SP6体外转录试剂盒折扣价

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北京百奥莱博科技有限公司专业生产供应SP6体外转录试剂盒折扣价，产品信息：

类别：核酸扩增(PCR)

英文名：SP6 in vitro Transcription Kit

产品名	产品编号	包装规格
SP6体外转录试剂盒	BTN91107	50次

品牌：百奥莱博

英文名：SP6 in vitro Transcription Kit

产地：国产|进口

规格：50次

本试剂盒是基于SP6 RNA聚合酶的RNA体外转录试剂盒，它利用含有SP6启动子的模版DNA，以NTP为底物，从SP6启动子下游开始合成与模版DNA中一条链互补的RNA，简单快速获得大量的RNA分子。

 

产品特点：

1. 即开即用，用户只需提供含SP6启动子的DNA模板即可以进行体外转录实验，不需要单独准备每一个成份。

2. 单溶液预配液，减少加样次数，避免了操作误差，增加了可重复性。

3. 模版DNA可以是线性化的质粒DNA，也可以是PCR扩增产物。

4.可以合成的RNA的最佳长度在20nt到2000nt之间。

5.产品配方经过精心优化，每μg DNA模版可以合成2-6μg RNA。

 得到的RNA可以用于RNA 结构研究、核酶生物化学、体外翻译、RNA-蛋白质相互作用、反义技术、SELEX技术和RNA干扰(RNAi)等实验。

 

试剂盒组成：

 

成分	规格
转录预配液(2×)	0.5mL
阳性对照DNA(1.3 kb片段)	20μL(10 ng/μL)
SP6 RNA聚合酶混合液	50μl
RNase-free水	1ml
说明书	1份

 

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

 

使用方法：

一、制备DNA模板

PCR片段和质粒DNA都可以用作体外转录的模板，但是必须注意以下几点。一是必须使用线性化的DNA。如果是质粒DNA，则必须先用适当的限制性内切酶切成线状。二是需要转录的DNA序列的上游必须有SP6启动子。如果模板是PCR产物，则可以在设计引物时将SP6启动子序列(5´ATT TAG GTG ACA CTA TAG AGN G 3´)加上，转录其实是从3端G AGN G中的第一个G开始。如果是将DNA片段克隆到载体上，则需要选择有SP6启动子的载体，并且克隆位点必须位于SP6启动子下游。三是需要转录的DNA序列的下游端最好不要是3´突出。如果是3´突出(如选择了Pst I来线性化质粒)，则最好用T4 DNA聚合酶修平。四是必须保证DNA模板中没有RNase。由于提取质粒DNA的过程中一般要使用大量的RNase A，因此质粒DNA一般都有严重的RNase A污染，所以在用作模板前，最好采取胶回收得方法回收质粒DNA。并且加入少量总RNA一起保温，然后电泳检测RNA是否被降解，以此判断纯化的DNA模板是否有残留RNase A。

二、体外转录反应

1.在一个RNase-free的塑料离心管中，在室温下(不是在4℃下)按次序加入下列成分：

 

成分	加入量	备注
DNA模板	xμL	总量在50 ng-1μg(如果模板是PCR片段，建议用50 ng左右；如果模板是质粒DNA，建议用1μg左右；如果用本产品提供的阳性对照，建议用4μL)
SP6转录预配液(2×)	10μl	本成分还含其他促进剂，所以是混合物
RNase-free水	补水到20μL

注：此为20μL反应体系的用量，对其他反应体系，各成分的用量可以按比例增减。如果需要标记RNA探针，则需要订购NTP分开的试剂盒。如果需要得到加帽RNA，则需要加入自备的加帽修饰核苷酸(本公司有各种加帽修饰核苷酸)。

2. 37℃保温1-2小时。注意：延长保温时间并不能提高产量。

3. 70℃加热10分钟灭活SP6 RNA聚合酶。

4. 取1-3μL电泳检测转录效果。一般1μg DNA可以合成 5-10μg的RNA。

5. 得到的RNA可以放-80℃保存。

 

若需进一步去除DNA模板，可参考下列操作步骤，但所用试剂需另行购买，本试剂盒不提供。

1.在体外转录体系中加入3-5U自备的RNase-free DNase(BTN90903；3-5U/μL)。

2. 37℃保温15-30分钟。

3. 补水到100μL。

4. 用等体积(100μL)的Tris饱和酚-*仿抽提一次去除残留的DNase和RNA聚合酶。

5.在上清中加200μL自备的微量核酸沉淀剂(BTN50903；用前需要摇晃混匀)，振荡后15000rpm离心3～5分钟，弃上清。

6. 加入1mL 75%乙醇，震荡10秒后15000rpm离心3～5分钟，弃上清。

7. 短暂离心数秒，用枪头吸弃上清。

8. 晾干半分钟，所得沉淀即去除DNA模板后的RNA。可溶于RNase-free水中后立即使用或放-80℃长期保存。

 

