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- 详细信息
- 技术资料
- 保存条件:
常温运输
- 保质期:
一年
- 英文名:
One-tube virus RNA extraction kit
- 库存:
942
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
百奥莱博专业生产销*(代"售")北京BTN3073型一管式病毒RNA提取试剂盒哪里卖,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:北京BTN3073型一管式病毒RNA提取试剂盒哪里卖
英文名:One-tube virus RNA extraction kit
品牌:百奥莱博
编号:BTN3073
规格:100次
产地:国产|进口
本试剂盒是专用于血清(血浆)等液体样品中提取病毒RNA的纯化试剂。本产品回收率极高,尤其适合于整合到临床RT-PCR检测试剂盒中。且能用于提取其他液体样品和微量样品。
产品特点:
1. 回收率达到90%以上,高于绝大部分基于离心柱的提取方法。
2. 灵敏度高,RT-PCR检测到的最终灵敏度可以达到50-100拷贝/mL(对HIV和HCV)。
3.一管式操作,不使用离心柱,整个操作过程均在室温下完成。
4. 无毒环保,不需要使用*酚和*仿等有毒的有机溶液。
5.可放量,如果加上病毒离心富集步骤,每管最多可以处理样品1.5mL。
试剂盒组成:
| 成分 | 规格 |
| 溶液A | 30ml |
| 说明书 | 1份 |
储存条件:常温运输,4℃保存,有效期一年。
使用方法:
一:准备工作
1. 血浆的抗凝剂必须是EDTA或ACD,不能是肝素。使用ACD时由于所加入ACD会增加体积,样品会被稀释,得到的病毒滴度会比使用EDTA低15%左右。
2. 用于制备血浆的全血在2-25℃放置的时间不能超过6小时,在此时间内,可以室温800-1600g离心20分钟,上清即为血浆。
3. 血浆可以在2-8℃或更低温度下运输,可以在室温放置一天,2-8℃放置5天,-20℃以下长期保存。
4. 血浆最好按0.6mL/管的量分装保存,以避免反复冻融。
5. 实验前所有试都必须放置在室温。
6. 实验当天新鲜配制70%的乙醇。
二:病毒提取操作
1. 标记1.5-2mL螺旋盖塑料离心管(如Sarstedt CAT#:782.694.006),为避免污染,建议不要使用压盖式塑料离心管。注意设置阳性和阴性对照。
2. 每管(包括正负对照管)中加入0.6mL病毒RNA提取试剂盒溶液(需提前融化)。
3.快速震荡样品几秒,再短暂离心,取0.2mL液体样品加入到已经装有0.6mL病毒RNA提取试剂盒溶液的管中。如果病毒需要富集,可以将1.5mL液体样品在4℃ 24,000 g冷冻离心60分钟,移弃1.3mL上清后在取用样品。
4.在正负对照样品管中分别加正负对照样品。
5.室温放置10分钟。此间可以在每个管上做个标记,以在下步区别向心面和离心面。
6. 振荡数秒后加入0.7mL室温异丙醇,旋紧盖后振荡30秒混匀,把离心管的向心面对向转头的中央,13,000-15000g室温离心至少15分钟。
7.小心移弃上清,注意不要触及管底和管壁离心面的RNA沉淀(此时可能看不见)。
8. 加入1.0mL室温70%乙醇,振荡数秒后 15000g室温离心5分钟。注意:在离心机中放置离心管时将其向心面对向转头的中央。
9.小心移弃上清,注意不要触及管底和管壁离心面的RNA沉淀(此时呈膜状沉淀)。
10. 再短暂离心数秒,用移液器移弃残留液体(70%乙醇),否则它会影响后续反应。
11. 加入200μl RNase-free水或百奥莱博的1×液相RNase Scavenger(能灭活残留的RNase,而RNase-free水无此功能),用移液枪仔细吹打离心管管底和管壁离心面的膜状RNA沉淀,溶液将呈混浊状,含少量不溶物。由于不溶沉淀物中含有RNA,所以不要离心后取上清使用,必须取混合液使用,哪怕很浑浊。
12. 直接取适量用于RT-PCR,如果溶于200μl水,同时样品使用量不超过RT-PCR体系的1/2,不溶物一般不会影响RT-PCR。剩余样品可以室温放置2小时,也可保存于-80℃保存一个月。
疑难解答:
Q:提取液体样品/病毒核酸(RNA或DNA)为何很难?
