- ¥529
- 康朗生物
- 大陆/美国
- KL179701
- 2025年07月12日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃ 避光保存一年
- 保质期：
-20℃ 避光保存一年
- 英文名：
DAB HRP Assay Kit
- 库存：
大量
- 供应商：
上海康朗生物科技有限公司
- 规格：
ml/盒
用途
• 采用HRP标记的抗体的Western blot检测
• 采用HRP标记的免疫组化或原位杂交实验
特点
• 适用范围广：HRP标记的组织或细胞显色，HRP标记的印迹膜显色
• 简单快捷：显色快，肉眼观察，不需要暗室或特殊照相设备
产品组分及保存条件
| 试剂名称 | 总量 | 保存条件 |
| DAB Reagent A | 4.5 ml | -20℃ 避光保存一年 |
| DAB Reagent B | 1 ml |
1. 漂洗：
a) 对于组织切片、细胞样品或印迹膜，在与HRP标记的抗体或探针孵育后，用相应的漂洗液漂洗3~5次，每次3~5分钟；
b) 对于检测内源性辣根过氧化物酶的组织或细胞样品，在适当固定后，也用适当洗涤液洗涤3-5次，每次3-5分钟；
2. DAB工作液配制：以配制25ml体系为例,向 24.5 ml PBS 中加入0.5 ml的 DAB Reagent A,混匀后加入3-5 μl的DAB Reagent B。工作液请新鲜配制，避光2小时内使用。
3. 在最后一次漂洗完毕后，去除漂洗液；
4. 加入适量DAB染色工作液，确保能充分覆盖样品；
5. 室温避光孵育数分钟至数小时直至显色至预期深度；根据目标物含量的多少可以对DAB Reagent A的使用量进行调整；
6. 去除DAB染色工作液，用蒸馏水漂洗1~2次终止显色反应；
7. 对于组织切片或细胞样品，显色反应终止后，如有必要可用中性红染色液(neutral red staining solution)染色，以便于观察；
8. 对于印迹膜，显色反应终止后，可以室温晾干避光保存。
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文献和实验底物范围较广，包括二氨基联苯胺 (DAB)、氯萘酚和氨乙基咔唑等。 二氨基联苯胺/金属盐 DAB 是辣根过氧化物酶最敏感、常用的底物。它产生强烈的棕色产物，在水和醇中不溶解。多数情况下，推荐在 DAB 中加入不同的金属离子。当加入金属盐如钴、镍至底物液中，辣根过氧化物酶可以更加敏感。此类反应产物呈暗蓝灰色至黑色，且在水及醇中稳定。DAB/金属盐染色应用的组织染色范围较广。 1. 需要的溶液和特殊设备 DAB，0.05 mol/L Tris 缓冲液 (pH7.6), 0.3％ (W
化物酶，然后用PBS洗涤三次，每次 5min。4 ） 加入一抗（用3%BSA-PBS封闭液1:50稀释一抗），37℃湿盒孵育1h。5 ） 加入Post-blocking室温湿盒孵育30min,然后用PBS洗涤三次，每次5min。6 ） 加入稀释好的辣根过氧化物酶（HRP）标二抗，室温下湿盒孵育30min。7 ） 用PBS洗涤玻片5次，每次5min。8 ） 按照DAB试剂盒说明添加显色液，避光显色30s-5min。用蒸馏水终止显色反应。9 ） 苏木精进行复染色3min,用蒸馏水冲洗。10
2）将混合物覆盖在膜表面，1-2分钟，摇晃使均匀。 3）用保鲜膜把膜包起来，放入夹板中。 4）在暗室中将X光片，覆盖在膜的上面，夹好夹子，曝光1min。 5）显影、定影。 6）根据结果调整曝光时间和曝光区域，得到最佳结果。 注意：荧光在一段时间后会越来越弱。 2.DAB显色 DAB（3,3二氨基联苯胺）和HRP反应产生棕色的不溶终产物。这种棕色沉淀不溶于酒精和其它有机溶剂，对于必需使用传统复染和封固介质的免疫组化染色应用特别理想。 对于AP标记的二抗我们选用BCIP
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