大肠杆菌BL21(DE3)化学感受态细胞 克隆与表达

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名称：大肠杆菌BL21(DE3)化学感受态细胞 克隆与表达
英文名：E.coli BL21 (DE3) Chemical Competent Cell
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口
规格：0.1mL*10
本产品是大肠杆菌BL21(DE3)菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的热击转化。使用pUC19质粒检测本产品，转化效率可达107。BL21(DE3)菌株适合表达非毒性蛋白。
该感受态细胞用于以T7 RNA聚合酶为表达系统的高效外源基因的蛋白表达宿主。T7噬菌体RNA聚合酶基因的表达受控于λ噬菌体DE3 区的lacUV5启动子，该区域整合于BL21的染色体上。
菌株基因型为：F-ompT hsdSB(rB-mB-)gal dcm(DE3)

储存条件：干冰运输、-80℃保存，有效期半年。

自备试剂：目的DNA、SOC或LB培养基等。

使用方法：
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μL，可以根据实际情况分装使用。
以下实验以50μL感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA，通常100μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA 所饱和)，用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。
3. 42℃热击45秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。
4. 每个离心管中加入450μl 无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素)，混匀后置于37℃摇床，150rpm 振荡培养45分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB 固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16小时。

注意事项：
1. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA 总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA 总量较少，可取200-300μl转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少，可通过离心(4,000rpm，2分钟)后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2. 新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养
3. 涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

更多有关大肠杆菌BL21(DE3)化学感受态细胞 克隆与表达的价格及使用说明等，请联系我们的业务经理王欣女士咨询，我公司还销*(代"售")以下产品：
BTN130621 Taq DNA连接酶 Taq DNA Ligase
L-鼠李糖 2,4-Dimethoxybenzaldehyde 10030-85-0
2,6-二甲氧基-β-环糊精 Galactose oxidase 51166-71-3
PY01-043  铬酸*  500克  
ARB12625 大鼠维生素D2(VD2)ELISA代测服务 Rat vitamin d2,vd2 ELISA KIT
56-41-7 L-Alanine L-丙*酸
ARB11444 人核基质蛋白22(NMP-22)酶免分析 Human nuclear matrix protein 22,nmp-22 ELISA KIT
HC0313 Genex单道可调移液器
脱落酸 BDU 14375-45-2
SJ0841 胎牛血清(北美血源)
NF-207 羊抗人IgA血清
ARB11269 人骨形成蛋白6(BMP-6)免费代测 Human bone morphogenetic protein 6,bmp-6 ELISA KIT
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ARB11857 人糖皮质激素(GC)elisa检测说明书 
HC0145 湿盒避光
BTN3671 血液DNAOUT Blood DNAOUT
14375-45-2 脱落酸 Abscisic acid (ABA)
8007-47-4 加拿大树胶 Canadabalsam
6226-79-5 Ponceau S  丽春红S
加替沙星 5′-AMP 112811-59-3
ARB10994 人泛素分解酶(DUB)ELISA检测服务 Human deubiquitinating enzyme,dub ELISA KIT
T104 Taq Platinum DNA Polymerase
ARB11163 人疟疾(MAlArIA)酶免分析 
ARB11381 人总胆固醇(TC)酶标法分析 Human total cholesterol,tc ELISA KIT
BTN60707 细菌DNAOUT Bacterial DNAOUT
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·硫*(代"酸")新霉素干粉
编号：BTN60203
英文名称：Neomycin Sulfate Powder
规格：1g
本品为白色或类白色的粉末，极易引湿，水溶液显右旋光性。在水中极易溶解，在乙醇、乙*(代"醚")、丙*(代"酮")或*仿中几乎不溶，有毒。

作用原理：通过结合于70S核糖体亚基阻碍蛋白质合成。高浓度的新霉素可导致真菌细胞毒作用，这是由于它和真核线粒体核糖体(与原核核糖体相似)相互作用，与真核核糖体低亲和力。

抗性机制：抗性基因aph 来于Tn5，编码*基糖苷磷酸转移酶元，它使硫*(代"酸")新霉素失活。

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

·重组蛋白L
编号：BTN131082
英文名称：Peptostreptococci protein L
规格：1mg
本品为重组蛋白L，纯度大于90%，带6×HIS标签，分子量为40kD。

储存条件：-20℃保存，有效期1年。

·AMPPD
编号：BTN131143
英文名称：Peptostreptococci protein L
规格：100mg
AMPPD的CAS号是122341-56-4。常用做碱性磷酸酶的化学发光底物，其发光的速度取决于碱磷酶的浓度。当碱磷酶偶合到杂交的探针时，便可以通过此系统检测到杂交分子的存在量。

储存条件：低温运输，4℃保存，有效期一年。避免长时间暴露于光线下，请勿冷冻。

·DNA marker(200-5000bp)
编号：BTN70503S
英文名称：DNA ladder(200-5000bp)
规格：50次
 本系列产品用作凝胶电泳中双链线状DNA的分子量大小参照。它们是由一系列大小不同的单一DNA片段混合组成。成分中已经含有上样缓冲液，所以可以直接上样电泳。得到的电泳条带长度准确，明亮清晰，背景较低，稳定性很好。每次加样量为5μL，可用于相对定量。本系列产品与各种琼脂糖和各种电泳缓冲液兼容。

储存条件：低温运输、-20℃保存，有效期一年。

使用方法：直接上样电泳，每次加样量为5μL。

使用效果：

注：1500bp条带为20ng/uL,其余每条带为10ng/uL

疑难解答：
a)如对带型要求较高，建议使用0.8-1.5%琼脂糖凝胶(对SuperBuffer-2缓冲液，电压为250-400V)或1.5-2.0%琼脂糖凝胶(对TAE或TBE缓冲液，电压为80V)，同时适当延长电泳时间。
b)电泳图象的质量与琼脂糖、电泳缓冲液有关。请采用高质量的琼脂糖，同时要经常更换电泳缓冲液。
c)本产品条带均匀，亮度相当，但在EB胶中长时间电泳有可能会出现250bp以下的条带变淡。可以通过先电泳再染色，加大EB浓度等方法解决。

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