A:原因一是量少。病毒颗粒中的RNA或DNA是作为遗传物质保存,每个病毒最多只携带几个拷贝(而一个细胞中有上万个RNA分子),同时其长度也十分有限(是细胞基因组的万分之一以下),样品中病毒数往往也不是很多,使得样品中核酸的绝对量几乎是微乎其微,十分容易丢失。另外,由于得到的核酸量少,不能使用电泳和测OD检测,只能通过PCR或RT-PCR检测,而病毒RNA往往具有稳定的二级结构,进一步增加了鉴定的难度(即不知道是RNA提取的问题还是RT-PCR的问题)。
Q:如何判断是病毒RNA没提取出来还是提取出来了但没有RT-PCR成功?
A:在RT-PCR反应中加阳性和阴性对照。
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·木材DNA提取试剂盒
编号:BTN130941
英文名称:Timber DNA extraction kit
规格:50次
·超快核酸电泳液(干粉)
编号:BTN51210
英文名称:SuperBuffer-2 Powder
规格:50L
SuperBuffer-2是我司在SuperBuffer基础上开发的DNA/RNA 两用快速电泳液。它跟SuperBuffer一样,能以高达30 V/cm的电压电泳,达到快速电泳的目的。跟SuperBuffer 不同的是,本产品对盐离子浓度敏感度低,同时还能用于RNA电泳。
产品特点:
1.快速,电泳时间短,对分辨率要求不高的电泳(如PCR和酶切检测等)甚至可以在5-10分钟内完成。
2. 不影响后续的Southern杂交,DNA胶回收和DNA连接等反应。
3. 价格与TBE(干粉)相当甚至更便宜。
4. DNA胶回收率高于使用TAE和TBE电泳的胶回收。
储存条件:常温保存和运输,有效期两年。
使用方法:
一:溶液的配制
将本产品全部加到一个干净的容量适当的容器中,按下表的用量加入蒸馏水并在室温下用磁力搅拌器搅拌,直到干粉完全溶解(一般需要30分钟左右)。
配法一(配制20X浓缩液):加2.5升得到20×工作液
配法二(直接配制工作液):加水50升得到50×工作液
注:其他浓度的浓缩液配制可以按比例计算,但浓缩液浓度不能超过20×,否则干粉不能全部溶解。由于干粉含多种未彻底混合均匀的成份,所以必须一次性全部用于溶液的配制。如果缓冲液(浓缩液或工作液)长时间不用,最好灭菌后放4℃长期保存。
二:DNA电泳
将SuperBuffer-2浓缩液用蒸馏水稀释到1×,除了需要使用较高电压才能得到快速的电泳结果外,操作跟使用TAE和TBE基本一样。需注意的地方是:
1.电压:在SuperBuffer-2溶液中既可以使用常规电压,也可以使用较高电压,只是使用常规电压时,其快速的优越性就体现不出来。使用较高电压时,由于各电泳槽结构不同,最佳电压需要稍做摸索。第一次最好将工作电压调到最高电压的80%左右,即平均25 V/cm(电极距离)。对一般minigel,一般可以用250-350V 跑5-10分钟;对大的电泳槽,可用400-450V 跑5-10分钟。每次根据电泳结果和缓冲液温度决定各电泳槽的最佳工作电压和时间。一般电压越高,电泳时间越短。若在电泳时发生电流或电压逐渐下降的现象,请检查电泳仪是否设置了电流上限或功率上限。缓冲液电泳次数超过3次或缓冲液中有细菌/真菌生长也会出现此现象,需要更换新的缓冲液。
2.胶浓度:建议将琼脂糖凝胶的浓度控制在0.8%左右,对于长度在100bp以下的DNA片段,可以将琼脂糖凝胶的浓度提高到1.2%左右。由于每次溶胶过程中会丢失水份,所以最好在溶胶后适当补充水份(可以前后称重),否则胶浓度会逐渐增加,DNA的移动速度会减低、产热会增加。使用0.8%左右的琼脂糖凝胶的好处是一方面可以节约胶的用量,另一方面可以使DNA的泳动速度更快,同时还能够提高DNA的回收率。