疑难解答：

1. 没有RNA产物。最常见原因是模板有RNase污染，可用纯化的RNA跟模板DNA一起保温，再检测RNA是否降解。还可以增加RNase Inhibitor用量，本试剂盒缓冲液和酶混合液中有RNase inhibitor，如果模板RNase污染严重，可能需要用户补加RNase inhibitor。

2. RNA产量低。最常见的原因是DNA模板。在转录序列的第一个和第二个碱基最好都是G，在前14个碱基内避免有U存在。

3. RNA长度比预期的短。可能是模板序列中有SP6 RNA聚合酶的终止序列。可以改用SP6体外转录试剂盒(启动子也必须改成SP6启动子)。

4. RNA长度比预计的长。SP6 RNA聚合酶跟Taq DNA聚合酶一样，有不依赖于模板的加尾功能，最多有一半的RNA可以带一个或两个碱基的尾巴。如果RNA长度比预计的长很多，使用的模板又是质粒DNA，则可能是质粒DNA线性化不彻底。

5. 5´单磷酸还是三磷酸。如果使用GTP，则得到的RNA是三磷酸，体外转录时如果保温时间太长(如12小时)，则有50%的三磷酸会变成单磷酸。如果在转录体系中加入GMP，则SP6 RNA聚合酶将优先使用GMP，所得RNA产物中5´端是单磷酸的比例将大大增加。

6. 如何得到带帽RNA？需加入带帽NTP类似物即可，本公司提供5种供选择。

SP6体外转录试剂盒折扣价专业优质供应商：北京百奥莱博科技有限公司

关键词：SP6 in vitro Transcription Kit,SP6体外转录试剂盒,BTN91107

我公司始终坚持“创新，品质，服务，节约，敬业，感恩”的理念。吸收新创意，严把质量关口，全方位的服务跟踪，坚持做出高品质产品。本着“追求、员工、技术、精神、利益”的宗旨。现拥有一批精干的管理人员和一支高素质的专业技术队伍。我们以质量为生命、时间为信誉、价格为竞争力的经营信念，立足于国内外市场。目前已在全国各大院系，和研究单位均有销*(代"售")，也得到了客户的认可。百奥莱博生产的SP6体外转录试剂盒等试剂进入飞速发展期，为了更好的服务客户，公司长期储备海量库存，以此助推中国科技的快速发展，更好的造福人类！

更多有关SP6体外转录试剂盒折扣价的价格及使用说明等，请联系我们的业务经理王欣女士咨询，我公司还销*(代"售")以下产品：

编号	类别	名称
BTN100307E	DNA纯化	酸洗玻璃珠(1500～2000μm)
BTN121004	克隆与表达	大肠杆菌Rosetta(DE3)化学感受态细胞
BTN140379	克隆与表达	大肠杆菌Rosetta感受态细胞
BTN91104B	探针标记及检测	Denhardt溶液(非同位素探针)
BTN3092	核酸电泳和回收	*化乙锭清除剂(EB清除剂)
BTN140654	其他生化试剂	HEPES溶液(1M,pH7.3)(DNA级)
BTN140389	克隆与表达	酿酒酵母Y187感受态细胞
BTN131034	基因组研究	人基因组DNA混合液
BTN140429	克隆与表达	大肠杆菌M15化学感受态细胞
BTN80918	RNA纯化	Tris盐*(代"酸")溶液(1M,pH8.5)(RNase-free)
BTN90602J	核酸电泳和回收	DNA marker(λ-EcoT14 I)
BTN101205	其他生化试剂	1M Tris-HCl(pH7.5)(DNA级)
BTN131222	蛋白质研究	2M咪唑溶液
BTN90602F	核酸电泳和回收	DNA marker(λ/EcoRI+HindIII)
BTN130536	蛋白质研究	抑*肽酶溶液(5mg/mL)
BTN151201	蛋白质研究	预染蛋白Marker(11～180kD)
BTN100839	核酸扩增(PCR)	PCR级甲酰胺
BTN100603	蛋白质研究	银染清除剂
BTN130873	工具酶	TEV蛋白酶
BTN120520	克隆与表达	大肠杆菌OrigamiB(DE3)化学感受态细胞
BTN160686-25A	克隆与表达	SuperTOPO-Amp TA克隆试剂盒
BTN140645	克隆与表达	大肠杆菌TB1感受态细胞
BTN81208	蛋白质研究	印迹膜抗体稀释液

 

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