA防护剂UV Scavenger(BTN60601)减少伤害。
4. PCR片段的体积越小越便于后续操作。洗脱PCR片段时，用最少量的洗脱液洗脱。
本试剂盒要求PCR回收片段的浓度最好为50ng/μL。如果浓度不够，最好用醇沉淀法沉淀后直接在管内设置连接反应，也可以使用本公司的核酸浓缩剂(BTN110801)直接浓缩。
5. 为准确定量回收的PCR产物同时又节约样品，最好使用微量分光光度计(只需用1μL样品测量)。如果分光光度计需要大量样品，建议使用电泳法定量：将回收的PCR片段与浓度已知的DNA Marker在含EB或绿如蓝染料的琼脂糖凝胶中电泳，通过比较DNA条带的相对荧光强度而估测PCR产物的浓度。
二：连接反应
1. 短暂离心装有蓝白T载体、连接缓冲液和T4连接酶的离心管。
2.在三个离心管中加入下列成分(注意，对照可以不做，在出现问题时再做)：
| 成份 | 样品管 | 阳性对照管 | 自连对照管 |
| T4快速连接缓冲液，2× | 5μl | 5μl | 5μl |
| 蓝白T载体(50 ng/μL)(=0.03 pmol/μL) | 1μl | 1μl | 1μl |
| 自备PCR 纯化产物(0.03-0.1 pmol/μL) | Xμl(见注) | 不加 | 不加 |
| 对照插入片段(50ng/μL)(=0.06 pmol/μL) | 不加 | 1.5μl | 不加 |
| T4 DNA连接酶(5U/μL) | 1-1.5μL | 1-1.5μL | 1-1.5μL |
| 超纯水 | 补到10μL | 补到10μL | 补到10μL |
注: 如何根据T载体的用量计算PCR纯化片段的最佳用量？
第一：确定插入片段与载体的最佳摩尔比，在本产品的T载体的长度固定(3Kb)时，最佳摩尔比跟插入片段的长度关系如下：
| 插入片段长度 | 与载体的摩尔比 |
| 1Kb以下 | 2:1或3:1 |
| 跟T载体接近(±1Kb) | 1:1 |
| 比T载体长1Kb或更多 | 1:2或1:3 |
第二：根据选定的最佳摩尔比按下面方程式计算用量：
本产品提供的T载体长度为3 Kb，推荐用量为50ng，如果PCR片段长度为0.5 Kb，最佳摩尔比设定为3:1，则其用量为:
3. 用移液器吹打连接反应液使之混匀，然后放置在16℃孵育30分钟-过夜。
4. 65℃5分钟灭活连接酶后直接用于转化或-20℃保存。
三：细菌转化及筛选(仅供参考，本产品不提供相关试剂)
1. 将100μl转化效率在1×108 cfu/μg以上的感受态细胞于冰上解冻。
2. 取5-10μl连接产物加入到感受态细胞中，轻轻旋转几次以混匀内容物。
3.在冰上放置30分钟。
4. 将离心管放42℃热休克90秒，然后快速将其转移到冰浴中放置1～2分钟。
5. 每管中加900μl LB培养基，37℃振荡培养1小时复苏细胞。
6. 将100μL复苏涂布到含Amp的LB琼脂平板上(也可加上X-gal和IPTG)。
7.室温4,000rpm离心剩余的900μl复苏细胞5分钟，弃去800μl上清，用剩余100μL培养基重悬细胞并涂布到含Amp的LB琼脂平板上(可加X-gal、IPTG)。
8. 将平板置于室温直至液体被吸收。此步非常重要，否则培养板将在37℃排除水分，细菌将随水在培养基上到处游动，不能形成单个菌落。
9. 倒置平皿，于37℃培养，12～16小时后可出现菌落。一般情况下阳性对照组总共会有上千个菌落(100μl转化液产生的菌落数×10)，自联对照只有少数几个菌落，样品组的菌落数取决于PCR回收片段的质量。
10. 按常规方法筛选重组子。
MCS位点：
一站式TA克隆试剂盒哪里卖专业优质供应商：北京百奥莱博科技有限公司
关键词：BTN90801A,One-Stop TA Cloning Kit(A),一站式TA克隆试剂盒
一站式TA克隆试剂盒的不同等级：
除了优级纯、分析纯、化学纯、实验试剂外，目前市场上尚有：基准试剂（PT）：专门作为基准物用，可直接配制标准溶液。光谱纯试剂（SP）：表示光谱纯净。但由于有机物在光谱上显示不出，所以有时主成分达不到99.9%以上，使用时必须注意，特别是作基准物时，必须进行标定。纯度远高于优级纯的试剂叫做高纯试剂（≥ 99.99%）。
一般化学试剂的品级：一级试剂、二级试剂、三级试剂、四级试剂
国内标准名称：优级纯（保证试剂）、分析纯、化学纯 、实验试剂
国内标签颜色：绿色、红色、蓝色、中黄色
想要了解更多关于一站式TA克隆试剂盒哪里卖的价格、品牌、厂家、说明书、促销信息，请和我们联系。此外我公司还销*(代"售")下面的产品：
| 编号 | 类别 | 名称 |
| BTN131195 | 工具酶 | Deep Vent DNA聚合酶 |
| BTN91204 | 蛋白质研究 | 动植物膜蛋白微量制备试剂盒 |
| BTN130883 | 蛋白质研究 | 磷酸化蛋白纯化试剂盒 |
| BTN90314 | DNA纯化 | 柱式尿液DNA提取试剂盒 |
| BTN90503 | 核酸电泳和回收 | 电泳级甘油 |
| BTN60105 | 克隆与表达 | 平末端DNA加A试剂盒 |
| BTN51104 | 克隆与表达 | B载体 |
| BTN130868 | 工具酶 | 人二硫键异构酶 |
| BTN100809 | 探针标记及检测 | SSPE溶液，20× |
| BTN111205 | 其他生化试剂 | DNA洗脱液2.0 |
| BTN90602J | 核酸电泳和回收 | DNA marker(λ-EcoT14 I) |
| BTN130943 | DNA纯化 | Southern级真菌DNA提取试剂盒 |
| BTN100935 | RNA纯化 | 超纯水 |
| BTN111009 | 基因组研究 | 端粒酶重复片段扩增试剂盒(TRAP试剂盒) |
| BTN90705 | RNA纯化 | 柱式土壤RNA提取试剂盒 |
| BTN3071 | RNA纯化 | 血液RNA提取试剂盒 |
| BTN130918 | 核酸扩增(PCR) | dITP溶液(2.5mM) |
| BTN81109B | 克隆与表达 | 酵母化学感受态细胞制备试剂盒(B型) |
| BTN120686 | 克隆与表达 | 细胞松弛素B溶液 |
| BTN80905 | RNA纯化 | 大提柱式细菌RNA提取试剂盒 |
| BTN80909 | 其他生化试剂 | IPTG溶液 |
| BTN131108 | 蛋白质研究 | ONPG干粉 |
| BTN70503B | 核酸电泳和回收 | DNA marker(100-600bp) |
| BTN130665 | 工具酶 | Cre重组酶 |
| BTN131282 | 其他细胞生物学试剂 | 多聚甲醛-磷酸缓冲固定液 |
| BTN130606 | 工具酶 | 全血直接扩增Taq DNA聚合酶 |
| BTN131209 | 工具酶 | MMLV逆转录酶(无RNase H活性) |
| BTN120402 | 克隆与表达 | PCR专用LIC克隆套装 |
| BTN90602E | 核酸电泳和回收 | DNA marker(λDNA/BstE II) |
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