3.染色:如果使用EB,最好把染料加入到融化后的凝胶中(只是EB的终浓度最好为0.4 -0.5μg/mL,比使用TAE和TBE时稍高),但也可以加入到电泳缓冲液中或/和电泳上样液中。如果使用百奥莱博低毒染料绿如蓝,最好将染料加入到融化后的凝胶中。如果只有胶中有染料,则长时间电泳后(超过20分钟),大部分染料在高压下会与DNA 分离,DNA 条带可能会看不见或看起来很淡,此时应该再染色一次。在染色液中加入一定的量的NaCl(终浓度≥0.05 mol/L)能提高染色效果。SuperBuffer-2与SYBR Green I 也有良好的兼容性,可以结合使用。
4. DNA 条带扭曲:DNA样品中所含SDS 量过高时(SDS 主要来于上样液),DNA条带将出现扭曲,影响实验效果。建议使用不含SDS的上样液。
5. 反复使用:1×SuperBuffer-2电泳液至少可以重复使用2-3次,如果使用大电泳槽,可以重复使用的次数会更多。
6. TAE和TBE胶:已经用TAE和TBE电泳液配置好的琼脂糖凝胶可以直接放入1× SuperBuffer-2电泳液中按上述电泳条件电泳,但有时候会有扭曲现象。
三:RNA电泳
跟DNA电泳一样,必须在使用前用水将SuperBuffer-2溶液稀释到1×,其使用方法跟DNA电泳的主要区别是:
1.电压:RNA电泳时,最高使用电压大约只有DNA 最高使用电压的一半左右,所以一般minigel可以使用150 V左右的电压。由于各实验室电泳槽规格各异,第一次电泳时,最好将工作电压调到跟MOPS电泳一样的电压,每次再逐渐往上调电压和时间,根据电泳结果和测定缓冲液的温度决定今后的工作电压。
2. RNA上样液:RNA必须与含变性剂的RNA上样液混合,并在80℃保温10分钟后冰浴2-5分钟再上样。不能直接将RNA样品上样或使用DNA上样液,否则电泳不但很难得到清晰的条带,并且在加样孔中还会有看似DNA污染的条带出现。推荐使用百奥莱博生产的RNA变性/上样/染色三合一即用型溶液RNAload。
3.胶浓度:RNA电泳最好使用1%-1.5%的琼脂糖凝胶,用1X SuperBuffer-2配制。
4.染色:同DNA电泳。
北京BTN3073型一管式病毒RNA提取试剂盒哪里卖关键词:一管式病毒RNA提取试剂盒,BTN3073,One-tube virus RNA extraction kit
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北京BTN3073型一管式病毒RNA提取试剂盒哪里卖关键词:一管式病毒RNA提取试剂盒,BTN3073,One-tube virus RNA extraction kit
·DNA marker(pBR322/BstN I)
编号:BTN90602G
英文名称:DNA ladder(pBR322/BstN I)
规格:50次
本系列产品为传统的酶切分子量标准,由单一的质粒DNA或噬菌体DNA经单个限制性内切酶完成消化后,加热灭活而成。每次上样总DNA含量已知,每条带的含量可根据其摩尔数的比值计算出来。本系列产品成分中已经含有上样缓冲液,所以可以直接上样电泳。得到的电泳条带长度准确,明亮清晰,背景较低,稳定性很好。
每次加样量为5μL,可用于相对定量。本系列产品与各种琼脂糖和各种电泳缓冲液兼容。
储存条件:低温运输、-20℃保存,有效期一年。
使用方法:直接上样电泳,每次加样量为5uL。
使用效果:
疑难解答:
a)如对带型要求较高,建议使用0.8-1.5%琼脂糖凝胶(对SuperBuffer-2缓冲液,电压为250-400V)或1.5-2.0%琼脂糖凝胶(对TAE或TBE缓冲液,电压为80V),同时适当延长电泳时间。
b)电泳图象的质量与琼脂糖、电泳缓冲液有关。请采用高质量的琼脂糖,同时要经常更换电泳缓冲液。
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